针对肝细胞生长因子的人源化单克隆抗体制造技术

本发明专利技术涉及针对肝细胞生长因子的人源化中和性单克隆抗体、含有它的药物组合物以及包括给患者施用这样的药物组合物的治疗方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术总的来说涉及将单克隆抗体(Mtb)和重组DNA技术相结 合来开发新的生物制品，更具体来说，例如，涉及了结合和中和肝细 胞生长因子的人源化单克隆抗体的生产。
技术介绍
人类肝细胞生长因子(HGF)是间充质细胞产生的多功能的异二 聚体多肽。HGF已经被显示出刺激血管生成、形态发生和活动发生(motogenesis)，以及各种不同细胞类型的生长和播散(Bussolino等， J. Cell. Biol. 119: 629， 1992; Zamegar禾P Michalopoulos, J. Cell. Biol. 129:1177， 1995; Matsumoto等，Ciba. Found. Symp. 212:198， 1997; Birchmeier和Gherardi， Trends Cell. Biol, 8:404， 1998; Xin等，Am. J. Pathol. 158:1111 ，2001) 。 HGF多效的活性是通过它的受体一原癌基因 cMet编码的跨膜酪氨酸激酶来介导的。除了调节各种正常的细胞功能 之外，HGF及其受体c-Met已经显示参与了肿瘤的启动、浸润和转移(Jeffers等，J. Mol, Med. 74:505, 1996; Comoglio和Trusolino， J. Clin. Invest. 109:857,2002)。在各种的人类实体肿瘤，包括源于肺、结肠、直肠、胃、肾、卵巢、皮肤、多种骨髓瘤和甲状腺组织的肿瘤上，HGF/cMet 是共表达的，通常是过表达的(Prat等，Int. J. Cancer 49:323, 1991; Chan等，Oncogene 2:593， 1988; Weidner等，Am. J. Respir. Cell. Mol. Biol. 8:229， 1993; Derksen等，Blood 99:1405， 2002) 。 HGF的功能 是作为这些肿瘤的自分泌(Rong等，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91 :4731， 1994; Koochekpour等，Cancer Res. 57:5391， 1997)和旁分泌生长因 子(Weidner等，Am. J. Respir. Cell. Mol. Biol. 8:229, 1993)和抗凋亡 调节因子(Gao等，J. Biol. Chem. 276:47257， 2001)。HGF是102 kDa的蛋白，序列和结构类似于纤溶酶原和其它凝血 酶(Nakamura等，Nature 342:440， 1989; Weidner等，Am. J. Respir. Cell. Mol. Biol. 8:229, 1993)。人类HGF被合成为728个氨基酸的前体 (preproHGF)合成，它经过细胞内裂解成为无活性的单链的形式 (proHGF) (Nakamura等，Nature 342:440, 1989; Rosen等，J. Cell. Biol. 127:1783， 1994)。细胞外分泌之后，proHGF被裂解，产生了由a-亚基和/3-亚基构成的具有生物活性的二硫键连接的异二聚体分子 (Nakamura等，Nature 342:440, 1989 ; Naldini等，EMBO J. 11:4825,1992) 。 a-亚基含有440个残基(糖基化后为69 kDa)，由 N-末端发夹结构域和4个三环结构域组成。0-亚基含有234个残基(34 kDa)，并具有丝氨酸蛋白酶样结构域，但是不具有蛋白水解活性。HGF 具有两个独特的细胞特异性结合位点cMet受体的高亲和性(Kd = 2x 1(T1()M)结合位点和硫酸乙酰肝素蛋白多糖(HSPG)的低亲和性(Kd =10—9 M)结合位点，它们存在于细胞表面和细胞外基质上(Naldini 等，Oncogene 6:501,1991; Bardelli等，J. Biotechnol. 37:109, 1994; Sakata等，J. Biol. Chem., 272:9457， 1997)。cMet受体是IV类蛋白酪氨酸激酶受体家族的成员。全长cMet基 因被克隆并鉴定为cMet原癌基因(Cooper等，Nature 311 :29, 1984; Park等，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84:6379， 1987) 。 NK2 (含有o;-亚基的N-末端和前两个三环结构域的蛋白)足够与cMet结合并激活活动性的信号级联，但是对于促有丝分裂反应来说需要全长蛋白(Weidner 等，Am. J. Respir. Cell. Mol. Biol. 8:229, 1993) 。 HSPG通过与HGF的N末端相互作用来结合HGF。已经报道HGF/cMet在癌症发展的几个方面中发挥了重要作用， 例如肿瘤的启动、浸润、转移以及调控凋亡和血管生成。为了获得有 效的拮抗分子，已经研究了几种不同的方法截短的HGF蛋白例如NK1 (N末端结构域加上三环结构域1; Lokker等，J. Biol. Chem. 268:17145,1993) 、 NK2 (N末端结构域加上三环结构域1和2; Chan 等，Science 254:1382， 1991)和NK4 (N-末端结构域加上4个三环结构 域；Kuba等，Cancer Res. 60:6737， 2000)、抗cMet mAb (Dodge，硕 士论文，San Francisco State University, 1998)和抗HGF mAb (Cao等， Proc. Natl. Acad. Sci. USA 98:7443, 2001，在此引为参考)。NK1和NK2可以与HGF的受体有效地竞争与HGF的结合，但是 据报道在体外有部分拮抗活性(Cioce等，J. Biol. Chem. 271:13110， 1996; Schwall等，J. Cell Biol. 133:709, 1996)，而不是所需的纯粹的 拮抗剂活性。最近，在Kuba等，Cancer Res. 60:6737， 2000中报道了， 通过在裸鼠模型中持续输注NK4， NK4能够部分抑制鼠肺肿瘤LLC的 原发生长和转移。但是，NK4必需连续给药才能获得部分抑制原发肿 瘤生长的这个事实，表明NK4分子可能半衰期短和/或缺乏效能。Cao等，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 98:7443, 2001报道了根据体外 抑制HGF的扩散活性的能力而选择的三种抗HGF mAb的混合物的给 药，能够抑制人类异种移植肿瘤在裸鼠模型中的生长。他们推测为了 体内抑制HGF的生物活性，需要识别HGF上的三种不同结合位点的 三种mAb:两种mAb抑制HGF与cMet结合， 一种mAb抑制HGF与 肝素的结合。最近，已经报道了使用转基因小鼠技术开发的单独结合和中和HGF的人类mAb( Burgess等，WO 2005/017107A2和Burgess等，Cancer Res 66:1721 ,2006，其各在此引为通用参考)。但是，其中至少2.12.1 mAb，其明显是异种移植肿瘤模本文档来自技高网...

【技术保护点】
人源化单克隆抗体（ｍＡｂ），其结合并中和人类肝细胞生长因子（ＨＧＦ）。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：金京珍，王立宏，朴翰吉，马克西米利亚诺瓦斯克斯，
申请(专利权)人：加拉克西生物技术有限责任公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]