一种海洋氧化短杆菌碱性蛋白酶的提取方法技术

一种从海洋氧化短杆菌（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ　　ｏｘｙｄａｎｓ）发酵液中提取碱性蛋白酶的方法，包括硫酸铵沉淀、ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ　　Ｆａｓｔ　　Ｆｌｏｗ离子交换层析、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ　　Ｇ－２００凝胶柱层析、ＰＥＧ２００００浓缩。本发明专利技术的优点是方法简单、回收率高且酶的活性高，提纯得到的酶具有良好的热稳定性ｐＨ耐受性。为洗涤、制革、丝绸等工业中碱性蛋白酶的应用提供新酶源。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种从海洋氧化短杆菌（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍｏｘｙｄａｎｓ）发酵液中提取碱性蛋白酶的方法，其特征在于由以下方法组成：（１）在发酵上清液中边搅拌边加入硫酸铵至终浓度为４０％－５０％，搅拌０．５ｈ后，４℃，１００００ｒ.ｍｉｎ↑［－１］离心２０ｍｉｎ，收集沉淀物Ａ；（２）将沉淀物Ａ用０．０１ｍｏｌ.Ｌ↑［－１］ＰＢＳ溶液悬浮，然后装入透析袋，用０．０１ｍｏｌ.Ｌ↑［－１］ＰＢＳ溶液透析除盐，４℃放置１２小时；（３）倒去透析袋外的溶液，在透析袋外放ＰＥＧ２００００，４℃放置，浓缩至１／５体积，得到粗酶样；（４）将粗酶样上ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ　ＦａｓｔＦｌｏｗ离子交换柱，用０．０１－０．１ｍｏｌ.Ｌ↑［－１］ＰＢＳ，以流速０．１－０．３ｍＬ.ｍｉｎ↑［－１］洗脱，收集洗脱液，检测并合并有酶活性的洗脱液，获得洗脱液Ａ；（５）将洗脱液Ａ上ＳｕｐｅｒｄｅｘＧ－２００凝胶柱层析，０．０１－０．１ｍｏｌ.Ｌ↑［－１］ＰＢＳ洗脱，流速０．１－０．３ｍＬ.ｍｉｎ↑［－１］。收集洗脱液，检测并合并有酶活性的洗脱液，获得洗脱液Ｂ；（６）将洗脱液Ｂ用ＰＥＧ２００００浓缩至１／５体积。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：谢联辉，林白雪，吴祖建，林奇英，黄志强，
申请(专利权)人：福建农林大学，
类型：发明
国别省市：35[]