一种脑血栓片的检测方法技术

本发明专利技术涉及由中药材红花、当归、水蛭、赤芍、桃仁、川芎、丹参、土鳖虫、羚羊角、人工牛黄制成的中药复方制剂一种脑血栓片的检测方法，其特征是利用高效液相色谱法、薄层色谱法对该中药复方制剂中药材丹参、赤芍进行含量测定以及对当归、川芎、红花做薄层鉴别。该方法能够有效控制脑血栓片的质量，可作为该药质量控制和考察工艺可靠性的方法。

【技术实现步骤摘要】
一种脑血栓片的检测方法
本专利技术涉及一种治疗脑血栓形成出现的中风不语、口眼歪斜、半身不遂等症药物的检测方法，属于制药领域。
技术介绍
脑血栓片执行部颁标准及国家食品药品监督管理局标准，具有活血化瘀、醒脑通络、潜阳熄风作用，用于因瘀血、肝阳上亢出现之中风先兆，如肢体麻木、头晕目眩等和脑血栓形成出现的中风不语、口眼歪斜、半身不遂等症，具有预防和治疗作用。该药由中药材红花、当归、水蛭、赤芍、桃仁、川芎、丹参、土鳖虫、羚羊角、人工牛黄组成；其中丹参、当归、川芎、赤芍及红花均是起主要治疗作用的药材。现有脑血栓片执行标准质量控制方法中，缺少对这些起主要治疗作用药材的质量控制方法，丹参虽然有薄层鉴别方法，但缺少定量检测方法；因此，现有技术在全面评价脑血栓片质量优劣方面存在局限性。本专利技术克服现有技术的不足，完善脑血栓片的质量控制标准，增加了丹参、赤芍含量测定的质量控制方法以及当归、川芎、红花薄层色谱定性鉴别方法，使本复方制剂质量控制标准进一步完善。
技术实现思路
本专利技术目的是克服现有技术不足，完善并制定脑血栓片的质量控制方法，增加了丹参、赤芍含量测定的质量控制方法以及当归、川芎、红花薄层色谱定性鉴别方法，使本复方制剂质量控制标准进一步完善；能够有效控制脑血栓片的产品质量。本专利技术通过下述技术方案得以实现:1.脑血栓片中药材丹参所含丹酚酸B高效液相色谱法进行含量测定:a.色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-乙腈-0.2％磷酸溶液（4：20：76）；检测波长为286nm，理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于5000；b.对照品溶液的制备:取丹酚酸B对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含70µg-90µg的溶液，作为对照品溶液；c.供试品溶液的制备:取本品适量，除去包衣，研细，取0.3-0.6g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75％甲醇20-30ml，称定重量，超声处理25-35分钟，放冷，再称定重量，用75％甲醇补足减失的重量，摇匀，离心5-10分钟取上清液，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，作为供试品溶液；d.测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5-15μl，注入液相色谱仪，测定；脑血栓片每片含丹参以丹酚酸B计，糖衣片不得少于0.83mg，薄膜衣片不得少于1.66mg；2.脑血栓片中药材赤芍所含芍药苷高效液相色谱法进行含量测定:a.色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液－三乙胺（28：72：0.5）为流动相；检测波长为230nm，理论板数按芍药苷峰计算应不低于5000；b.对照品溶液的制备:取芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含20µg-30µg的溶液，作为对照品溶液；c.供试品溶液的制备:取本品适量，除去包衣，研细，取1.5-2.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20-30ml，密塞，称定重量，摇匀，放置2-6小时，超声处理(功率150W，频率20KHz)15-25分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；d.测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5-15μl，注入液相色谱仪，测定；脑血栓片每片含赤芍以芍药苷计，糖衣片不得少于0.95mg，薄膜衣片不得少于1.90mg；3.脑血栓片中药材当归及川芎用薄层色谱法鉴别:a.对照药材溶液的制备:取当归及川芎对照药材各0.4-0.6g，分别加乙醚15-25ml超声处理5-15分钟，滤过，滤液挥干，残渣分别加甲醇0.5-2ml使溶解，作为对照药材溶液；b.供试品溶液的制备:取脑血栓片适量，除去包衣，研细，精密称取2.0-3.0g，加乙醚25-35ml，超声处理20-40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇0.5-1.5ml使溶解，作为供试品溶液；c.薄层色谱法试验:吸取上述两种对照药材溶液和供试品溶液各2-4μl,分别点于同一硅胶Ｇ薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯（4:1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；4.脑血栓片中药材红花用薄层色谱法鉴别:a.对照药材溶液的制备:取红花对照药材1.0g，加水100ml，加热微沸30分钟，放冷，滤过，滤液浓缩至约40ml，加乙酸乙酯提取2次，每次40ml，合并乙酸乙酯液，用1％氢氧化钠溶液20ml提取；分取氢氧化钠提取液，加盐酸调节pH值至1～2，再用乙酸乙酯提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液；b.供试品溶液的制备:取脑血栓片适量，除去包衣，研细，精密称取5.0g，加水100ml，加热微沸30分钟，放冷，滤过，滤液浓缩至约40ml，加乙酸乙酯提取2次，每次40ml，合并乙酸乙酯液，用1％氢氧化钠溶液20ml提取；分取氢氧化钠提取液，加盐酸调节pH值至1～2，再用乙酸乙酯提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；c.薄层色谱法试验:吸取上述对照药材溶液和供试品溶液各2-6μl,分别点于同一硅胶Ｇ薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯（5:3）为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏20分钟后，置紫外光灯（365nm）下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。本专利技术可通过下述最佳技术方案得以实现:1.脑血栓片中药材丹参所含丹酚酸B高效液相色谱法进行含量测定:a.色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-乙腈-0.2％磷酸溶液（4：20：76）；检测波长为286nm，理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于5000；b.对照品溶液的制备:取丹酚酸B对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含80µg的溶液，作为对照品溶液；c.供试品溶液的制备:取本品适量，除去包衣，研细，取0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75％甲醇25ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用75％甲醇补足减失的重量，摇匀，离心5分钟取上清液，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，作为供试品溶液；d.测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定；脑血栓片每片含丹参以丹酚酸B计，糖衣片不得少于0.83mg，薄膜衣片不得少于1.66mg；2.脑血栓片中药材赤芍所含芍药苷高效液相色谱法进行含量测定:a.色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液－三乙胺（28：72：0.5）为流动相；检测波长为230nm，理论板数按芍药苷峰计算应不低于5000；b.对照品溶液的制备:取芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含25µg的溶液，作为对照品溶液；c.供试品溶液的制备:取本品适量，除去包衣，研细，取2.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，摇匀，放置4小时，超声处理(功率150W，频率20KHz)20分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；d.测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种脑血栓片的检测方法，其中所述药物由中药材红花184g、当归184g、水蛭184g、赤芍184g、桃仁184g、川芎184g、丹参184g、土鳖虫46g、羚羊角23g、人工牛黄23g制成，上述中药材共制成糖衣片2000片或薄膜衣片1000片，其特征在于该方法包括下列步骤:(1)脑血栓片中药材丹参所含丹酚酸B高效液相色谱法进行含量测定: a.色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇‑乙腈‑0.2％磷酸溶液（4：20：76）为流动相；检测波长为286nm，理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于5000；b.对照品溶液的制备: 取丹酚酸B对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含70µg‑90µg的溶液，作为对照品溶液；c.供试品溶液的制备: 取本品适量，除去包衣，研细，取0.3‑0.6g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75％甲醇20‑30ml，称定重量，超声处理25‑35分钟，放冷，再称定重量，用75％甲醇补足减失的重量，摇匀，离心5‑10分钟取上清液，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，作为供试品溶液；d.测定法: 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5‑15μl，注入液相色谱仪，测定；脑血栓片每片含丹参以丹酚酸B计，糖衣片不得少于0.83mg，薄膜衣片不得少于1.66mg；(2)脑血栓片中药材赤芍所含芍药苷高效液相色谱法进行含量测定:a.色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇‑0.05mol/L磷酸二氢钾溶液－三乙胺（28：72：0.5）为流动相；检测波长为230nm，理论板数按芍药苷峰计算应不低于5000；b.对照品溶液的制备: 取芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含20µg‑30µg的溶液，作为对照品溶液；c.供试品溶液的制备: 取本品适量，除去包衣，研细，取1.5‑2.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20‑30ml，密塞，称定重量，摇匀，放置2‑6小时，超声处理(功率150W，频率20KHz)15‑25分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；d.测定法: 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5‑15μl，注入液相色谱仪，测定；脑血栓片每片含赤芍以芍药苷计，糖衣片不得少于0.95mg，薄膜衣片不得少于1.90mg；(3)脑血栓片中药材当归及川芎用薄层色谱法鉴别:a.对照药材溶液的制备: 取当归及川芎对照药材各0.4‑0.6g，分别加乙醚15‑25ml超声处理5‑15分钟，滤过，滤液挥干，残渣分别加甲醇0.5‑2ml使溶解，作为对照药材溶液；b.供试品溶液的制备:取脑血栓片适量，除去包衣，研细，精密称取2.0‑3.0g，加乙醚25‑35ml，超声处理20‑40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇0.5‑1.5ml使溶解，作为供试品溶液；c.薄层色谱法试验:吸取上述两种对照药材溶液和供试品溶液各2‑4μl,分别点于同一硅胶Ｇ薄层板上，以正己烷‑乙酸乙酯（4:1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；(4)脑血栓片中药材红花用薄层色谱法鉴别:a.对照药材溶液的制备: 取红花对照药材1.0g，加水100ml，加热微沸30分钟，放冷，滤过，滤液浓缩至约40ml，加乙酸乙酯提取2次，每次40ml，合并乙酸乙酯液，用1％氢氧化钠溶液20ml提取；分取氢氧化钠提取液，加盐酸调节pH值至1～2，再用乙酸乙酯提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液；b.供试品溶液的制备:取脑血栓片适量，除去包衣，研细，精密称取5.0g，加水100ml，加热微沸30分钟，放冷，滤过，滤液浓缩至约40ml，加乙酸乙酯提取2次，每次40ml，合并乙酸乙酯液，用1％氢氧化钠溶液20ml提取；分取氢氧化钠提取液，加盐酸调节pH值至1～2，再用乙酸乙酯提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；c.薄层色谱法试验:吸取上述对照药材溶液和供试品溶液各2‑6μl,分别点于同一硅胶Ｇ薄层板上，以环己烷‑乙酸乙酯（5:3）为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏20分钟后，置紫外光灯（365nm）下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。...

【技术特征摘要】
1.一种脑血栓片的检测方法，其中所述药物由中药材红花184g、当归184g、水蛭184g、赤芍184g、桃仁184g、川芎184g、丹参184g、土鳖虫46g、羚羊角23g、人工牛黄23g制成，上述中药材共制成糖衣片2000片或薄膜衣片1000片，其特征在于该方法包括下列步骤:(1)脑血栓片中药材丹参所含丹酚酸B高效液相色谱法进行含量测定:a.色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-乙腈-0.2％磷酸溶液（4：20：76）为流动相；检测波长为286nm，理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于5000；b.对照品溶液的制备:取丹酚酸B对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含70µg-90µg的溶液，作为对照品溶液；c.供试品溶液的制备:取本品适量，除去包衣，研细，取0.3-0.6g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75％甲醇20-30ml，称定重量，超声处理25-35分钟，放冷，再称定重量，用75％甲醇补足减失的重量，摇匀，离心5-10分钟取上清液，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，作为供试品溶液；d.测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5-15μl，注入液相色谱仪，测定；脑血栓片每片含丹参以丹酚酸B计，糖衣片不得少于0.83mg，薄膜衣片不得少于1.66mg；(2)脑血栓片中药材赤芍所含芍药苷高效液相色谱法进行含量测定:a.色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液－三乙胺（28：72：0.5）为流动相；检测波长为230nm，理论板数按芍药苷峰计算应不低于5000；b.对照品溶液的制备:取芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含20µg-30µg的溶液，作为对照品溶液；c.供试品溶液的制备:取本品适量，除去包衣，研细，取1.5-2.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20-30ml，密塞，称定重量，摇匀，放置2-6小时，超声处理(功率150W，频率20KHz)15-25分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；d.测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5-15μl，注入液相色谱仪，测定；脑血栓片每片含赤芍以芍药苷计，糖衣片不得少于0.95mg，薄膜衣片不得少于1.90mg；(3)脑血栓片中药材当归及川芎用薄层色谱法鉴别:a.对照药材溶液的制备:取当归及川芎对照药材各0.4-0.6g，分别加乙醚15-25ml超声处理5-15分钟，滤过，滤液挥干，残渣分别加甲醇0.5-2ml使溶解，作为对照药材溶液；b.供试品溶液的制备:取脑血栓片适量，除去包衣，研细，精密称取2.0-3.0g，加乙醚25-35ml，超声处理20-40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇0.5-1.5ml使溶解，作为供试品溶液；c.薄层色谱法试验:吸取上述两种对照药材溶液和供试品溶液各2-4μl,分别点于同一硅胶Ｇ薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯（4:1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；(4)脑血栓片中药材红花用薄层色谱法鉴别:a.对照药材溶液的制备:取红花对照药材1.0g，加水100ml，加热微沸30分钟，放冷，滤过，滤液浓缩至约40ml，加乙酸乙酯提取2次，每次40ml，合并乙酸乙酯液，用1％氢氧化钠溶液20ml提取；分取氢氧化钠提取液，加盐酸调节pH值至1～2，再用乙酸乙酯提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸...

【专利技术属性】
技术研发人员：张彦森，
申请(专利权)人：天津同仁堂集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：天津,12