一种以药用真菌实现对马钱子降毒存效的固体发酵方法技术

一种以药用真菌实现对马钱子降毒存效的固体发酵方法，其步骤如下，对发酵所用的裂褶菌、竹黄菌、单色云芝菌、鸡油菌、白僵菌或蝉花菌进行活化和扩增培养，对作为药性基质的马钱子进行烘干、粉碎、加水浸润、蒸汽高压灭菌等处理，将上述六种菌种分别接种于药性基质马钱子上，在一定的条件下进行固体发酵，收集所得各自相应的发酵产物，低温干燥，得到马钱子的六种药性菌质－裂钱菌质、竹钱菌质、单钱菌质、鸡钱菌质、白钱菌质和蝉钱菌质。本方法工艺简便合理，可得到实现对马钱子降毒存效的六种药性菌质，以用于治疗。本发明专利技术的六种药性菌质在毒性上明显低于马钱子，在止痛、抗炎等方面有确切疗效，可保持马钱子原有的主要药效。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种用生物技术实现对有毒中药降毒存效的方法，特别是涉及 。二、
技术介绍
(现有技术)1、现有技术的主要相关内容中药马钱子，又名苦实、番木鳖、马前子，为马钱科植物马钱S"c/zmw m/x-vo脂'cflL.的干燥成熟种子。马钱子性寒，味苦。归肝、脾经。《医学衷中参西录》中说它"开通经络，透达关节之功远胜于它药"，具有散结消肿、通络 止痛之功效，主要用于治疗面神经麻痹、半身不遂、手足无力、小儿麻痹后遗 症、淋巴结结核、跌打损伤和骨折等症。马钱子有剧毒，有毒成分是士的宁(番木鳖碱，strychnine)和马钱子碱(布鲁生，brucine)， 二者均对脊髓后角细胞 有兴奋作用，过量使用可引起肌肉强直性痉挛，抑制呼吸中枢，最终因窒息或 呼吸中枢麻痹而死亡。马钱子药典规定的最大用量为炮制品0.3g，但用量太小 达不到疗效，因此医生往往增加其用量来追求疗效，从而出现毒性反应。曾有 内服马钱子7粒致死的报道。成人一次服5 —10mg士的宁可致中毒，30mg可 致死亡。由于马钱子在临床上用药很不安全，因此如何让它毒性得以降低而又 疗效得以保存(简称"降毒存效")，保障其安全用药是亟待解决的问题。目前马钱子主要用炮制法降低毒性，应用较多的主要有两种，即砂烫法和 油炸法，其中砂烫法已被《中华人民共和国药典》收载为法定方法。用传统方法对马钱子炮制减小其毒性 过程中，由于士的宁的熔融温度为286—290。C，当炮制温度超过270。C时，士 的宁的含量就相应地减少，如生品士的宁的含量为1.18%;砂烫(250—300°C) 含量降为0.89%;油炸(200—30(TC)含量降为0.58%。故炮制马钱子时，必 须掌握好温度与时间，才能降低或消除其部分毒性而又保存药效(参见孟宪 纾，李焕秋.中药制剂学.北京人民卫生出版社，1986: 14)。通过微生物发酵中药，使微生物中丰富的酶系与中药中复杂的化学成分反 应，可能会产生一些中药中不具有的成分或改变一些成分含量的变化，它是现代中药研究的新内容。在上世纪80年代有人以药用真菌槐耳为发酵菌种，以农副产品为营养基质 上进行固体发酵，其发酵产品被称为"槐耳菌质"。根据真菌使药材发酵会引起 其组织成分变化，导致性味功能改变的原理，在营养基质中掺用一定量的药材 黄芪作为发酵基质，在一定条件下发酵后，发酵产品被称为"槐芪菌质"，其有 关各项免疫指标均明显优于槐耳菌质。药用真菌新型(双向性)固体发酵工程(简称"双向发酵")的关键是将以 往固体发酵中的发酵基质由富含碳、氮等营养的甘蔗渣、麦麸等农副产品(被 称为"营养基质")改为黄茛等中药材(被称为"药性基质")，药性基质既能提 供真菌生长所需营养物质，其所含成分又会受真菌酶的作用而被发生改变，其 产品被称为"药性菌质"。药性菌质具有可能比该药用真菌或药性基质本身或两者简单相加更好的药效、更低的毒性。不同药用真菌分别去发酵同一种药材，所产生的药性菌质成分的性、效不 同，而用同一种药用真菌分别发酵不同中药材所产生的药理效应也会不同。因 此，不同药用真菌与不同中药材可交叉组合形成大量发酵组合，可得到大量不 同性质、效用的药性菌质。目前已有一项公开了采用双向发酵以实现对雷公藤降毒存效、从而提高雷 公藤的应用范围和开发前景的专利(公开号CN 1911262A， 2005.8.8)。我们 曾报道了双向发酵前后马钱子生物碱含量及其HPLC指纹谱的变化,但迄 今为止，尚未见针对马钱子以药用真菌进行固体发酵实现对其降毒存效，并用 于制备止痛、抗炎药物用途的报导。 2、现有技术存在的问题和缺点现代研究已知马钱子的中毒与其中士的宁含量有关，而士的宁受热易分解 而被破坏，且与受热的时间、温度成正比，即受热时间越长，温度越高，士的宁含量越少，但在实际的炮制如砂烫和油炸过程中马钱子受热温度往往得不到 有效的控制。有的固体发酵法用于有毒中药降毒存效的方法，往往在发酵基质中加入营 养丰富而成分复杂的农副产品，从而使产生的药性菌质的,化学成分变得更加复 杂，对进一步寻找其中毒性成分的转化规律、筛选新的活性药物造成极大困难。 三、
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，而提供一种以药用真 菌实现对马钱子降毒存效的固体发酵方法。本专利技术的原理是马钱子除了含有既是有毒成分又是有效成分的士的宁等 生物碱外，尚含有丰富的蛋白质、脂肪等营养成分。在适宜的条件下，接种于 马钱子上的药用真菌利用其蛋白质、脂肪等真菌所必需的营养物质生长，菌丝 在生长的过程中分泌出大量的酵素(胞外氧化酶)，在空气中氧的参与下形成 H202，触发启动一系列自由基链反应，使马钱子的毒性生物碱士的宁发生自发 反应而降解，包括对N原子的氧化(产生士的宁氮氧化物)，或醚键的断裂(产 生异型生物碱——异士的宁)，或产生一些结构更合理且活性更好、毒性更低的 化合物，所产生的马钱子药性菌质毒性降低，且保存了马钱子原有的止痛、抗 炎作用。本专利技术所要解决的技术问题是通过以下的技术方案来实现的。本专利技术是一 种以药用真菌实现对马钱子條毒存效的固体发酵方法，其特征在于方法步骤如下(1) 选择药用真菌菌种，并对药用真菌菌种进行活化，进一步扩增培养，得 到该菌种的菌球液；(2) 对药性基质马钱子进行烘干、粉碎、加水浸润和蒸汽高压灭菌，取出冷却；(3) 将上述菌种的菌球液接种到药性基质马钱子上，进行固体发酵；(4) 收集马钱子固体发酵产物，低温干燥，得该菌种的马钱子药性菌质。本专利技术所要解决的技术问题还可以通过以下的技术方案来进一步实现。以 上所述的，其特点是， 步骤(1)中所述的六种药用真菌是裂褶菌、竹黄菌/a P. Henn]、单色云芝菌、 鸡油菌、 白僵菌 或蝉花菌中的一种。以上所述的，其特 点是，在步骤(1)中所述的对真菌菌种的活化是采用的固体培养基培养，扩增 培养采用的是液体培养液摇瓶培养。以上所述的，其特 点是，在步骤(2)中所述的药性基质是指马钱子，即马钱科马钱属植物马钱子 S/ yc/i"os m/x-vom/ca L.的种子，对马钱子烘干，温度为60—80。C，时间为6 —8h;粉碎成粗粉，过5 —IO目筛；按马钱子粗粉的干重加180%—220%的水， 浸润0.5 — lh;蒸汽高压灭菌，蒸汽压力为15磅(121°C)，灭菌60—90min， 冷却后贮存备用。以上所述的，其特 点是，在步骤(3)中所述的固体发酵的发酵瓶体积为500—1000ml;每瓶装马 钱子粗粉160-360g，接种菌种的菌球液6-10ml，发酵温度为24—28'C;在培养 箱内覆盖吸满水的厚纱布，每天向纱布上喷水，使空气相对湿度保持在70%— 90%;接种后在无菌条件下用接种针在药性基质上扎孔，以加大发酵瓶内的通 气量；发酵天数为30—45天。以上所述的，其特 点是，在步骤(4)中所述的药性菌质是指药用真菌(发酵菌种)在马钱子药性 基质上生长发酵后而而获得的产物，在60—80'C干燥，干燥时间为8 — 16h，置 于阴凉干燥处，密封贮藏。这种发酵产物包含真菌生长形成的菌丝体以及被发 酵后的药性基质残留物，由于二者紧密结合、无法分开，因此统称为药性菌质。 马钱子被裂褶菌、竹黄菌、单色云芝菌、鸡油菌、白僵菌和蝉花菌发酵后本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种以药用真菌实现对马钱子降毒存效的固体发酵方法，其特征在于该方法的步骤如下：　　　　（１）选择药用真菌菌种，并对药用真菌菌种进行活化，进一步扩增培养，得到该菌种的菌球液；　　　　（２）对药性基质马钱子进行烘干、粉碎、加水浸润、蒸汽高压灭菌，取出冷却，备用；　　　　（３）将上述菌种的菌球液接种到药性基质马钱子上，进行固体发酵；　　　　（４）收集马钱子固体发酵产物，低温干燥，得到马钱子药性菌质。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：潘扬，蔡宝昌，陈龙，刘学湘，张弦，蒋亚平，
申请(专利权)人：南京中医药大学，
类型：发明
国别省市：84[中国|南京]