本公开涉及叠加的除草剂耐受性事件8264.42.32.1、相关转基因大豆系及其检测方法，包括新的表达盒和转基因插入物，其包含赋予对草甘膦、芳氧基链烷酸酯或盐、和草丁膦除草剂的抗性的多种性状。本发明专利技术还部分涉及控制抗性杂草的方法、植物育种和除草剂耐受性植物。在一些实施方案中，事件序列可以与其它性状“叠加”，所述性状包括例如其它除草剂耐受性基因和/或昆虫抑制性蛋白质。本发明专利技术进一步部分涉及用于检测大豆及相关植物材料中的事件pDAB8264.42.32.1的端点TaqMan PCR测定法。一些实施方案可以实施对植物材料的高通量接合性分析，并且可以使用其它实施方案来独特地鉴定包含本发明专利技术事件的任何育种大豆系的接合性。还提供了可用于进行这些测定法的试剂盒和条件。
【技术实现步骤摘要】
叠加的除草剂耐受性事件8264.42.32.1、相关转基因大豆系及其检测方法本申请是2012年7月13日提交的申请号为201280044567.8(PCT申请号为PCT/US2012/046706)、专利技术名称为“叠加的除草剂耐受性事件8264.42.32.1、相关转基因大豆系及其检测方法”的专利技术专利申请的分案申请。对相关申请的交叉引用本申请要求2011年7月13日提交的临时申请流水号61/507,444和2011年8月5日提交的61/515,634的在35U.S.C§119(e)下的权益。这些申请通过提及完整并入本文用于所有目的。专利技术背景草甘膦(N-膦酰基甲基甘氨酸(phosphonomethylglycine))，即一种广谱除草剂，抑制5-烯醇丙酮酰莽草酸(enolpyruvylshikimate)-3-磷酸合酶(EPSPS)，即一种在生成植物细胞中必需的芳香族氨基酸的莽草酸代谢途径中的酶。对EPSPS的抑制有效破坏蛋白质合成，由此杀死受影响的植物细胞。由于草甘膦对植物细胞是非选择性的，它杀死杂草和作物植物两者。如此，当可以将作物植物修饰为对草甘膦有抗性，容许期望的植物幸免于对草甘膦的暴露时，它可用于农业生产。已经使用重组DNA技术来分离草甘膦抗性的突变体EPSP合酶。此类草甘膦抗性突变体EPSP合酶可以转化到植物中，并且对经转化的植物赋予草甘膦抗性。举例而言，自土壤杆菌(Agrobacterium)菌株CP4分离草甘膦耐受性基因，如美国专利No.5,633,435中所描述的。通过提及将此参考文献及引用的所有参考文献并入本文。已经经由引入突变创建其它草甘膦耐受性基因。这些包括由Comai分离并记载于美国专利No.5,094,945,4,769,061和4,535,060的AroA基因。已经利用通过用丙氨酸残基取代氨基酸位置80和120之间的甘氨酸残基得到的单一突变体，如记载于美国专利No.5,310,667的。双重突变体已经记载于美国专利No.6,225,114和5,866,775，其中在上述突变外，将第二处突变(用苏氨酸残基取代位置170和210之间的丙氨酸残基)引入野生型EPSPS基因中。其它工作导致草甘膦抗性玉米的生成，其经由导入携带由GenBank登录号X63374编码的氨基酸序列的残基102(将苏氨酸改变为异亮氨酸)和残基106(将脯氨酸改变为丝氨酸)处的突变的经修饰的玉米EPSPS基因进行。参见美国专利No.6,566,587和6,040,497。在大豆中提供对草甘膦的抗性的事件的例子包括大豆事件GTS40-3-2(Padgette等1995)和大豆事件MON89788(美国专利No.7,608,761)。草甘膦耐受性耕种系统的普遍采用和草甘膦日益增加的使用已经促成近年来草甘膦抗性且难以控制的杂草的流行。在种植者面对草甘膦抗性杂草或向更难以控制的杂草物种的转变的地区，种植者可以通过与会控制漏过的杂草的其它除草剂罐混合或交替来补偿草甘膦的除草剂谱中的缺口。除草剂2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D))可以与草甘膦(glyphosate)共同使用以预期扩大会对草甘膦有耐受性或抗性的阔叶或双子叶植物杂草的范围。2,4-D，其已经作为除草剂使用超过60年，提供对一大批一年生、二年生、和多年生阔叶杂草的广谱、出土后控制。在玉米、大豆和棉花中，2,4-D(560–1120gae/ha比率)控制关键的杂草，包括豚草(Ambrosiaartemisiifolia)、三裂叶豚草(Ambrosiatrifida)、瘤突苍耳(Xanthiumstrumarium)、藜(Chenopodiumalbum)、向日葵(Helianthusannuus)、番薯属(Ipomoea)物种、苘麻(Abutilontheophrasti)、小酒白草(ConyzaCanadensis)、和决明子(Sennaobtusifolia)。2,4-D提供对几种关键杂草的部分控制，所述杂草包括宾夕蓼(Polygonumpensylvanicum)、春蓼(Polygonumpersicaria)、丝路蓟(Cirsiumarvense)、药用蒲公英(Taraxacumofficinale)、和苋属(Amaranthus)物种，包括西部苋(Amaranthusrudis)和长芒苋(Amaranthuspalmeri)。2,4-D的进一步使用的限制是其对双子叶作物如大豆或棉的选择性是非常差的，并且因此2,4-D通常不在敏感性双子叶作物上(及一般不在其附近)使用。另外，2,4-D在禾本科作物中的使用稍受限于可以发生的作物损伤的性质。可以在种植不整地种植大豆和棉前使用与草甘膦组合的2,4-D来提供更稳健的烧毁处理；然而，由于这些双子叶物种对2,4-D的敏感性，这些烧毁处理必须在种植前至少14-30天发生(Agriliance,2005)。一种已经对其降解2,4-D的能力进行过广泛研究的生物体是真养产碱杆菌(Ralstoniaeutropha)，其含有编码一种催化矿化途径中的第一步的酶(TfdA)的基因tfdA。(参见美国专利No.6,153,401和GENBANK登录号M16730)。TfdA经由α-酮戊二酸依赖性双加氧酶反应催化2,4-D酸转化为二氯苯酚(DCP)(Smejkal等,2001)。与2,4-D相比，DCP具有很少的除草剂活性。tfdA已经在转基因植物中使用以在通常对2,4-D敏感的双子叶植物(例如棉和烟草)中赋予2,4-D抗性(Streber等(1989),Lyon等(1989),Lyon(1993),及美国专利No.5,608,147)。已经从环境中鉴定出许多编码能够降解2,4-D的蛋白质的tfdA型基因，并且将其存储于Genbank数据库中。许多同源物与TfdA类似(大于85％氨基酸同一性)，并且与TfdA具有相似的酶特性。然而，存在许多如下的同源物，其与TfdA具有显著较低的同一性(25-50％)，但具有与α-酮戊二酸双加氧酶Fe(II)双加氧酶有关的特征性残基。因此，趋异TfdA蛋白的底物特异性不明显。一个与tfdA具有低序列同一性(小于35％)的2,4-D降解基因的例子是来自食酸代尔夫特菌(Delftiaacidovorans)的aad-12基因(美国专利申请2011/0203017)。aad-12基因编码S-对映体特异性α-酮戊二酸依赖性加双氧酶，其已经在植物中使用以赋予对某些苯氧基生长素除草剂，包括但不限于：苯氧基链烷酸酯(phenoxyalkanoate)除草剂(例如苯氧基乙酸除草剂诸如2,4-D和MCPA；及苯氧基丁酸除草剂，诸如2,4-DB和MCPB)和吡啶基氧基链烷酸除草剂(例如，吡啶基氧基乙酸(pyridyloxyaceticacid)除草剂，诸如定草酯(triclopyr)和氟草烟(fluroxypyr))，且包括活性成分的酸、盐、或酯形式的耐受性。(参见例如WO2007/053482)。草丁膦(Glufosinate-ammonium)(“草丁膦(glufosinate)”)是膦丝菌素类除草剂中的一种非系统性、非选择性除草剂。主要用于一大批阔叶和多草杂草的出土后控制的L-膦丝菌素(草丁膦中的活本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种多核苷酸，其包含SEQ ID NO:18。
【技术特征摘要】
2011.07.13 US 61/507，444;2011.08.05 US 61/515，6341.一种多核苷酸，其包含SEQIDNO:18。2.一种用于大豆植物的表达盒，其包含权利要求1的多核苷酸的残基1247-11507，转基因插入大豆基因组DNA的包含SEQIDNO:1和SEQIDNO:2的区段中，从而在该大豆植物的基因组内产生权利要求1的多核苷酸。3.一种转基因的、非全能性的大豆植物细胞，其包含权利要求1的多核苷酸。4.权利要求3的大豆植物细胞，其中该大豆植物细胞对选自下组的至少一种除草剂是抗性的：芳氧基链烷酸酯或盐除草剂、草甘膦除草剂、和草丁膦除草剂。5.一种用于检测权利要求1的多核苷酸的分离的多核苷酸，其中该分离的多核苷酸由选自下组的核苷酸序列组成：SEQIDNO:19和20。6.权利要求1的多核苷酸，其中所述多核苷酸是分离的。7.一种对大豆植物育种的方法，所述方法包括：将包含权利要求1的多核苷酸的第一大豆植物与第二大豆植物杂交以生成包含权利要求1的多核苷酸的第三大豆植物，并且对该第三大豆植物测定该大豆植物的基因组中所述多核苷酸的存在。8.权利要求7的方法，其中所述方法用于将除草剂耐受性性状渐渗入所述大豆植物中。9.一种保护植物免受杂草所害的方法，所述方法包括对田地应用芳氧基链烷酸酯或盐除草剂、草甘膦除草剂、双丙氨磷除草剂、膦丝菌素除草剂、或草丁膦除草剂中的至少一种，所述田地包含含有权利要求1的多核苷酸的植物。10.权利要求9的方法，其中选择所述除草剂，并且将其同时或/和顺序施用。11.权利要求9的方法，其中所述芳氧基链烷酸酯或盐除草剂选自下组：2,4-D；2,4-DB；MCPA；和MCPB。12.权利要求9的方法，其中所述方法包括对所述田地应用至少一种别的除草剂。13.权利要求12的方法，其中所述至少一种别的除草剂是麦草畏。14.权利要求9的方法，其中所述方法包括在应用所述除草剂的14天内在所述田地中种植种子，其中从所述种子种植出所述植物。15.权利要求9的方法，其中在同一生长季内应用至少两种所述的除草剂。16.权利要求9的方法，其中在所述植物顶部应用所述至少一种除草剂。17.一种粗粉产品，其包含权利要求1的多核苷酸。18.一种用于鉴定样品中的权利要求1的多核苷酸的方法，所述方法包括用探针或至少一种引物检测所述多核苷酸的交接序列，其中所述探针或至少一种引物特异性结合或扩增所述交接序列，所述交接序列包含SEQIDNO:19的残基1246-1247，或SEQIDNO:20的残基176-177。19.权利要求18的方法，所述方法进一步包括用第一引物和第二引物使用聚合酶链式反应从所述样品中存在的核酸扩增...
【专利技术属性】
技术研发人员：T·霍夫曼，D·M·帕克赫斯特，N·周，D·帕雷迪，Y·C·崔，N·巴德，S·G·托尔多，G·A·布拉德菲希，B·赫尔德，V·塞卡，Y·王，L·克拉克，
申请(专利权)人：陶氏益农公司，MS技术有限责任公司，
类型：发明
国别省市：美国,US
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