识别高危HPV E7蛋白的单克隆抗体及其应用制造技术

本发明专利技术提供一种识别高危HPV E7阳性宫颈上皮癌细胞的单克隆抗体及其应用，该抗体能够高特异性地检测肿瘤细胞中的宫颈癌生物标志HPV E7蛋白，覆盖高危HPV16、HPV31、HPV35、HPV52和HPV58等高危亚型，从而能够区分癌变的宫颈上皮细胞和宫颈异常或非癌变宫颈上皮细胞，为医生准确诊断HPV感染所导致的癌症带来依据，可有效降低高级别宫颈病变的漏诊率，为临床医师对患者诊疗提供充分的时间与依据，改善前期宫颈疾病检测和早期干预。同时，也可以减少和避免不必要的阴道镜检查。

Monoclonal antibodies to identify high risk HPV E7 protein and its application

The present invention provides a monoclonal HPV identification of high-risk E7 positive cervical epithelial cancer cell antibody and its application, the antibody can specific detection of cervical cancer biomarkers HPV E7 protein in tumor cells, HPV16, HPV31, covering HPV35, HPV52 and HPV58 and other high-risk subtypes, which can distinguish cancerous cells. And cervical epithelial abnormalities or non cancerous cervical epithelial cells, which bring the basis for the doctor's accurate diagnosis of HPV infection caused by cancer, can effectively reduce the high misdiagnosis rate of cervical lesions, provides clinicians with time and sufficient basis for patients with cervical disease diagnosis and treatment, early detection and early intervention. At the same time, it is also possible to reduce and avoid unnecessary colposcopy.

【技术实现步骤摘要】
识别高危HPVE7蛋白的单克隆抗体及其应用
本专利技术属于生物诊断及医药领域，具体地说，本专利技术涉及识别人乳头状瘤病毒(HPV)16亚型阳性肿瘤细胞，包括人宫颈上皮癌细胞的单克隆抗体及其应用。
技术介绍
子宫颈癌是第二位常见女性恶性肿瘤,全球每年大约有50万女性被诊断为宫颈癌，其中超过半数的女性因此而死亡。宫颈癌早期症状并不明显，发展过程中存在较长的、可逆转的癌前病变期。据统计，约20％的低度宫颈损伤将转变为高度损伤，如果不及时治疗，其中30％将会进一步转为为恶性肿瘤。从一般的宫颈癌前病变发展为宫颈癌大约需要10年时间，在这期间若能及早诊断癌前病变，即可以预防癌症的发生。1976年德国科学家HaraldZurHausen提出HPV可能是性传播致癌因素之后，HPV感染与宫颈癌关系的研究成为肿瘤病毒病因研究的热门课题。2008年HaraldzurHausen因证明了HPV病毒是导致宫颈癌的病原体而获得了诺贝尔生理医学奖。目前已知的HPV病毒亚型有100多种，根据病毒致癌性的严重程度分两大类：①低危型HPV(非癌相关型)：最常见的亚型包括HPV6、11、42、43和44；②高危型HPV(癌相关型)：最常见的亚型包括HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66和68。其中在HPV亚型分类进化树上高危HPV16、31、33、35、52、58高度同源属于同一侧枝，而高危HPV18和HPV45高度同源属于另一侧枝(LidqvistM,NilssonOetal.DetectionofhumanpapillomavirusoncoproteinE7inliquid-basedcytology.2012)。全球99％以上的宫颈癌病例都与高危型HPV相关。成年妇女一生中感染HPV的几率是80％，我国妇女人口中有20～30％(因地区而异)是HPV阳性携带者(WangR,GuoX,WuSetal.Nationwideprevalenceofhumanpapillomavirusinfectionandviralgenotypedistributionin37citiesinChina.2015)。但HPV感染不等于宫颈癌，一过性感染的阳性携带者中80％以上在1～2年内可以自愈，只有很少一部分会进展到宫颈病变或癌症。2012年美国癌症学会(ACS)、美国阴道镜检查与宫颈病理学会(ASCCP)和美国临床病理学会(ASCP)建议，宫颈癌筛查的最佳策略是既能识别可能进展为浸润癌的癌前病变，又能避免对未必会有恶性进展的一过性HPV感染及其相应良性病变的探查和不必要治疗。多年来，国际上通用的宫颈上皮内瘤变及宫颈癌的诊断主要遵循“三阶梯”诊断程序，即宫颈细胞学、阴道镜及组织病理学检查。宫颈细胞学检查是普遍采用的宫颈上皮内瘤变及宫颈癌的筛查方法，可发现早期病变。但细胞学方法检测CIN-II及更高级别病变时的灵敏度较低，细胞学对于癌前病变不具有非常好的特异性，实验室间的结果差异大，且筛查间隔频繁。细胞学判读要求有形态学依据具有不可规避的主观性，并造成病理医生工作负担极其繁重。这些因素极大的制约了我国宫颈癌早期诊断和个体化治疗的效率及覆盖面。近年来，以生物标志物为原理的新检测手段日益得到临床应用的广泛重视。细胞增殖相关蛋白p16INK4a这一宫颈癌检测替代性分子靶点的应用在国内外宫颈癌诊断领域受到临床医生的广泛重视，它的临床应用有助于提高对高度癌前病变(CIN-II、CIN-III)的判读准确性和病理医师之间诊断结果的一致性。研究表明，在高危型HPV持续感染导致的细胞转化过程中，p16INK4a高表达与宫颈癌的关系是通过高危型HPVE7蛋白激活的信号通路来实现的。MiddletonKate等关于肿瘤演变过程中HPV诊断标志物选择的研究中表明，HPVE7蛋白在高级别病变时大量表达并与癌变程度呈正相关(MiddletonK.,etal.,Organizationofhumanpapillomavirusproductivecycleduringneoplasticprogressionprovidesabasisforselectionofdiagnosticmarkers.2003)。理论和大量研究数据表明E7蛋白可作为高度宫颈损伤和宫颈癌检测的一个特异性肿瘤分子标志物。因此，为了实现宫颈病变的早期精准诊断，需要提供一种不依赖于常规的形态学检查和针对高危HPV感染的分子检测的方法。该方法应当能够特异性地鉴定存在于所有患者群体中的高度子宫颈病变(尽可能的提高高危HPV亚型检测的覆盖率)，尤其能够对形态学检测被分类为低度病变、而实际上是高度病变的病例或者有发展为高度病变的重大可能性的病例进行分流。因此本领域需要这样的特异的、可靠的诊断方法，该方法能够检测高度子宫颈疾病并且能够对HPV检测阳性者进行分流。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种能够识别高危HPVE7蛋白阳性宫颈上皮癌细胞的单克隆抗体及其应用。在本专利技术的第一方面，提供了一种抗体的重链可变区，所述的重链可变区包括以下三个互补决定区CDR：SEQIDNO.4所示的CDR1，SEQIDNO.6所示的CDR2，和SEQIDNO.8所示的CDR3。在另一优选例中，所述重链可变区具有SEQIDNO.10所示的氨基酸序列。本专利技术的第二方面，提供了一种抗体的重链，所述的重链具有如本专利技术第一方面所述的重链可变区，和重链恒定区。在另一优选例中，所述的重链恒定区为人源、鼠源或兔源。本专利技术的第三方面，提供了一种抗体的轻链可变区，所述轻链可变区具有选自下组的互补决定区CDR：SEQIDNO.12所示的CDR1'，SEQIDNO.14所示的CDR2'，和SEQIDNO.16所示的CDR3'。在另一优选例中，所述的轻链可变区具有SEQIDNO.18所示的氨基酸序列。本专利技术的第四方面，提供了一种抗体的轻链，所述的轻链具有如本专利技术第三方面所述的轻链可变区，和轻链恒定区。在另一优选例中，所述的轻链恒定区为人源、鼠源或兔源。本专利技术的第五方面，提供了一种抗体，所述抗体具有：(1)如本专利技术第一方面所述的重链可变区；和/或(2)如本专利技术第三方面所述的轻链可变区。在另一优选例中，所述抗体具有：如本专利技术第二方面所述的重链；和/或如本专利技术第四方面所述的轻链。在另一优选例中，所述的抗体为特异性抗HPV的抗体；优选地，所述抗体为特异性抗HPV16的抗体；更优选地，所述抗体为特异性抗HPV16E7蛋白的抗体。教佳地.所述抗体还具有特异性抗HPV31、HPV35、HPV52、HPV58E7蛋白的功能。在另一优选例中，所述的抗体包括：单链抗体、双链抗体、单克隆抗体、嵌合抗体(如人兔嵌合抗体)、鼠源抗体、兔源抗体或人源化抗体。在另一优选例中，所述“HPV16E7蛋白”可以为野生型HPV16E7蛋白，也可以为野生型HPV16E7蛋白的衍生蛋白。所述“HPV31E7蛋白”可以为野生型HPV31E7蛋白，也可以为野生型HPV31E7蛋白的衍生蛋白，所述“HPV35E7蛋白”可以为野生型HPV35E7蛋白，也可以为野生型HPV35E7蛋白的衍生蛋白，所述“HPV52E7蛋白”可以为野生型HPV52E7蛋白，也可以为野本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抗体的重链可变区，其特征在于，所述的重链可变区包括以下三个互补决定区CDR：SEQ ID NO.4所示的CDR1，SEQ ID NO.6所示的CDR2，和SEQ ID NO.8所示的CDR3；优选地，所述重链可变区具有SEQ ID NO.10所示的氨基酸序列。

【技术特征摘要】
1.一种抗体的重链可变区，其特征在于，所述的重链可变区包括以下三个互补决定区CDR：SEQIDNO.4所示的CDR1，SEQIDNO.6所示的CDR2，和SEQIDNO.8所示的CDR3；优选地，所述重链可变区具有SEQIDNO.10所示的氨基酸序列。2.一种抗体的重链，其特征在于，所述的重链具有如权利要求1所述的重链可变区和重链恒定区。3.一种抗体的轻链可变区，其特征在于，所述轻链可变区具有选自下组的互补决定区CDR：SEQIDNO.12所示的CDR1'，SEQIDNO.14所示的CDR2'，和SEQIDNO.16所示的CDR3'；优选地，所述的轻链可变区具有SEQIDNO.18所示的氨基酸序列。4.一种抗体的轻链，其特征在于，所述的轻链具有如权利要求3所述的轻链可变区和轻链恒定区。5.一种抗体，其特征在于，所述抗体具有：如权利要求1所述的重链可变区；和/或如权利要求3所述的轻链可变区；或者，所述抗体具有：如权利要求2所述的重链；和/或如权利要求4所述的轻链。6.一种重组蛋白，其特征在于，所述的重组蛋白具有：(i)如权利要求1所述的重链可变区、如权利要求2所述的重链、如权利要求3所述的轻链可变区、如权利要求4所述的轻链、或如权利要求5所述的抗体；以及(ii)任选的协助表达和/或纯化的标签序列。7.一种多核苷酸，其特征在于，它编码选自下组的多肽：(1)如权利要求1所述的重链可变区、如权利要求2所述的重链、如权利要求3所述的轻链可变区、如权利要求4所述的轻链、或如权利要求5所述的抗体；或(2)如权利要求6所述的重组蛋白。8.一种载体，其特征在于，它含有本发明权利要求7所述的多核苷酸。9.一种遗传工程化的宿主细胞，其特征在于，它含有权利要求8所述的载体或基因组中整合有权利要求7所述的多核苷酸。10.一种免疫偶联物，其特征在于，该免疫偶联物含有：(a)如权利要求1所述的重链可变区、如权利要求2所述的重链、如权利要求3所述的轻链可变区、如权利要求4所述的轻链、或如权利要求5所述的抗体；和(b)选自下组的偶联部分：可检测标记物、药物、毒素、细胞因子、放射...

【专利技术属性】
技术研发人员：常小迦，刘岩，时成龙，韩凤丽，施丽君，
申请(专利权)人：艾托金生物医药苏州有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32