一种从动物血液中得到超氧化物歧化酶和还原型谷胱甘肽方法，其按以下步骤进行：前期处理、提取超氧化物歧化酶和提取还原型谷胱甘肽。本发明专利技术从动物血液中得到超氧化物歧化酶和还原型谷胱甘肽方法，其充分利用了资源，可同时提取超氧化物歧化酶ＳＯＤ和还原型谷胱甘肽ＧＳＨ，简化了生产工艺，降低了生产成本，提高了还原型谷胱甘肽ＧＳＨ的产品质量。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及从动物血液中提取超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase， SOD)和还原 型谷胱甘肽(GSH)的方法，是一种。二
技术介绍
超氧化物歧化酶(即Superoxide Dismutase，简称S0D)是一种广泛存在于各种生物体 内的金属酶。SOD是活性氧清除反应过程中第一个发挥作用的抗氧化酶，能够特异性清除生 物体产生的超氧化物阴离子自由基(02,)，对机体内因自由基引起的各种损伤均有保护和 治疗作用。临床上用于骨性关节炎、类风湿性关节炎、放射与化疗、烧伤、家族性肌萎縮性 侧索硬化等方面的治疗。此外在抗辐射、抗肿瘤和预防衰老等多方面研究发现，SOD与多种 疾病的预防与治疗有着密切关系。S0D的临床诊断、治疗价值正在不断地被人们所认识，已 广泛应用于保健品、食品添加剂及化妆品等其它领域。谷胱甘肽是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸形成的三肽化合物，以还原型(S卩GSH)和氧化 型(GSSG)两种形态广泛存在于生物体内，是主要的抗氧化剂，对细胞具有多种生化作用。临 床用于中毒性肝炎和感染性肝炎的治疗，对抑制白内障以及角膜与视网膜疾病有一定的作 用，对有机物及重金属的解毒、癌症辐射和化疗的保护、对肺纤维化、肝癌、艾滋病也是有 益的联合用药，还广泛用于食品加工业，化妆品工业等。自从McCord和Fridovich于1969年首先从牛的红细胞中提取S0D以来，我国学者已经从牛 血、猪血、鸭血、猪肝、小白菜、人血红细胞及羊血等物质中纯化出Cu，Zn膪OD。其提取纯 化的方法均是在McCord和Fridovich法的基础上加以改进而来的。文献表明，由动物体中提 取纯化的Cu， Zn-S0D，其酶比活明显高于从小白菜叶细胞溶质和叶绿体中纯化的Cu， Zn-SOD。SOD的提取纯化方法参考文献家畜生态学报(2006， 27 (5) : 46)公开报道了乌云达来、孙振钧、王冲等 的牛血铜锌超氧化物歧化酶规模化生产工艺研究，如附图l所示。早在1888年，GSH就已由Rey-Pail-hade， J.首先从酵母中分离出来，1921年Ho沐ins得到 结晶，1929年Hopkins、 Kendall等提出GSH为三肽，1935年由Harington和Mead阐明其化学结 构并加以合成。近些年来，人们已通过直接萃取法、化学合成法、发酵法以及酶转化法等方法成功获得GSH。参考文献中国生化药物杂志(1999， 20 (5) : 246)公开报道了刘晓颖、 丁毅已从猪血中提纯得到了GSH，如附图2所示。参考文献药物生物技术(1999， 6 (4): 203)公开报道了陶锐、吴梧桐、许激扬的酶法制备谷胱甘肽工艺的研究，如附图3所示。目前，制备SOD主要有沉淀法、热变性法、色谱法及超滤法。沉淀法溶剂消耗大、成本 高；热变性法在大规模分离纯化时加热不均匀不易放大；超滤法虽可除去大量小分子杂质， 但少量SOD仍可透过PAN膜，浓縮倍数越大，损失也越多，且浓差极化严重，使膜透液量很快 下降。阎家麒采用先热变性后用PS膜超滤的方法分离纯化SOD，但在含有有机溶剂的酶液中 加热S0D不稳定，而且加热不易均匀能耗大，工艺比较复杂。综上所述，现有公知技术都是分别提取纯化SOD和GSH的，这既造成了资源的浪费，又污 染了环境。
技术实现思路
本专利技术提供了一种，克服了现 有技术的不足，能同时从动物血液中提取超氧化物歧化酶和还原型谷胱甘肽，既提高了资源 的利用率又减少了对环境的污染，并且方法简单，生产成本较低，提高了GSH的产品质量。本专利技术的技术方案是这样来实现的 一种从动物血液中得到超氧化物歧化酶和还原型谷 胱甘肽方法，其按以下步骤进行前期处理先在新鲜动物血中加入柠檬酸钠后经过离心分离得到红细胞溶液，其次在红细胞溶液中加入去离子水得到溶血液，然后在溶血液中加入硫酸铜和硫酸锌的溶液后离心得到上清液，最后将上清液用中空纤维超滤装置超滤得到浓縮液和透过液；提取超氧化物歧化酶在上述前期处理所得浓縮液中加入硫酸铜和硫酸锌的溶液后离心得到含超氧化物歧化酶上清液，将含超氧化物歧化酶上清液经中空纤维超滤装置超滤得到含超氧化物歧化酶浓縮液；提取还原型谷胱甘肽将上述前期处理所得透过液浓縮后经过732阳离子交换树脂柱和717阴离子交换树脂柱得到含还原型谷胱甘肽洗脱液，将含还原型谷胱甘肽洗脱液浓縮得到含还原型谷胱甘肽浓縮液。下面是对上述技术方案的进一步优化和/或选择前期处理按下述方法进行每升新鲜动物血加125亳升至170亳升、浓度为3. 8%至4. 2%柠 檬酸钠，以每分钟3000转离心10分钟至20分钟分离红细胞，再加入体积是红细胞溶液体积l 倍至2倍的生理盐水洗涤红细胞溶液l次至3次；然后将红细胞溶液在O°C下冰浴，并加入体积 是红细胞溶液2倍至4倍的去离子水，搅拌溶血30分钟得到溶血液；加入占溶血液总体积l. 0%至IO. 0%的硫酸铜和硫酸锌的水溶液，硫酸铜溶液的浓度为5%至0. 5%，硫酸锌溶液的浓度为 7%至0. 7%，硫酸铜与硫酸锌溶液的用量按体积比为1:2至2:1，温度控制在55'C至8(TC之间， 加热10分钟至20分钟，冷却至室温，以每分钟3000转离心10分钟至30分钟，得到上清液； 将上清液过滤除去细小颗粒，再经截留分子量为5KD至15KD的中空纤维超滤装置超滤，控制 进口压在15psi至30psi之间，保持回流压为10psi，即保持压强差为5psi至20 psi，浓縮至 上清液体积的10%至20%，得到浓縮液和透过液。提取超氧化物歧化酶按下述方法进行将上述前期处理所得浓縮液中加1倍至3倍体积的 去离子水稀释，再加入体积为稀释液总体积1%至20%的硫酸铜和硫酸锌的水溶液，硫酸铜溶 液的浓度为5%至0. 5%，硫酸锌溶液浓度为7%至0. 7%，硫酸铜与硫酸锌溶液的用量体积比为 1:2至2:1，搅匀，55。C至8(TC之间水浴保温10分钟至20分钟，冷却至室温，以每分钟3000转 离心10分钟至30分钟，收集含超氧化物歧化酶上清液；将含超氧化物歧化酶上清液经截留分 子量为5KD至15KD的中空纤维超滤装置超滤，控制进口压在15psi至30psi之间，保持回流压 为10psi，即保持压强差为5psi至20 psi，浓縮至含超氧化物歧化酶上清液体积的10%至20%， 得到第一次含超氧化物歧化酶浓縮液；取第一次含超氧化物歧化酶浓縮液，经5KD至15KD的 中空纤维超滤装置动态透析12小时，每分钟3000转离心10分钟，除去不溶性蛋白，得含超氧 化物歧化酶透析液；将含超氧化物歧化酶透析液经截留分子量为5KD至15KD的中空纤维超滤 装置超滤，控制进口压力在15psi至30psi之间，保持回流压力为10psi，即保持压强差为 5psi至20 psi，浓縮至含超氧化物歧化酶透析液体积的10%至20%，得到第二次含超氧化物 歧化酶浓縮液；将第二次含超氧化物歧化酶浓縮液加入1倍至2倍体积预冷丙酮，放置l小时 至2小时，每分钟3000转离心10分钟至20分钟得沉淀；沉淀干燥得淡绿色或淡蓝绿色冻干粉 含超氧化物歧化酶。提取还原型谷胱甘肽按下述方法进行将上述前期处理所得透过液在水浴温度4(TC至50 °C，真空度为O. 07Mpa至0. 08Mpa的条件本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种从动物血液中得到超氧化物歧化酶和还原型谷胱甘肽方法，其特征在于按以下步骤进行： 前期处理：先在新鲜动物血中加入柠檬酸钠后经过离心分离得到红细胞溶液，其次在红细胞溶液中加入去离子水得到溶血液，然后在溶血液中加入硫酸铜和硫酸锌的溶液后离心得到上清液，最后将上清液用中空纤维超滤装置超滤得到浓缩液和透过液； 提取超氧化物歧化酶：在上述前期处理所得浓缩液中加入硫酸铜和硫酸锌的溶液后离心得到含超氧化物歧化酶上清液，将含超氧化物歧化酶上清液经中空纤维超滤装置超滤得到含超氧化物歧化酶浓缩液； 提取还原型谷胱甘肽：将上述前期处理所得透过液浓缩后经过７３２阳离子交换树脂柱和７１７阴离子交换树脂柱得到含还原型谷胱甘肽洗脱液，将含还原型谷胱甘肽洗脱液浓缩得到含还原型谷胱甘肽浓缩液。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：顾政一，马晓康，马媛，刘砥威，安熙强，
申请(专利权)人：新疆维吾尔自治区药物研究所，
类型：发明
国别省市：65[中国|新疆]
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