F‑18标记修饰Dimer‑San A探针的制备方法技术

本发明专利技术涉及一种F‑18标记修饰Dimer‑San A探针的制备方法，该方法包括以下步骤：⑴制备

Preparation method of F modified Dimer San 18 labeled A probe

The invention relates to a preparation method of F modified Dimer San 18 marker A probe, the method comprises the following steps: 1 Preparation

【技术实现步骤摘要】
F-18标记修饰Dimer-SanA探针的制备方法
本专利技术涉及PET显像剂的制备方法，尤其涉及F-18标记修饰Dimer-SanA探针的制备方法。
技术介绍
胰腺癌是世界第五大恶性肿瘤，其中位生存期低于6个月，总的5年生存率低于6%，仅10%的患者适合手术治疗，其预后差与该病未能早期诊断密切相关。随着我国人口的老龄化，胰腺癌在我国的发病率有所增加，其将成为未来几年我国一个主要的健康问题。常规结构影像（包括CT、MRI以及超声检查）不具有特异性；分子影像（MolecularImaging）是运用影像学手段显示组织水平、细胞、亚细胞水平的特定分子，反应活体状态下分子水平的变化，从而对疾病进行定性与定量的研究，使得疾病的“精准诊断”成为可能。PET/CT(正电子发射型计算机断层显像)是分子影像的重要成像设备，它的出现，是医学影像学的又一次革命，受到医学界的公认和广泛关注，勘称“现代高科技之冠”，被誉为探测肿瘤的“雷达”，肿瘤诊断的“福尔摩斯”。PET/CT将PET与CT完美融合于一体，将PET的代谢特征与CT成熟的精确解剖信息相结合，二者优势互补，在疾病诊断中能达到1+1>2的效果。18F-FDGPET/CT的临床应用，大大提高了胰腺癌诊断的准确性。但18F-FDG作为一种肿瘤非特异性显像剂，其自身的局限性也显而易见—在胰腺癌的鉴别诊断方面存在假阳性与假阴性。Meta分析研究显示：18F-FDGPET/CT鉴别诊断胰腺癌与胰腺炎的灵敏度、特异性分别为90%、84%。18F-FDG制备通过自动化化学合成模块（chemistryprocesscontrolunit，CPCU），采用软件控制自动合成。合成方法是以1,3,4,6-四-氧-乙酰基-2-氧-三氟甲烷磺酰基-β-D-吡喃甘露糖（简称三氟甘露糖）为原料，在相转移催化剂Kryptofix2.2.2(氨基聚醚2.2.2)促进下，18F离子与三氟甘露糖2位上的羟基发生亲核取代反应，生成18F-FDG保护型的前体，经酸或碱水解脱去乙酰保护基得到18F-FDG。18F-FDGPET/CT作为肿瘤非特异性显像剂，在肿瘤早期良恶性鉴别诊断方面存在明显不足：假阳性与假阴性并存，从而导致肿瘤良恶性诊断的误诊与漏诊。为了克服18F-FDG的不足，有学者标记了CA199抗体片段进行胰腺癌的分子影像诊断，但放射免疫显像不论是使用放射性核素标记单克隆抗体或者其片段，均存在分子量较大，血液清除缓慢（4~20h），在较短时间内难以得到较高的T/NT比值的问题；再者，CA199是胰腺癌非特异性抗原，在胰腺炎性病变中亦有明显表达。受体显像所用的标记配体分子量小、血液清除快、组织穿透力强、T/NT比值高、无免疫原性，具有灵敏度高、特异性强和准确性好等优点，是分子核医学最活跃的前沿研究领域之一。热休克蛋白90（heartshockprotein90，Hsp90）是一种高度保守的在生物界普遍存在、有特殊分子伴侣功能的蛋白，分子量约为83~90KDa。Hsp90含有三个高度保守的结构域：即N端三磷酸腺苷结合域、中间结构域、C末端结构域，以同源二聚体形式存在，主要与细胞周期和细胞凋亡调控相关。研究证实，Hsp90在包括胰腺癌在内的多种恶性肿瘤细胞中异常高表达，是正常细胞的2-10倍，并与肿瘤的发生、发展、分级、分期及预后密切相关；Hsp90在肿瘤细胞质中被激活并定位到细胞表面，而在正常细胞中仅驻留在细胞质中。因此，Hsp90作为一潜在的肿瘤治疗研究靶点日益受到关注，也为其成为靶标的分子影像研究奠定了基础。SansalvamideA(简称SanA)是1999年由美国Belofsky等从海洋菌属Fusarium中分离出来的一种由两个亮氨酸、一个缬氨酸、一个苯丙氨酸和一个α-羟基异己酸组成的环五肽酯类化合物，具有很高的亲脂性及显著的抗肿瘤能力，其对美国国立癌症研究所的60种恶性肿瘤细胞系具有显著的抗增殖活性，且对包括胰腺癌细胞系在内多种肿瘤细胞具有治疗靶向性。将SanA分子中的酯键改造成酰胺键，所得化合物为环五肽（称SanA环肽）。研究发现，利用氟、氯、甲氧基等基团取代SanA环肽分子中苯环对位氢原子，所得SanA环肽衍生物的抗肿瘤生物活性明显优于SanA。SanA及其衍生物抗胰腺癌活性的研究，国内尚属空白，而国外研究较多。有学者认为SanA具有杀死多种胰腺癌细胞系的重要作用。它的衍生物具有独特的抗癌特性，并与目前抗胰腺癌的药物没有结构同源性。PanPS等合成了31种SanA环肽衍生物，对两种胰腺癌细胞系(分别是PL45和BxPC-3)的抗癌活性进行了研究，其中6种衍生物的抗胰腺癌效果是临床常用药物如(如,5-FU)的140多倍，而正常细胞对其则具有较好的耐受性。到目前为止，合成的SanA环肽衍生物有100余种，其抗肿瘤活性差别明显。大量对SanA环肽衍生物结构-抗癌效应关系的研究发现，为保证其较高的抗癌活性，该衍生物必须含有两个连续D-氨基酸和/或N-甲氧基。Pan等合成了78种SanA环肽衍生物，其中一衍生物（简称DimerSanA），显示出最强的抗胰腺癌PL45活性，当药物浓度为5μM时，对该细胞的生长抑制率达到99%，是报道的抗胰腺癌活性最强的SanA环肽衍生物—半数抑制率（IC50）仅为1~20nM，其结构式为：。研究证实，SanA及其环肽衍生物是Hsp90的抑制剂，其选择性结合于Hsp90的N端及中间解构域，通过阻止Hsp90的C末端结构域与其下游客户蛋白结合，从而干扰涉及细胞生长及肿瘤信号传导的多个通路，导致肿瘤细胞凋亡，且二者结合具有高特异性、高亲和力。为了保持该多肽的生物学活性，我们在保留该类衍生物重要活性功能基团的前提下，通过在Dimer-SanA分子的苯环上引入氨基，耦联1，4，7-三氮环壬烷-1，4，7-三乙酸（1，4，7-triazacyclononane-1，4，7-triaceticacid，NOTA）双功能螯合剂，对其进行生物学活性鉴定后，实现了正电子放射性核素18F对其进行间接标记（18F-NOTA-Dimer-SanA,简称为18F-NOTA-Dimer-SanA，其申请号为201710844875.3）。其结构式为：；动物实验已经证实原显像剂18F-NOTA-Dimer-SanA能够被PL45胰腺癌组织高度摄取。但其脂溶性较高，静脉注射体内后主要通过消化系统排泄，肝脏本底摄取很高。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种降低肝脏本底，减少对胰腺疾病诊断可能干扰的F-18标记修饰Dimer-SanA探针的制备方法。为解决上述问题，本专利技术所述的F-18标记修饰Dimer-SanA探针的制备方法，包括以下步骤：⑴制备18F-生理盐水溶液：将回旋加速器生产的50~100mCiNa18F溶液先富集于分别经10mL0.5mol/L且pH=8.4的NaOAc溶液和10mL去离子水预处理的Sep-ParklightQMA柱；然后用5mL去离子水洗脱除去金属杂质离子；再用0.2mL~1mL生理盐水洗脱并收集，得到18F-生理盐水溶液；⑵在5mL小玻璃瓶内加入乙酸5μL、0.01M的AlCl312μL以及10~20mCi的所述18F-生理盐水溶液50~1本文档来自技高网...

【技术保护点】
F‑18标记修饰Dimer‑San A探针的制备方法，包括以下步骤：⑴制备

【技术特征摘要】
1.F-18标记修饰Dimer-SanA探针的制备方法，包括以下步骤：⑴制备18F-生理盐水溶液：将回旋加速器生产的50~100mCiNa18F溶液先富集于分别经10mL0.5mol/L且pH=8.4的NaOAc溶液和10mL去离子水预处理的Sep-ParklightQMA柱；然后用5mL去离子水洗脱除去金属杂质离子；再用0.2mL~1mL生理盐水洗脱并收集，得到18F-生理盐水溶液；⑵在5mL小玻璃瓶内加入乙酸5μL、0.01M的AlCl312μL以及10~20mCi的所述18F-生理盐水溶液50~100μL，在120℃温度下加热10min，得到反应液；⑶在1.5mLEP管内称取NOTA-(PEG)24-Dimer-SansalvamideA多肽100~150μg，加入250~350μL乙腈，超声波震荡后充分溶解，再加入40μL去离子水，得到溶解的多肽；所述溶解的多肽移至所述反应液中，在100~105℃温度下加热10min后冷却5min，得到标记物18F-NOTA-(PEG)24-Dime...

【专利技术属性】
技术研发人员：李玉民，王晓慧，陈凯，
申请(专利权)人：李玉民，王晓慧，
类型：发明
国别省市：甘肃,62