支化的和线性的嵌合化合物、多核苷酸、它们的用途和制备方法技术

本发明专利技术公开涉及包含核酸和非核酸部分的支化的和线性的嵌合化合物、以及多核苷酸。本发明专利技术公开还涉及它们用于刺激免疫应答的用途，以及制备所述的支化的嵌合化合物的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】支化的和线性的嵌合化合物、多核苷酸、它们的用途和制备方法相关申请的交叉引用本申请要求2015年1月23日提交的美国临时申请No.62/107,291的权益，就所有目的而言，该申请以引用方式全文并入本文。序列表以ASCII文本文件形式提交以下以ASCII文本文件提交的内容以引用方式全文并入本文：序列表的计算机可读形式(CRF)(文件名称：377882005640SEQLIST.txt，记录日期：2016年1月22日，大小：7KB)。
本专利技术涉及包含核酸和非核酸部分的支化的和线性的嵌合化合物、以及多核苷酸。本专利技术还涉及这些化合物刺激免疫应答的用途，以及支化的嵌合化合物的制备方法。
技术介绍
Toll样受体(TLR)是识别保守的微生物分子的跨膜蛋白质家族，所述的微生物分子被称为病原体相关的分子模式，其不同于宿主的分子。由此，TLR在天然免疫应答中起重要作用。TLR3,TLR7,TLR8,TLR9和TLR13为核酸感测性TLR。激动剂和拮抗剂在调控免疫应答中具有用途。TLR激动剂通常用于刺激免疫竞答，而TLR拮抗剂通常用于抑制免疫应答(Gosuetal.,Molecules,17:13503-13529,2012)。由多种抗原提呈细胞表达的TLR9识别核酸内非甲基化的CpG二核苷酸。因此，包含非甲基化的CpG二核苷酸的多核苷酸可以通过它们活化TLR9的能力而成为有效的佐剂。此外，包含非核酸部分和含非甲基化-CpG核酸部分的嵌合化合物能够刺激免疫应答。TLR9激动剂的效力取决于核酸部分的长度，在非甲基化-CpG二核苷酸侧翼的残基，以及抗原提呈细胞吸收的功效(Marshalletal.,核酸sResearch,31:5122-5133,2003)。某些支化的嵌合化合物(其中多个多核苷酸或线性嵌合化合物附着在多价的载体部分上，例如多糖)相对于非缀合的多核苷酸或线性的嵌合化合物，激发增强的免疫应答(Marshalletal.,如上所述)。高度支化的亲水性多糖(以byGEHealthcare出售)可以用作支化的嵌合化合物的多价载体部分。然而，在的缀合中使用的传统的连接体部分是疏水性的，其可以导致包含的合成中间体沉淀。这不利地影响用于制造支化的嵌合化合物的工艺、以及随后储存终产物的能力。此外，合成TLR激动剂的治疗用途受到其毒性的影响。仍需要具有强力的免疫刺激活性的多核苷酸和嵌合化合物。此外，仍需要可以可再生地制造的强力的嵌合化合物。具有可接受的毒性谱的多核苷酸和嵌合化合物是特别理想的。专利技术概述本专利技术公开涉及包含核酸和非核酸部分的支化的和线性的嵌合化合物，以及多核苷酸。本专利技术公开还涉及它们刺激免疫应答的用途，以及支化的嵌合化合物的制备方法。在一个方面中，本专利技术公开提供了式(I)所示的支化的嵌合化合物：[D-L1-L2-(PEG)-L3]x-F(I)，其中：D为多核苷酸或线性的嵌合化合物；L1为包含烷硫基基团的第一连接体；L2为包含琥珀酰亚胺基团的第二连接体；L3为包含酰胺基团的第三连接体；PEG为式-(OCH2CH2)n–，其中n为2至8的整数；x为3至300的整数；以及F为分子量大约100,000至大约700,000道尔顿的蔗糖和表氯醇的支化共聚物，并且通过醚基团与L3连接，其中D的多核苷酸包含核苷酸序列：5’-TCGGCGCAACGTTCTCGGCGC-3’(SEQIDNO:1)，其中多核苷酸的长度低于50个核苷酸，并且其中核苷酸之间以及3’-末端核苷酸与L1之间的一个或多个键为硫代磷酸酯键；并且其中D的线性的嵌合化合物包含3个核酸部分和2个六乙二醇(HEG)间隔，如5’-TCGGCGC-3’-HEG-5’-AACGTTC-3’-HEG-5’-TCGGCGC-3’(SEQIDNO:2)，其中线性的嵌合化合物包含低于50个核苷酸，并且其中核苷酸之间、核苷酸与HEG间隔之间、以及3’-末端核苷酸与L1之间的一个或多个键为硫代磷酸酯键。在一些实施方案中，x为20-300,90-150,或100-140。在一些实施方案中，L2为在一些实施方案中，L3为在一些实施方案中，其中L3为在一些实施方案中，式-(OCH2CH2)n–的n为6,24,45或70。在一些实施方案中，F的分子量为大约300,000至大约500,000道尔顿。在一些实施方案中，F为PM400(GEHealthcare出售的聚合物)。在一些实施方案中，D为由核苷酸序列5’-TCGGCGCAACGTTCTCGGCGC-3’(SEQIDNO:1)组成的多核苷酸。在一些实施方案中，D为由5’-TCGGCGC-3’-HEG-5’-AACGTTC-3’-HEG-5’-TCGGCGC-3’(SEQIDNO:2)组成的线性的嵌合化合物。在一些实施方案中，L1为-(CH2)m-S-，其中m为2至9的整数。在一些实施方案中，x为20至200。在一些实施方案中，x为90至150，n为6，而m为3或6。在一些实施方案中，核苷酸之间所有的键、其中存在于核苷酸和HEG间隔之间的键、以及3’-末端核苷酸与L1之间的键为硫代磷酸酯键。多核苷酸或者线性的嵌合化合物的核酸部分的CpG二核苷酸是非甲基化的。在另一个方面中，本专利技术公开提供了分离的多核苷酸，其包含核苷酸序列5’-TCGGCGCAACGTTC-3’(SEQIDNO:3)，其中所述的多核苷酸的长度低于50个核苷酸，并且其中核苷酸之间的一个或多个键为硫代磷酸酯键。在相关的方面中，本专利技术公开提供了分离的多核苷酸，其包含核苷酸序列5’-TCGGCGCAACGTTCTCGGCGC-3’(SEQIDNO:1)，其中所述的多核苷酸的长度低于50个核苷酸，并且其中核苷酸之间的一个或多个键为硫代磷酸酯键。在一些实施方案中，多核苷酸由5’-TCGGCGCAACGTTCTCGGCGC-3’(SEQIDNO:1)的核苷酸序列组成。在一些实施方案中，多核苷酸是单链的。在一些实施方案中，多核苷酸是2’-脱氧核糖多核苷酸。在一些实施方案中，所有的键均为硫代磷酸酯键。多核苷酸的CpG二核苷酸是非甲基化的。在另一个方面中，本专利技术公开提供了包含2个核酸部分和六乙二醇(HEG)间隔的线性的嵌合化合物，如5’-TCGGCGC-3’-HEG-5’-AACGTTC-3’(SEQIDNO:4)，其中线性的嵌合化合物包含低于50个核苷酸，并且其中核苷酸之间、以及核苷酸与HEG间隔之间的一个或多个键为硫代磷酸酯键。在相关的方面中，本专利技术公开提供了包含3个核酸部分和2个六乙二醇(HEG)间隔的线性的嵌合化合物，如5’-TCGGCGC-3’-HEG-5’-AACGTTC-3’-HEG-5’-TCGGCGC-3’(SEQIDNO:2)，其中线性的嵌合化合物包含低于50个核苷酸，并且其中核苷酸之间的、以及核苷酸与HEG间隔之间的一个或多个键为硫代磷酸酯键。在一些实施方案中，线性的嵌合化合物由5’-TCGGCGC-3’-HEG-5’-AACGTTC-3’-HEG-5’-TCGGCGC-3’(SEQIDNO:2)组成。在一些实施方案中，核酸部分为2’-脱氧核糖多核苷酸。在一些实施方案中，所有的键为硫代磷酸酯键。此外，本专利技术公开提供了药物组合物，其包含(i)药物可接受的赋形剂；以及本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种式(I)所示的支化的嵌合化合物：[D‑L

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.01.23 US 62/107,2911.一种式(I)所示的支化的嵌合化合物：[D-L1-L2-(PEG)-L3]x-F(I)其中：D为多核苷酸或线性的嵌合化合物；L1为包含烷硫基基团的第一连接体；L2为包含琥珀酰亚胺基团的第二连接体；L3为包含酰胺基团的第三连接体；PEG为式-(OCH2CH2)n–，其中n为2至80的整数；X为3至300的整数；以及F为蔗糖和表氯醇的支化的共聚物，其分子量为大约100,000至大约700,000道尔顿，并且通过醚基团与L3连接；其中所述的D的多核苷酸包含所述的核苷酸序列：5’-TCGGCGCAACGTTCTCGGCGC-3’(SEQIDNO:1)，其中所述的多核苷酸的长度小于50个核苷酸，并且其中所述的核苷酸之间、以及所述的3’末端核苷酸与L1之间的一个或多个键为硫代磷酸酯键；以及其中所述的D的线性的嵌合化合物包含3个核酸部分和2个六乙二醇(HEG)间隔，如5’-TCGGCGC-3’-HEG-5’-AACGTTC-3’-HEG-5’-TCGGCGC-3’(SEQIDNO:2)，其中所述的线性的嵌合化合物包含小于50个核苷酸，并且其中所述的核苷酸之间、所述的核苷酸与所述的HEG间隔之间、以及所述的3’末端核苷酸与所述的L1之间的一个或多个键为硫代磷酸酯键。2.权利要求1所述的支化的嵌合化合物，其中L2为：3.权利要求1或2所述的支化的嵌合化合物，其中L3为：4.权利要求1至3的任意一项所述的支化的嵌合化合物，其中所述的式-(OCH2CH2)n–的n为6,24,45或70。5.权利要求1至4的任意一项所述的支化的嵌合化合物，其中所述的F的分子量为大约300,000至大约500,000道尔顿。6.权利要求1至5的任意一项所述的支化的嵌合化合物，其中所述的D为由所述的核苷酸序列5’-TCGGCGCAACGTTCTCGGCGC-3’(SEQIDNO:1)组成的多核苷酸。7.权利要求1至5的任意一项所述的支化的嵌合化合物，其中所述的D为由5’-TCGGCGC-3’-HEG-5’-AACGTTC-3’-HEG-5’-TCGGCGC-3’(SEQIDNO:2)组成的线性的嵌合化合物。8.权利要求1至7的任意一项所述的支化的嵌合化合物，其中所述的L1为-(CH2)m-S-，其中m为2至9的整数。9.权利要求1至8的任意一项所述的支化的嵌合化合物，其中所述的x为20至200。10.权利要求9所述的支化的嵌合化合物，其中所述的x为90至150，n为6，并且m为3或6。11.权利要求1至10的任意一项所述的支化的嵌合化合物，其中所述的核苷酸之间的所有的键，其中所述的核苷酸与所述的HEG间隔之间存在的键、以及所述的3’末端核苷酸与所述的L1之间的键为硫代磷酸酯键。12.一种包含所述的核苷酸序列5’-TCGGCGCAACGTTC-3’(SEQIDNO:3)的分离的多核苷酸，其中所述的多核苷酸的长度小于50个核苷酸，并且其中所述的核苷酸之间的一个或多个键为硫代磷酸酯键。13.一种包含所述的核苷酸序列5’-TCGGCGCAACGTTCTCGGCGC-3’(SEQIDNO:1)的分离的多核苷酸，其中所述的多核苷酸的长度小于50个核苷酸，并且其中所述的核苷酸之间的一个或多个键为硫代磷酸酯键。14.权利要求13所述的多核苷酸，其中所述的多核苷酸由所述的核苷酸序列5’-TCGGCGCAACGTTCTCGGCGC-3’(SEQIDNO:1)组成。15.权利要求12至14的任意一项所述的多核苷酸，其中所述的多核苷酸为单链的。16.权利要求12至15的任意一项所述的多核苷酸，其中所述的多核苷酸为2’-脱氧核糖多核苷酸。17.权利要求12至16的任意一项所述的多核苷酸，其中所有的所述的键为硫代磷酸酯键。18.一种线性的嵌合化合物，其包含2个核酸部分和六乙二醇(HEG)间隔，如5’-TCGGCGC-3’-HEG-5’-AACGTTC-3’(SEQIDNO:4)，其中所述的线性的嵌合化合物包含少于50个核苷酸，并且其中所述的核苷酸之间以及所述的核苷酸与所述的HEG间隔之间的一个或多个键为硫代磷酸酯键。19.一种线性的嵌合化合物，其包含3个核酸部分和2个六乙二醇(HEG)间隔，如5’-TCGGCGC-3’-HEG-5’-AACGTTC-3’-HEG-5’-TCGGCGC-3’(SEQIDNO:2)，其中所述的线性的嵌合化合物包含少于50个核苷酸，并且其中所述的核苷酸之间以及所述的核苷酸与所述的HEG间隔之间的一个或多个键为硫代磷酸酯键。20.权利要求19所述的线性的嵌合化合物，其中所述的线性的嵌合化合物由5’-TCGGCGC-3’-HEG-5’-AACGTTC-3’-HEG-5’-TCGGCGC-3’(SEQIDNO:2)组成。21.权利要求18至20的任意一项所述的线性的嵌合化合物，其中所述的核酸部分为2’-脱氧核糖多核苷酸。22.权利要求18至21的任意一项所述的线性的嵌合化合物，其中所有的所述的键为硫代磷酸酯键。23.一种药物组合物，其包含(i)药物可接受的赋形剂，以及(ii)由权利要求1-11的任意一项所述的支化的嵌合化合物、权利要求12-17的任意一项所述的多核苷酸、以及权利要求18-22的任意一项所述的线性的嵌合化合物组成的组。24.权利要求23所述的药物组合物，其中所述的支化的嵌合化合物、所述的多核苷酸和所述的线性的嵌合化合物能够通过哺乳动物白细胞刺激细胞因子的产生，其包括以下的一种或多种：通过人...

【专利技术属性】
技术研发人员：G·S·奥特，R·J·米勒，R·L·科夫曼，R·基万，H·坎茨勒，
申请(专利权)人：戴纳瓦克斯技术公司，
类型：发明
国别省市：美国,US