一种宣木瓜组织培养快速繁殖的方法技术

一种用ＭＳ作基本培养基，分别通过芽和根诱导进行宣木瓜组织培养快速繁殖的方法，其特征在于采用宣木瓜种子子叶或种子胚进行组织培养。当采用种子子叶进行组织培养时，诱导不定芽的最佳培养基配方是ＭＳ＋ＮＡＡ　　０．５ｍｇ／Ｌ＋ＴＤＺ　１．０ｍｇ／Ｌ，诱导生根的最佳培养基配方是１／２ＭＳ＋ＩＢＡ０．２ｍｇ／Ｌ；当采用种子胚进行组织培养时，诱导不定芽的最佳培养基配方是ＭＳ＋ＢＡ　　０．５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．２ｍｇ／Ｌ，诱导生根的最佳培养基配方是１／２ＭＳ＋ＮＡＡ０．２ｍｇ／Ｌ。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属林业中通过组织培养的植物再生
，具体涉及一种宣木瓜组 织培养快速繁殖的方法。二
技术介绍
宣木瓜(C7zaewo附e/M s; ec/ara Nakai.)属于蔷4菱科，是落叶或半常纟录灌木或小 乔木，枝密多刺可作绿蓠。单叶互生，有短柄和托叶。花单生或簇生，萼片5, 花瓣5,果实为梨果，种皮革质，无胚乳。宣木瓜在各地也常见栽培，早春先花 后叶，花色大红、粉红、乳白且有重瓣及半重瓣品种。宣木瓜为药用之正品，是中国四大中药材之一，距今已有两千多年的栽培历 史。宣木瓜以安徽宣城所产宣木瓜最为著名，被载入《名医别录》，列为中品。 宣木瓜被《本草纲目》收载于果部，引苏颂语"木瓜处处有之，而宣城者为 佳"。宣木瓜含有十九种氨基酸、十八种矿物微量元素，以及大量维生素C,同时 还含有皂甙、黄酮、苹果酸、齐墩果酸、枸橼酸、柠檬酸、酒石酸、抗坏血酸、 反丁烯二酸、鞣质等，含有过氧化氢酶、酚氧化酶、氧化酶，特别富含超氧化物 岐化酶(SOD)等。果千制后入药，有驱风、舒筋、活络、镇痛、消肿、顺气之 效。宣木瓜果实加工后能食用，可制成木瓜饮料、木瓜醋、木瓜酒等。由于生长 在不同的环境中，不同种源的宣木瓜在性状和药物含量方面都存在一定的差异。 有研究表明，宣木瓜有机酸和醇类的含量分别为普通皱皮木瓜的2倍和3倍。因此 加强对不同种源皱皮木瓜的保护，可为未来培育药用木瓜新品种提供丰富的遗传 资源。传统宣木瓜的繁殖方式多采用的种子与扦插繁殖，繁殖效率较低，而植物组 织能快速高效的完成植物的繁殖过程。植物组织培养是20世纪初，以植物生理学 为基础发展起来的一 门新兴技术。在Schleiden和Schwann创立的细胞学说基础 上，1902年，德国植物学家Haberlandt预言"植物细胞具有全能性，每个细胞都像 胚胎细胞那样，可以经过体外培养成为一个完整的植抹"。1937年，法国植物学 家Gautheret等人第一次用烟草的茎段形成层和胡萝卜根的小块组织，使细胞增殖 并诱导愈伤组织，但没诱导出器官。1958年，Steward等人在胡萝卜细胞悬浮培养 中成功地诱导形成了胚状体，并由胚状体发育形成完整植才朱。进入20世纪60年代以后，植物组织培养工作己经遍及世界大多数国家，并获 得了突飞猛进的发展，组织和器官培养技术日趋成熟和完善，目前，植物组织培养技术已成为生物学科中的重要研究技术和手段之一 。植物组织培养体系的建 立，对于植物珍稀名贵品种的繁育与脱毒、种质资源保存、体细胞突变体的诱发 及筛选、人工种子制造、细胞次生代谢物的生产、细胞工程和基因工程等方面都 具有重要的意义。植物组织培养技术进一步的研究和应用，将对传统的植物生产 模式产生深远的影响。目前，植物组织培养技术主要有以下四种方法1. 植物的离体快速繁殖植物离体快速繁殖是目前植物组织培养应用最多、最有效的一种方法。新育 成或新引进的良种、选择的优良单抹、自然和人工诱变的有用突变体等遗传材 料。通过组织的离体快繁，可在短时间内大量繁殖， 一两年内即可在生产上广泛 应用。如自然条件下的芽变材料，人工诱变育种获得的优良遗传材料等，通过组 织培养可以大量繁殖，从而应用于生产。在植物离体快繁中，茎尖脱毒技术对提高一些经济作物的品质有很重要的作 用。植物一旦感染病毒，轻则导致树型衰退，产量锐减，品质变劣，严重则将对 感染的植抹产生毁灭性的伤害。以营养繁殖为主的植物种类如马铃薯、甘薯、大 蒜、百合等，长期的无性繁殖使病毒在体内积累，引发病毒病，严重影响果实的 产量和品质以及花和叶等的观赏价值。但是，感病植林并非每个部位都带有病 毒。利用植物茎尖脱毒技术，可以获得脱毒苗，从而大大提高植物的品质和产 量。早在1943年，White就发现植物生长点附近的病毒浓度很低甚至无病毒。茎 尖没有感染病毒主要原因是在茎尖部位植物生长速度较快，而病毒的转移速度相 对较慢。因此，截取植物健康的茎尖作为外植体，经过培养就可以得到脱毒苗， 再经过快速繁殖即可以得到大量的脱毒苗。1960年，Morel第一个用茎尖培养法 得到脱毒兰花，此后在多种植物中获得成功。2. 单倍体、多倍体的繁殖单倍体植林是由具有单倍(单套)染色体的花粉或卯细胞诱导产生的植抹。单 倍体育种具有高速、高效率、基因型纯合等优点。因此，通过花药或花粉培养的 单倍体育种，已经作为一种崭新的育种手段问世，并已培育形成大面积种植的作 物新品种。Guha(1964)和Maheshiwari(1966)成功在曼陀罗的花药培养中，由花粉 诱导出单倍体植林。迄今为止，世界范围内已有75种以上的植物获得单倍体植 物。多倍体在自然界分布比较普遍，通常表现出花形较大，果实较大等多倍体植 林特有的"巨型"特征。因此具有较高的观赏价值和经济价值。通常通过以下两种 途径获得多倍体 一是自然加倍；二是人工诱变，如添加适量的诱变剂(秋水仙 素等)。如果将人工诱变和组织培养技术相结合，将大大提高多倍体育种的效 率。组织培养技术和人工诱变相结合，使黄花菜(/^附^00 〃& "7n力e Baroni.)力口倍、选择和快速繁殖同步进行，从而缩短了育种的时间。利用此项技术，目前已 在多种植物材料中成功诱导出多倍体。3. 胚培养和胚乳培养植物离体胚培养能够解决远缘杂交的败育问题，那些不能形成具有生活力种 子的杂交组合可通过离体胚的培养获得杂种植抹。在育种上，莱巴赫用胚培养技 术解决宿根亚麻(丄/mw2 L.)和奥地利亚麻的杂交种子不能萌发的问题，使它们成熟并得到杂种植;昧。莱巴赫的先驱工作为用培养离体胚的方法来克 服杂交性的障碍奠定了基础，从而开创了植物胚培养应用于生产实践的时代。 1990年，母锡金等利用胚拯救技术成功地得到美味猕猴桃x毛花猕猴桃的种间杂 种植林。此后，离体胚培养在多种植物间展开。胚乳培养可以获得三倍体植林，为诱导形成三倍体植物开辟了一条新途径。 Nakano等人从未成熟的水稻胚乳培养中分化得到2棵植林，证明禾谷类胚乳同样 具有分化植抹的潜能。利用柑桔胚乳离体培养可以获得无核柑桔，且比2x与4x杂 交获得三倍体快得多。目前已用30多种植物的胚乳进行了离体培养。4. 人工种子和离体种质保存人工种子指具有良好发育的体细胞包裹人工胚乳和人工种皮而形成的一种繁 殖结构。由于人工种子不受时间限制，短时间内可以大量繁殖无病毒材料，因此 对于多年生植物和育性不良或是难以进行有性繁殖的植物，通过人工种子繁殖具 有明显的优势。生产人工种子首先需要大量的胚状体，目前，能大量产生胚状体 的植物约有43科，100余种。人工种子的应用前景取决于生产成本，人工种子高 昂的生产成本是其发展的最大障碍。利用传统的方法保存种质资源需要耗费大量的人力与财力，而且难以长期保 存。超低温保存的过程是将无菌材料如无菌芽、体细胞胚等，经过冷冻防护处理 后，存放于-196°液氮中保存。当需要种质材料时，可经过解冻、再培养诱导器官 分化和植物再生获得。由于超低温保存具有节约资源和种质材料等优点，因此为 种质保存开辟了一条新的途径。近几年来，国外用玻璃化超低温保存法成功保存 的园艺作物品种有樱桃、甜樱桃、梨、苹果等几十余种，国内在该领域也取得了 一定的进展。迄今为止，通过组织培养器官本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用ＭＳ作基本培养基，分别通过芽诱导和根诱导进行宣木瓜组织培养快速繁殖的方法，其特征在于采用宣木瓜种子子叶或宣木瓜种子胚进行组织培养。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：尹增芳，叶建伟，张巧平，何祯祥，赵治芬，
申请(专利权)人：南京林业大学，
类型：发明
国别省市：84[中国|南京]