牛乳α制造技术

本发明专利技术涉及蛋白领域，具体涉及多个来源于α

【技术实现步骤摘要】
牛乳αs2-酪蛋白来源生物活性肽的制备和应用本申请是原申请的分案申请，原申请的申请日为：2014.12.19；申请号为：2014108093095；专利技术创造名称为：牛乳αs2-酪蛋白来源生物活性肽的制备和应用。
本专利技术涉及蛋白领域，具体涉及多种来源于αs2-酪蛋白来源生物活性肽及其制备和应用。
技术介绍
由于生物活性肽作为促进健康的生物活性成分，具有传递生理信息，调节生理功能的作用，对于人体的神经、消化、生殖、生长、运动、代谢、循环等系统的正常生理活动的维持非常重要。它们不仅具有抗病毒、细菌、抗高血压、降胆固醇等作用，而且作为免疫调节剂具有调节免疫反应、抗肿瘤等功能；能够清除自由基具有延缓衰老的功效，是当前国际食品界最热门的研究课题和极具发展前景的功能因子。各种活性肽常作为功能食品添加成分用于食品的实践生产，特别是在乳饮料、食品添加剂的应用方面已经取得良好效果。乳源性生物活性肽生物的功能及对消费者的健康的影响正备受重视。近年来，越来越多的科学研究表明很多来源于生物蛋白的小肽具有多种生物学活性，如激素作用、免疫调节、抗血栓、抗高血压、降胆固醇、抑菌、抗病毒、抗癌作用等。同时，研究发现小肽可以被人体更好地吸收和利用，改变了传统的蛋白质只能被降解成氨基酸才能被吸收利用的观点。在众多生物蛋白中各种牛乳蛋白是非常重要的生物活性多肽来源之一，它们被乳酸菌分解利用，并发生了一系列生理生化反应，使蛋白质变为多肽或者游离的氨基酸，最终被人体消化吸收或通过小肠上皮细胞的吸收转运直接进入人体的血液循环，发挥其生物活性作用。因此，这些生物活性小肽不仅成为筛选药物的天然资源宝库，也是功能性食品工业的主要原料成分。目前，生物活性肽的制备及其应用开发已经成为世界范围内研究的热点。免疫活性肽是继阿片肽发现后首次从乳中获得并证明其生理活性的一类生物活性肽。1981年，Jolles等人首次发现，利用胰蛋白酶水解人乳蛋白，从水解物中得到一种免疫活性肽段，其氨基酸序列为Val-Glu-Pro-Ile-Pro-Tyr，该短肽被证明在体外实验中能够增强小鼠腹腔巨噬细胞对绵羊血红细胞的吞噬作用，静脉注射，则能增强小鼠对肺炎克氏杆感染的抵抗能力。Elitsur等人经胃蛋白酶处理酪蛋白得到Arg-Tyr-Leu-Gly-Tyr-Leu-Glu和Arg-Tyr-Leu-Gly-Tyr-Leu，研究证明该两短肽不仅具有阿片样活性，也具有免疫调节活性，可增强淋巴细胞增殖，提高自然杀伤细胞(NK)能力，促进噬中性白细胞的移动。张少辉等人利用瑞士乳杆菌发酵脱脂乳获得了生物活性多肽QEPVL及其降解产物QEPV，经过体外抗氧化实验、体外免疫功能促进实验，验证了多肽QEPV具有较好的抗氧化生物学活性和促进细胞免疫的活性，一方面能够清除机体内的自由基，减少自由基对人体的伤害；另一方面，生物活性多肽QEPVL和QEPV还能够增强机体免疫力，增强淋巴细胞、巨噬细胞的增殖能力，使巨噬细胞一氧化氮诱生量增加，并促巨噬细胞分泌细胞因子。尽管牛乳蛋白内隐含有许多具有生物活性的肽序列，但这些生物活性肽序列只有通过一定的手段将其释放出来才能发挥作用。获取乳蛋白源活性肽的主要手段有两种：发酵，利用微生物(乳酸菌)发酵乳源蛋白获取；酶解，包括来自动物的消化道酶和来自植物和微生物的蛋白酶。研究结果表明乳源性生物活性肽作为一类小分子物质，以其分子量低、活性强、用量少的独特优势，已越来越多的引起人们的重视。所以它们不仅仅作为功能性食品原料用于各种功能性食品的制造，而且作为免疫调节剂具有调节免疫反应、抗肿瘤等功能；能够清除自由基具有延缓衰老的功效。此外，多数乳源性生物活性肽能够抵抗胃肠道的消化，在小肠内以完整的形式被机体吸收，而不必被分解成单个氨基酸，具有易消化吸收，食用安全性极高。因此乳源性生物活性肽的能够提高机体抵御外界不良因素的刺激、降低机体发病率等功能特性备受重视，有望成为具有清除自由基、减少患癌几率和延缓衰老的非药物性物质原料，在功能性食品和医药领域具有非常广阔的应用前景，今后必将成为国际食品界和生物医药产业界的最热门的研究课题，为提高人类健康水平、不得病或者说少得病、延缓衰老、延长寿命发挥重要的作用。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供：一种分离的生物活性多肽KEVV，其包括(a)由Lys-Glu-Val-Val(SEQIDNO：1)所示的氨基酸组成的多肽；(b)或在SEQIDNO：1所示的氨基酸序列中经取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有同等活性的由(a)衍生的多肽；一种分离的生物活性多肽LQYL，其包括(c)由Leu-Gln-Tyr-Leu(SEQIDNO：2)所示的氨基酸组成的多肽；(d)或在SEQIDNO：2所示的氨基酸序列中经取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有同等活性的由(c)衍生的多肽；一种分离的生物活性多肽TVYQHQ，其包括(e)由Thr-Val-Tyr-Gln-His-Gln(SEQIDNO：3)所示的氨基酸组成的多肽；(f)或在SEQIDNO：3所示的氨基酸序列中经取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有同等活性的由(e)衍生的多肽。较优的，所述生物活性多肽的来源为乳源性。αS2-酪蛋白的氨基酸序列为既有技术，具体氨基酸序列如SEQIDNO:4所示：MetLysPhePheIlePheThrCysLeuLeuAlaValAlaLeuAlaLysAsnThrMetGluHisSerSerSerGluGluSerIleIleSerGlnGlnThrTyrLysGlnGluLysAsnmetAlaIleAsnProSerLysGluAsnLeuCysSerThrPheCysLysGluValValArgAsnAlaAsnGluGluGluTyrSerIleGlySerSerSerGluGluSerAlaGluValAlaThrGluGluValLysIleThrValAspAspLysHisTyrGlnLysAlaLeuGluIleAsnGlnPheTyrGlnLysPheProGlnTyrLeuGlnTyrLeuGlnTyrGlnGlyProIleValLeuAsnProTrpAspGlnValLysArgAsnAlaValProIleThrProThrLeuAsnArgGluGlnLeuSerThrSerGluGluAsnSerLysLysThrValAspMetGluSerThrGluValPheThrLysLysThrLysLeuThrGluGluGluLysAsnArgLeuAsnPheLeuLysLysIleSerGlnArgTyrGlnLysPheAlaLeuProGlnTyrLeuLysThrValTyrGlnHisGlnLysAlaMetLysProTrpIleGlnProLysThrLysValIleProTyrValArgTyrLeu。本专利技术的生物活性多肽KEVV为乳源性，具体来源于αs2-酪蛋白，并且为αs2-酪蛋白(SEQIDNO:4)第56～59位的氨基酸残基。本专利技术的生物活性多肽LQYL为乳源性，具体来源于αs2-酪蛋白(SEQIDNO:4)第111～114位的氨基酸残基。本专利技术的生物活性多肽TVYQHQ为乳源性，具体来源于本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的生物活性多肽LQYL，其包括(c)由SEQ ID NO：2所示的氨基酸组成的多肽；(d)或在SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列中经取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有同等活性的由(c)衍生的多肽。

【技术特征摘要】
1.一种分离的生物活性多肽LQYL，其包括(c)由SEQIDNO：2所示的氨基酸组成的多肽；(d)或在SEQIDNO：2所示的氨基酸序列中经取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有同等活性的由(c)衍生的多肽。2.编码权利要求1所述生物活性多肽LQYL的核苷酸片段。3.权利要求1所述生物活性多肽的制备方法，步骤如下：1)发酵：将瑞士乳杆菌添加到脱脂乳中进行厌氧发酵，获得瑞士乳杆菌发酵乳；2)多肽的粗提：对步骤1)的瑞士乳杆菌发酵乳进行低温离心分离，取上清液；3)多肽的纯化：a.对步骤2)的上清液进行超滤处理，收集滤液；b.固相萃取柱分离：收集的滤液采用WatersSep-pakC18固相萃取柱萃取，收集生物活性多肽混合物；4)多肽的消化及稳定性：采用两步酶解法酶解步骤3)的生物活性多肽混合物，获得生物活性多肽混合物；第一步酶解所采用的酶为胃...

【专利技术属性】
技术研发人员：张少辉，徐海红，金赢凯，孙冠华，高扬，卢飞，沈鹏，
申请(专利权)人：浙江辉肽生命健康科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33