细胞保存用水溶液制造技术

提供一种细胞保存用水溶液，其不含天然动物源组分例如基础培养基或血清。通过除去天然动物源组分例如基础培养基或血清和控制其他组分和其浓度得到显示高细胞存活率的保存用水溶液。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及能通过简单操作长期保存细胞的细胞保存用水 溶液，和更具体地，涉及无天然动物源组分例如基础培养基或 血清的细胞保存用水溶液。
技术介绍
通常，为防止培养的细胞因连续传代而劣化和被细菌污染 进行深低温保藏以便能长期使用该细胞。已知用于细胞保存的通常方法是在液氮(-19 6 。C )中通过以下保存细胞的方法在含 有二曱亚石风(下文中，称为DMSO)和血清的培养基中悬浮该细 胞；在冷冻管或安瓿中分配该悬浮液；并用程序冷冻机冷却该 悬浮液。依赖于要保存的细胞的类型已经制备了深低温保藏用保存 溶液的各种组合物。例如，已经发展了深低温保藏用无血清培 养基用于在无血清的培养基中培养的培养细胞(例如见专利文 件l)。此外，深低温保藏用溶液的质量因不同的血清种类而改 变。此外，本质上不需要的细胞保存用组分，例如包含在血清 中的各种细胞因子、生长因子和荷尔蒙可改变保存细胞的性质， 因而已经发展了不使用血清的深低温保藏用溶液(例如见专利 文件2)。然而，在专利文件1中公开的无血清深低温保藏溶液包括包 含多种组分的基础培养基。例如，RPMI1640培养基包含很多来 源不明确的氨基酸。也还不知道这些培养基组分对保存细胞的 影响。此外，在专利文件2中使用纯化过的白蛋白。然而，依赖 于白蛋白提纯的程度其还可能被各种组分污染，因而仍然存在关于对细胞的影响的问题。考虑到对保存在含有血清或基础培养基的溶液中的细胞潜 在的影响，特别是用于医学使用，期望发展无天然动物源组分 的化学上定义明确的细胞保存溶液。这种细胞保存溶液包括来 源明确的组分，因而，期待其具有使该溶液的质量保持不变的 优点。不幸地，传统的细胞保存溶液需要基础培养基、血清或血 清替代品，例如血清白蛋白，纯化过的白蛋白和类似物以进行 长期和稳定的细胞保存。因此，至今还没有得到完全无天然动 物源组分的细胞保存溶液。专利文件l: JP 63-216476 A 专利文^f牛2: JP 2002-233356 A
技术实现思路
本专利技术所要解决的问题本专利技术的目的是提供一种无天然动物源组分例如基础培养 基或血清的细胞保存用水溶液。本专利技术的另一目的是提供使所 述水性保存溶液的细胞保存方法。 解决问题的手段作为为解决以上问题的深入研究的结果，通过发现通过调 节其他组分和其浓度排除任何天然动物源组分例如基础培养基 或血清允许细胞保存后显示高存活率的一种水性保存溶液本发 明的专利技术人最后完成了本专利技术。此外，通过用本专利技术的水性保 存溶液制备细胞，专利技术人还完成了细胞保存方法。本专利技术涉及使用根据以下项(1 )至(17)中任一 项所述的细胞 保存用水溶液的细胞保存方法(1)细胞保存用水溶液，包含增稠剂、防冷冻剂和糖，和无天然动物源组分；(2) 根据以上项(1)所述的细胞保存用水溶液，进 一 步包含 pH调节剂；(3) 根据以上项(1)或(2)所述的细胞保存用水溶液，其中该 天然动物源组分是血清和源自基础培养基的组分；(4) 一种细胞保存用水溶液，包括以下组成(a)至(e)并具有 pH6.5至9.0:(a) 1.0至20.0w/vQ/。的防冷冻剂；(b) 1.0至10.0w/v。/o的糖；(c) 0.1至1.0w/vO/。的增稠剂;(d) 0.01至1.0w/v。/o的pH调节剂；和(e) 适量水；(5) 根据以上项(1)至(4)中任一项所述的细胞保存用水溶 液，其中渗透压为1,000mOsm以上；(6) 根据以上项(5)所述的细胞保存用水溶液，其中该渗透 压为1，000至2,700mOsm;(7) 根据以上项(1)至(6)中任一项所述的细胞保存用水溶 液，其中该增稠剂包括羧曱基纤维素(CMC),羧曱基纤维素钠 (CMC-Na),或有机酸聚合物；(8) 才艮据以上项(7)所述的细胞保存用水溶液，其中该有机 酸聚合物为聚丙烯酸钠；(9) 根据以上项(1)至(8)中任一项所述的细胞保存用水溶 液，其中该防冷冻剂为二曱亚砜(DMSO)或丙二醇；(10) 根据以上项(1)至(9)中任一项所述的细胞保存用水溶 液，其中该糖为葡萄糖；(11) 根据以上项(1)至(10)中任一项所述的细胞保存用水 溶液，其中该pH调节剂为磷酸盐緩冲液；(12) —种细胞保存用水溶液，包括以下组成(a)至(e)并具 有pH 6.5至9.0:(a) 5.0至12.0w/vO/o的DMSO;(b) 3.0至5.0w/v。/o的葡萄糖；(c) 0.2至0.7w/v。/。的增稠剂；(d) 0.01至1.0w/v。/。的磷酸盐緩冲液；和(e) 适量水；(13) 根据以上项(1)至(12)中任一项所述的细胞保存用水 溶液，其中要保存的细胞为以下任何细胞淋巴细胞、脾细胞、 胸IU田"包、动物细力包、体干细力包、胚胎干细月包；(14) 根据以上项(1)至(13)中任一项所述的细胞保存用水 溶液，将该水溶液用于医学应用；(15) 根据以上项(1)至(14)中任一项所述的细胞保存用水 溶液，其中该细胞保存方法为深低温保藏；(16) 根据以上项(1)至(15)中任一项所述的细胞保存用水 溶液，其中保存后的细胞存活率为至少80%;(17) 根据以上项(1)至(15)中任一项所述的细胞保存用水 溶液，其中在-80。C保存4天后和进一步在-196。C保存72天后保 持了细胞的增殖能力；(18) 根据以上项(1)至(15)中任一项所述的细胞保存用水 溶液，其中保存后保持了细胞的分化能力；(19) 一种细胞保存方法，包括在根据以上项(1)至(15)中 任一项所述的细胞保存用水溶液中分散细胞；分配该细胞进入 容器中；和使该细胞进行深低温保藏；或(20) 根据以上项(19)所述的细胞保存方法，其中该分配细 胞的数量为1 x 105至1 x 107个细胞/毫升。本专利技术的效果通过本专利技术建立的细胞保存用水溶液无天然动物源组分例 如基础培养基或血清，由于保存细胞被杂质例如牛白血病毒、 朊病毒等污染的可能性低，以致能够将其安全地用于医学应用。 此外，使用本专利技术的细胞保存用水溶液的保存方法能够提供高 存活率和/或保持细胞的增殖潜能和分化能力。此外，因为该溶 液无来源不明确的组分，例如基础培养基、血清等，所以细胞 能够在低成本下保存。附图说明图la是说明保存在细胞保存用水溶液M (实施例6)中的存活细胞数量的图。图lb是说明保存在细胞保存用水溶液M (实施例6)中的增殖细胞数量的图。图2a是说明保存在细胞保存用水溶液M (实施例6)中的细胞分化为成骨细胞的图。图2b是说明保存在细胞保存用水溶液M 的每一种中的细胞分化为脂肪细胞的图。具体实施例方式本专利技术的细胞保存用水溶液涉及包含增稠剂、防冷冻剂和 糖同时无任何天然动物源组分的水溶液来保存细胞。进一 步地， 该溶液涉及包含p H调节剂但无任何天然动物源组分的水溶液。 这是因为不知道天然动物源组分对要保存的细胞的影响。本发 明的细胞保存用水溶液的特点是该溶液的组成只包括不影响要 保存的细胞的来源明确的组分。因而，期望在该溶液中不包括 天然动物源的组分，不论天然动物源组分的组合如何。不期望包括在本专利技术的细胞保存用水溶液中的天然动物源、I和K中的每一种 、I和K中的每一种 、I和K中的每一种 、I和K(实施例6)中组分包括常本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种细胞保存用水溶液，其包括：增稠剂；防冷冻剂；和糖，该水溶液无天然动物源组分。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：山城尚登，佐濑孝一，大根田修，长野真澄，
申请(专利权)人：日本全药工业株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]