一种同时测定艾纳香中7种成分含量的HPLC方法技术

本发明专利技术公开了一种同时测定艾纳香中7种成分含量的HPLC方法，该方法测定的7种咖啡酰基奎宁酸类成分为5‑O‑咖啡酰基奎宁酸、3‑O‑咖啡酰基奎宁酸、4‑O‑咖啡酰基奎宁酸、1,3‑O‑二咖啡酰基奎宁酸、3,4‑O‑二咖啡酰基奎宁酸、3,5‑O‑二咖啡酰基奎宁酸和4,5‑O‑二咖啡酰基奎宁酸，其测定步骤如下：(1)标准溶液的制备；(2)供试品溶液的制备；(3)7种咖啡酰基奎宁酸类成分含量测定标准曲线的建立；(4)样品中7中咖啡酰基奎宁酸类成分含量的测定。本发明专利技术操作简便，精密度、重复性、稳定性好，准确度高，能同时测定艾纳香中7种咖啡酰基奎宁酸类成分的含量，具有较大的实用价值。

【技术实现步骤摘要】
一种同时测定艾纳香中7种成分含量的HPLC方法
本专利技术涉及到一种艾纳香中7种咖啡酰基奎宁酸类成分的含量测定方法，属于中药

技术介绍
艾纳香Blumeabalsamifera(L.)DC为菊科艾纳香属植物，广泛分布于贵州、广东、海南等地，主要含有挥发油、黄酮类等化合物。其药用部位为其叶及嫩枝，具有祛风除湿药、温中止泻等功效，用于治疗风寒感冒、风湿痹痛、跌扑伤痛等症的治疗。研究表明，艾纳香具有明显的抗炎效果，可用于治疗风湿关节炎。研究发现，除黄酮类化合物外，咖啡酰基奎宁酸类化合物为艾纳香药材的主要非挥发性成分，且有文献报道咖啡酰基奎宁酸类化合物具有抗炎、抗病毒等多种生物活性，可作为艾纳香药材质量控制的指标成分，但目前未有艾纳香中该类成分的质量控制研究报道。因此，建立可靠、准确的含量测定方法测定该类成分的含量对药材质量控制有重要的现实意义。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供纳香中7种咖啡酰基奎宁酸类成分的含量测定方法这7种成分为：5-O-咖啡酰基奎宁酸、3-O-咖啡酰基奎宁酸、4-O-咖啡酰基奎宁酸、1,3-O-二咖啡酰基奎宁酸、3,4-O-二咖啡酰基奎宁酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸和4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸。本专利技术的技术方案包括以下步骤：S1，称取5-O-咖啡酰基奎宁酸、3-O-咖啡酰基奎宁酸、4-O-咖啡酰基奎宁酸、1,3-O-二咖啡酰基奎宁酸、3,4-O-二咖啡酰基奎宁酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸和4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸对照品用甲醇定容后制备得到各对照品贮备液；S2，称取艾纳香药材粉末加入甲醇称定重量，水浴加热回流，放冷，再称定重量，用同浓度的甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，取上清液离心后制备得到供试品溶液；S3，将各对照品贮备液稀释成不同浓度，按照设定的标准曲线色谱条件通过HPLC方法建立7种咖啡酰基奎宁酸类成分含量测定标准曲线，计算各成分线性回归方程；S4，按照标准曲线色谱条件对制备的供试品溶液进行测定，利用线性回归方程，计算样品中7种咖啡酰基奎宁酸类成分的含量。其中，S3中所述设定的色谱条件为：采用两支串联的色谱柱；以乙腈为流动相A，0.1％磷酸水为流动相B，进行梯度洗脱，洗脱梯度为：0～12分钟，流动相A由8％渐变至13.6％；12～17分钟，流动相A由13.6％渐变至16％；17～29分钟，流动相A由16％渐变至20％；29～44分钟，流动相A由20％渐变至24％；检测波长为325nm；流速0.8ml/min；进样量为10μl。进一步的，供试品溶液制备中加热回流时间为2小时。进一步的，供试品溶液制备中甲醇的浓度为25％。本专利技术具有如下优点：1、同时测定艾纳香中7种咖啡酰基奎宁酸类成分，检测时间为44分钟，检测效率高，方法简便、可靠。2、7种咖啡酰基奎宁酸类成分在一定范围类线性关系较好。3、能准确、快速的测定艾纳香中7种咖啡酰基奎宁酸类成分的含量，为艾纳香质量控制奠定一定基础。附图说明图1为混合对照品溶液色谱图，图中：1：5-O-咖啡酰基奎宁酸，2：3-O-咖啡酰基奎宁酸，3：4-O-咖啡酰基奎宁酸，4：1,3-O-二咖啡酰基奎宁酸；5：3,4-O-二咖啡酰基奎宁酸；6：3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸；7：4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸；图2为艾纳香供试品色谱图。具体实施方式下面结合附图和实施例对本专利技术作进一步说明，但不作为对本专利技术的任何限制。实施例1：本专利技术提供了一种同时测定艾纳香中5-O-咖啡酰基奎宁酸、3-O-咖啡酰基奎宁酸、4-O-咖啡酰基奎宁酸、1,3-O-二咖啡酰基奎宁酸、3,4-O-二咖啡酰基奎宁酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸和4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸7种咖啡酰基奎宁酸类成分的HPLC方法，具体实施步骤如下：1、仪器与试药UltiMate3000高效液相色谱仪(ThermoFisherScientific)，包括系统控制器、输液泵、脱气组件、低压梯度组件、自动进样器、柱温箱、温控样品室、UV-VIS检测器及Chromeleon色谱数据工作站。EL204型电子天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司)。贝克曼台式冷冻离心机(美国)。WP-UP-IV-20型超纯水机(四川沃特尔科技发展有限公司)。标准品5-O-咖啡酰基奎宁酸(四川省维克奇生物科技有限公司，纯度≥98％，批号：150426)，3-O-咖啡酰基奎宁酸(四川省维克奇生物科技有限公司，纯度≥98％，批号：151123)，4-O-咖啡酰基奎宁酸(四川省维克奇生物科技有限公司，纯度≥98％，批号：150922)，1,3-O-二咖啡酰基奎宁酸(中药固体制剂制造技术国家工程研究中心，纯度≥98％，批号：D15-20130213)，3,4-O-二咖啡酰基奎宁酸(中国科学院成都生物研究所，纯度99.05％％，批号：MUST-16031612)，3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸(中国科学院成都生物研究所，纯度98.82％，批号：MUST-16031611)，4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸(中国科学院成都生物研究所，纯度99.84％，批号：MUST-16031613)。乙腈、甲醇为色谱纯(国药集团化学试剂有限公司)；其余试剂为分析纯。艾纳香药材采自贵州省黔西南州望谟县蔗香镇新寨村艾纳香种植示范基地2、方法2.1标准溶液的制备：称取5-O-咖啡酰基奎宁酸、3-O-咖啡酰基奎宁酸、4-O-咖啡酰基奎宁酸、1,3-O-二咖啡酰基奎宁酸、3,4-O-二咖啡酰基奎宁酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸和4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸对照品各约10mg，精密称定，分别置于10ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，得各照品储备液；2.2供试品溶液的制备：精密称取艾纳香药材粉末(过40目筛)约0.5g，置于圆底烧瓶中，精密加入25％甲醇25ml，称定重量，水浴加热回流2小时，放冷，再称定重量，用25％的甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，取上清液置离心管中12000rpm离心5分钟，取上清液即得；2.37种咖啡酰基奎宁酸类成分含量测定标准曲线的建立：采用两支串联的ChromolithPerformanceRP-18e(100mm×4.6mm,Merck,Darmstadt,Germany)色谱柱；以乙腈为流动相A，0.1％磷酸水为流动相B，进行梯度洗脱，洗脱梯度为：0～12分钟，流动相A由8％渐变至13.6％；12～17分钟，流动相A由13.6％渐变至16％；17～29分钟，流动相A由16％渐变至20％；29～44分钟，流动相A由20％渐变至24％；检测波长为325nm；流速0.8ml/min；进样量为10μl；将各对照品贮备液稀释成不同浓度，建立标准曲线，计算各成分线性回归方程；2.4艾纳香中7种咖啡酰基奎宁酸类成分含量的测定：按照上述标准曲线色谱条件对制备的供试品溶液进行测定，利用线性回归方程，计算样品中7种咖啡酰基奎宁酸类成分的含量。3结果3.1色谱峰的归属图1中标准品从左至右1～7号峰分别为：5-O-咖啡酰基奎宁酸(7.93min)、3-O-咖啡酰基奎宁酸(11.49min)、4-O-咖啡酰基奎宁酸(12.56min)、1,3-O-二咖啡酰基奎宁酸(18.18min)、3,4-O-二咖啡酰基奎宁酸(29.89min)、3,5-本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种同时测定艾纳香中7种成分含量的HPLC方法，该7种成分为7种咖啡酰基奎宁酸类成分，分别为：5‑O‑咖啡酰基奎宁酸、3‑O‑咖啡酰基奎宁酸、4‑O‑咖啡酰基奎宁酸、1,3‑O‑二咖啡酰基奎宁酸、3,4‑O‑二咖啡酰基奎宁酸、3,5‑O‑二咖啡酰基奎宁酸和4,5‑O‑二咖啡酰基奎宁酸；其特征在于该方法包括如下步骤：S1，称取5‑O‑咖啡酰基奎宁酸、3‑O‑咖啡酰基奎宁酸、4‑O‑咖啡酰基奎宁酸、1,3‑O‑二咖啡酰基奎宁酸、3,4‑O‑二咖啡酰基奎宁酸、3,5‑O‑二咖啡酰基奎宁酸和4,5‑O‑二咖啡酰基奎宁酸对照品用甲醇定容后制备得到各对照品贮备液；S2，称取艾纳香药材粉末加入甲醇称定重量，水浴加热回流，放冷，再称定重量，用同浓度的甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，取上清液离心后制备得到供试品溶液；S3，将各对照品贮备液稀释成不同浓度，按照设定的标准曲线色谱条件通过HPLC方法建立7种咖啡酰基奎宁酸类成分含量测定标准曲线，计算各成分线性回归方程；S4，按照标准曲线色谱条件对制备的供试品溶液进行测定，利用线性回归方程，计算样品中7种咖啡酰基奎宁酸类成分的含量。

【技术特征摘要】
1.一种同时测定艾纳香中7种成分含量的HPLC方法，该7种成分为7种咖啡酰基奎宁酸类成分，分别为：5-O-咖啡酰基奎宁酸、3-O-咖啡酰基奎宁酸、4-O-咖啡酰基奎宁酸、1,3-O-二咖啡酰基奎宁酸、3,4-O-二咖啡酰基奎宁酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸和4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸；其特征在于该方法包括如下步骤：S1，称取5-O-咖啡酰基奎宁酸、3-O-咖啡酰基奎宁酸、4-O-咖啡酰基奎宁酸、1,3-O-二咖啡酰基奎宁酸、3,4-O-二咖啡酰基奎宁酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸和4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸对照品用甲醇定容后制备得到各对照品贮备液；S2，称取艾纳香药材粉末加入甲醇称定重量，水浴加热回流，放冷，再称定重量，用同浓度的甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，取上清液离心后制备得到供试品溶液；S3，将各对照品贮备液稀释成不同浓度，按照设定的标准曲线色谱条件通过HPLC方法建立7种咖啡酰基奎宁酸类成分含量测定标准曲...

【专利技术属性】
技术研发人员：李勇军，姚成芬，蒋礼，严平，刘亭，黄勇，孙绪，马雪，刘春花，陆苑，孙佳，
申请(专利权)人：贵州医科大学，
类型：发明
国别省市：贵州,52