多聚核苷酸‑5’激酶‑3’磷酸酶的新应用制造技术

本发明专利技术属于涉及药物领域，公开多聚核苷酸‑5’激酶‑3’磷酸酶的新应用，本发明专利技术通过免疫组织化学染色法证明免疫组织化学染色法在胰腺癌组织中的表达明显低于癌旁组织，且PNKP表达越低，胰腺癌恶性程度越高。因此提供了多聚核苷酸‑5’激酶‑3’磷酸酶在制备诊断胰腺癌的产品中的应用。本发明专利技术还提供了雷公藤内酯酮作为多聚核苷酸‑5’激酶‑3’磷酸酶抑制剂的应用。本发明专利技术进一步还提供了以多聚核苷酸‑5’激酶‑3’磷酸酶为靶标在制备治疗胰腺癌的药物中的应用。多聚核苷酸‑5’激酶‑3’磷酸酶作为诊断胰腺癌的标志物，使胰腺癌诊断更加准确、快速，作为治疗胰腺癌药物的靶标为治疗胰腺癌提供了新的治疗靶点和治疗途径。

Polynucleotide kinase 5 '3 new applications' phosphatase

This invention relates to the field of medicine and public polynucleotide 5 '3' new application kinase phosphatase, the expression of immunohistochemical staining in pancreatic carcinoma was significantly lower than that of adjacent tissues by immunohistochemical staining, and the expression of PNKP is lower, the higher the degree of malignancy of pancreatic cancer. It provides the application of polynucleotide kinase 5 '3' phosphatase in the preparation of products in the diagnosis of pancreatic cancer. The invention also provides Triptonide as polynucleotide kinase 5 'using 3' - phosphatase inhibitor. The invention further provides a polynucleotide kinase 5 '3' for the application of drug targets in the phosphatase preparation in the treatment of pancreatic cancer. Polynucleotide kinase 5 '3' phosphatase as a sign for the diagnosis of pancreatic cancer, the diagnosis of pancreatic cancer more accurately and quickly, as a drug target for the treatment of pancreatic cancer treatment target for treatment and a new way for the treatment of pancreatic cancer.

【技术实现步骤摘要】
多聚核苷酸-5’激酶-3’磷酸酶的新应用
本专利技术属于涉及药物领域，具体涉及多聚核苷酸-5’激酶-3’磷酸酶的新应用，进一步涉及多聚核苷酸-5’激酶-3’磷酸酶在制备诊断胰腺癌的产品中的应用和多聚核苷酸-5’激酶-3’磷酸酶在制备治疗胰腺癌的药物中的应用。
技术介绍
胰腺癌是胰腺细胞和导管细胞来源的恶性肿瘤。流行病学研究揭示，胰腺癌发病率呈持续升高趋势。胰腺癌是预后最差的恶性肿瘤，五年生存率仅6％。近三十年中，胰腺癌患者增加了6倍，且其发病率逐年升高。新发胰腺癌病例数逐年升高，流行病学专家预测，在未来三十年，胰腺癌很有可能成为癌症中第二致死数量的恶性肿瘤，对人类的危害将越来越大。近三十年来，尽管世界各国医务人员和研究者在抗胰腺癌治疗做了坚持不懈的努力，但胰腺癌患者五年生存率仅从3％提高至6％。虽然外科手术是治愈实体瘤的最有效治疗手段，但超过80％的胰腺癌患者在确诊时就已经在腹部扩散，或有多器官转移，错过了手术的最佳时机，外科手术已爱莫能助。在近20％可手术的胰腺癌患者中，即使接受最理想手术治疗(R0切除),术后患者的生存期也只有15-19月，5年生存率仅为20％。JohnHopkins等研究团队报道称，标准胰和十二指肠切除联合局部淋巴结清扫并不能改善患者在1、3、5年内的中位生存期(Hackert,etal.,2015；Krska,etal.,2015)。大宗临床资料显示，目前胰腺癌病人5年生存率为6％左右，外科手术对于改善胰腺癌的预后收效甚微(Hackert,etal.,2015；Krska,etal.,2015)。胰腺癌对放化疗不敏感，且易产生耐药性。研究表明，吉西他滨(gemcitabine)已取代5-Fu成为胰腺癌药物治疗的一线药物；但吉西他滨单药仅可以将5-Fu治疗的生存中位时间由4.4月延长到5.6月，仅延长了1.2个月(Krska,etal.,2015)。近年来，以吉西他滨为基础的联合化疗方案不断被应用于临床试验，包括吉西他滨联合厄洛替尼、或卡培他滨、或吉西他滨联合放化疗，结果显示联合放化疗亦仅可延长胰腺癌病人短期生存期2-4个月，但不能提高五年生存期(Garrido-LagunaandHidalgo,2015；RubinsonandWolpin,2015)。此外，免疫治疗和抗血管新生治疗等也试用于治疗胰腺癌，但疗效欠佳。目前中药治疗胰腺癌研究大致分为三个方面：(A)中药方剂:已有报道由7味中药组成的Qingyihuaji方剂(QYHJ)在体外对胰腺癌细胞株具有抑制作用，但在动物体内抑瘤率仅为50％左右(潘会君等.,2013)，疗效不高。(B)中药单体:蟾毒灵(李梅影等.,2013)、丹参酮ⅡA磺酸钠(陈景等.,2013)、蛋白磷酸酶2A抑制剂等，能在体外抑制胰腺癌细胞生长，但体内抗胰腺癌效果不良，迄今尚未见在临床治疗胰腺癌的报道。(C)中药联合放化疗：中药复方制剂联合放化学治疗，能增强胰腺癌细胞对吉西他滨敏感性，使抗肿瘤效果略有所提高，并可显著降低化疗副作用(朱晓燕等.,2013)。但从总体来看，目前中药抗胰腺癌疗效也不高，迄今尚未成为抗胰腺癌的一线药物。如上所述，由于外科手术对80％胰腺癌病人不适合，且术后疗效不佳，放化疗成为治疗胰腺癌的主要手段(Hackert,etal.,2015；Krska,etal.,2015)。研究表明，对于早期胰腺癌患者，吉西他滨联合化疗能改善胰腺癌病人反应率和短期生存率，但不能延长患者的长期生存率。在根治术后的联合放化疗，可以延长近期生存期四个月左右；但对于姑息性治疗的患者，联合放化疗能局部控制肿瘤。对于晚期和转移性胰腺癌患者，联合化疗FOLFIRINOX方案和白蛋白结合性紫杉醇联合吉西他滨方案，也只能延长患者的短期生存率4个月左右，但不能提高胰腺癌病人5年生存率。由于联合化疗采用了吉西他滨等4种抗癌药物，对正常人体毒副作用较大；联合化疗和放疗对胰腺癌疗效的毒副作用大，可造成多个脏器功能紊乱，导致部分病人过度治疗死亡，抗胰腺癌治疗面临巨大的挑战(Garrido-LagunaandHidalgo,2015；RubinsonandWolpin,2015)。多聚核苷酸激酶/磷酸酶(polynucleotidekinase/phosphatase，PNKP)是一个相对分子质量为5.7万道尔顿的双功能DNA末端修复酶，其同时具有5'-激酶和3'-磷酸酶的活性，可以催化修复5'-P和3'-OH末端，在DNA损伤修复中有重要的作用。然而，还未见PNKP在胰腺癌的诊断和治疗方面的相关研究报道。
技术实现思路
本专利技术人研究了多聚核苷酸-5’激酶-3’磷酸酶(PNKP)在胰腺癌组织及癌旁组织中的表达，证实胰腺癌病人肿瘤组织和细胞中PNKP异常低表达，且PNKP表达越低，胰腺癌恶性程度越高。因此本专利技术提供了多聚核苷酸-5’激酶-3’磷酸酶作为胰腺癌标志物的应用。进一步，本专利技术提供了多聚核苷酸-5’激酶-3’磷酸酶在制备诊断胰腺癌的产品中的应用。其中，本专利技术所述诊断胰腺癌的产品包括但不限于RT-PCR诊断胰腺癌试剂盒、实时定量PCR诊断胰腺癌试剂盒、免疫检测诊断胰腺癌试剂盒或蛋白芯片诊断胰腺癌试剂盒。因此本专利技术还提供了一种RT-PCR诊断胰腺癌试剂盒、一种实时定量PCR诊断胰腺癌试剂盒、一种免疫检测诊断胰腺癌试剂盒、一种蛋白芯片诊断胰腺癌试剂盒。本专利技术所述RT-PCR诊断胰腺癌试剂盒，至少包括一个特异扩增多聚核苷酸-5’激酶-3’磷酸酶基因的引物组。本专利技术所述实时定量PCR诊断胰腺癌试剂盒，至少包括一个特异扩增多聚核苷酸-5’激酶-3’磷酸酶基因的引物组。本专利技术所述免疫检测诊断胰腺癌试剂盒包括但不限于ELISA试剂盒，免疫印染试剂盒，免疫组化试剂盒，免疫荧光试剂盒。本专利技术所述免疫检测诊断胰腺癌试剂盒，包括与多聚核苷酸-5’激酶-3’磷酸酶特异性结合的抗体。本专利技术所述蛋白芯片诊断胰腺癌试剂盒，包括与多聚核苷酸-5’激酶-3’磷酸酶特异性结合的抗体。所述与多聚核苷酸-5’激酶-3’磷酸酶特异性结合的抗体可以为多克隆抗体或单克隆抗体。本领域技术人员可以使用一系列本领域已知的方法来制备针与多聚核苷酸-5’激酶-3’磷酸酶的特异的抗体。例如，将提纯的多聚核苷酸-5’激酶-3’磷酸酶基因产物或它的抗原片段注射入动物体内以产生多克隆抗体。同样，表达多聚核苷酸-5’激酶-3’磷酸酶或它的抗原的细胞也可以用来对动物致免疫而产生抗体。根据本专利技术制备的抗体可以是单克隆抗体，这些单克隆抗体可用杂交瘤及时制备。进一步的，本专利技术所述诊断胰腺癌的试剂盒还包括其他组分。在一些实施例中，所述免疫检测诊断胰腺癌的试剂盒还包括免疫检测的其他组分，如酶免疫试剂盒还包括反应缓冲液、标记抗体的酶、酶反应底物等，其中标记抗体的酶有(horseradishperoxidase)、碱性磷酶(alkalinephosphatase)等。雷公藤是一味传统中药，雷公藤内酯酮(triptonide，TN)和雷公藤内酯醇(triptolide)是中药雷公藤的活性成分；在分子结构上，两者属于二萜类环氧化物,其母核结构类似，但TN的C-14位为羰基，而雷公藤内酯醇的C-14位为羟基；这一活性基团的不同，使得两个化合物之间的功能和毒性本文档来自技高网...

【技术保护点】
多聚核苷酸‑5’激酶‑3’磷酸酶作为胰腺癌标志物的应用。

【技术特征摘要】
1.多聚核苷酸-5’激酶-3’磷酸酶作为胰腺癌标志物的应用。2.多聚核苷酸-5’激酶-3’磷酸酶在制备诊断胰腺癌的产品中的应用。3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述诊断胰腺癌的产品为RT-PCR诊断胰腺癌试剂盒、实时定量PCR诊断胰腺癌试剂盒、免疫检测诊断胰腺癌试剂盒或蛋白芯片诊断胰腺癌试剂盒。4.一种免疫检测诊断胰腺癌试剂盒，其特征在于，包括与多聚核苷酸-5’激酶-3’磷酸酶特异性结合的抗体。5.一种蛋白芯片诊断胰腺癌试剂盒，其特征在于，包括与多聚核苷酸-5’激酶-3’磷酸酶特异性结合的抗体。6....

【专利技术属性】
技术研发人员：周泉生，曹志飞，
申请(专利权)人：苏州大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32