基于HPCE建立新疆紫草指纹图谱的方法及应用技术

本发明专利技术公开了基于HPCE建立新疆紫草指纹图谱的方法及应用，该方法包括新疆紫草的供试品溶液及对照品溶液的制备、毛细管电泳分析，其中，毛细管电泳分析中的运行缓冲液包括15～35mmol·L

【技术实现步骤摘要】
基于HPCE建立新疆紫草指纹图谱的方法及应用
本专利技术属于中药指纹图谱领域，具体地说，涉及基于HPCE建立新疆紫草指纹图谱的方法及应用。
技术介绍
紫草是我国传统中药材，2015版《中华人民共和国药典》收载的紫草为紫草科植物新疆紫草Arnebiaeuchroma(Royle)Johnst.或内蒙紫草ArnebiaguttataBunge的干燥根。紫草味甘、咸，性寒，归心、肝经，具有清热凉血、活血解毒、透疹消斑的功能，用于血热毒盛，斑疹紫黑，麻疹不透，疮疡，湿疹，水火烫伤等的治疗，是中医临床常用的清热解毒、凉血止血药物。药理学研究表明紫草还具有杀菌抗炎、护肝、抗HIV、抗生育、抗肿瘤、延缓衰老以及免疫调节等作用。紫草的有效化学成分主要有两大类，一类是脂溶性成分，主要是萘醌类色素，统称总色素；此外还含有酚酸类、生物碱类、苯酚及苯醌类、三萜酸及甾醇类、黄酮类等；另一类是水溶性成分，主要是紫草多糖。从结构角度看，紫草中有效成分萘醌类主要包括紫草素及其衍生物，有乙酰紫草素、异丁酰紫草素等，其母核均为5，8－二羟基萘醌，且都具有异己烯侧链。脂肪酸的成分主要有软脂酸、油酸及亚油酸等；紫草的水溶性成分是酸性多糖(含量2％左右)和酚酸。紫草水提物及醇提物都有一定的抗炎、镇痛作用。2015版《中国药典》规定紫草羟基萘醌总色素以左旋紫草素计不得少于0.8％，β,β′-二甲基丙烯酰阿卡宁不得少于0.3％。显然质量控制还不够完全。因此需要建立紫草的指纹图谱，为紫草的质量评价和控制提供更有力的依据，同时为其鉴别提供依据。指纹图谱技术能对中药进行整体、宏观和全面的分析表达，已被公认为天然药物质量控制最有效的方法之一。目前紫草的分析方法主要有薄层扫描法(TLC)、紫外-可见分光光度法、气相色谱法(GC)、液相色谱法(HPLC)。薄层扫描法操作程序过多，影响因素不易消除；TLC常需配合一些辅助手段，过程复杂；HPLC分析时间长、试剂成本高、样品处理较繁琐。李方悦、江林等均采用HPLC法建立了新疆紫草的指纹图谱。但由于新疆紫草的成分复杂，需要采用梯度洗脱，时间长，处理繁琐，分析成本高且污染环境。新疆紫草是国家二级保护植物，是紫草的主要来源，有道地药材之誉。因此需要一种方便快捷、稳定可靠的分析方法来建立新疆紫草的指纹图谱，来进行更完善的质量控制。毛细管电泳(capillaryelectrophoresis，CE)，又称高效毛细管电泳(highperformancecapillaryelectrophoresis，HPCE)，是一种高效分离技术，具有高效、快速、进样体积小、溶剂消耗少和抗污染能力强等特点，在中药有效成分分析、指纹图谱研究方面显示出显著的优势。目前尚未见基于HPCE建立的新疆紫草的指纹图谱的方法。本申请人在先发表的文章“毛细管电泳分离法检测新疆紫草中萘醌类成分”中，利用毛细管电泳对新疆紫草中的萘醌类成分进行了检测分离。实验条件为检测波长200nm，运行缓冲液为含20％乙醇的硼酸盐缓冲液(0.1mol·L-1，pH＝8.0)，进样量3.45kPa×5s，分离电压20kV。但该技术制备粗提物后对萘醌类成分进一步处理的较为繁琐，对紫草的有效成分紫草素的分离效果也较差，对新疆紫草提取物其它成分的检测效果和分离效果不好，同时为降低200nm检测波长下溶剂峰的干扰，因此需进一步探索更优良的电泳条件。有鉴于此特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题在于克服现有技术的不足，提供基于HPCE建立新疆紫草指纹图谱的方法及应用。本专利技术新疆紫草的指纹图谱的方法，样品的前处理简单方便、电泳过程高效快捷、无污染，所得谱图特征峰多，稳定性高，可控性好，可以为新疆紫草的质量控制提供依据，并为区别新疆紫草、内蒙紫草及其他类型紫草提供了鉴别方法。为解决上述技术问题，本专利技术采用技术方案的基本构思是：本专利技术的第一目的是提供一种基于HPCE建立新疆紫草指纹图谱的方法，包括紫草的供试品溶液及对照品溶液的制备、毛细管电泳分析，其中，毛细管电泳分析中的运行缓冲液包括15～35mmol·L-1的十二烷基硫酸钠(SDS)。本专利技术在毛细管电泳的运行缓冲液中添加了15～35mmol·L-1的SDS，基线平稳，峰数目多，各组分的分离度好。进一步的方案，所述SDS的浓度为25～35mmol·L-1；优选地，SDS的浓度为25mmol·L-1。在毛细管电泳的运行缓冲液中添加不同终浓度的SDS对分离度的影响也不同，一定范围内。随SDS浓度的增加，微乳液滴的稳定性增加，运行缓冲溶液对疏水性组分的增溶能力也增强，对脂溶性组分的分离能力增强。实验证明含有浓度25～35mmol·L-1SDS的电泳缓冲液的分离度更好；SDS达到一定浓度后，分离度改善不大，而各组分特征峰出峰时间延长。经过大量的筛选试验，本专利技术综合考虑电泳图的分离度和样品的分析时间，在毛细管电泳中，选择使用含有浓度为25mmol·L-1SDS的运行缓冲液进行电泳的分离度和分离时间最为理想。进一步的方案，运行缓冲液中还包括体积分数为10％～30％的无水乙醇。本专利技术的运行缓冲溶液中添加了一定比例的无水乙醇，提高了SDS的表面活性作用，对样品有增溶作用，同时，在本专利技术中的运行缓冲溶液条件下，无明显溶剂峰出现，故不会产生样品峰和溶剂峰融合这一现象，不影响分离度。优选地，运行缓冲液中包括体积分数为20～25％的无水乙醇；更优选地，运行缓冲液中无水乙醇的体积分数为20％。进一步的方案，运行缓冲液还包括磷酸缓冲液或硼酸盐缓冲液，优选硼酸盐缓冲液；所述硼酸盐缓冲液的pH为7.4～9.0，优选地，硼酸盐缓冲液的pH＝8.0。进一步的方案，所述硼酸盐缓冲液的浓度为100～200mmol·L-1；优选地，所述硼酸盐缓冲液的浓度为100～150mmol·L-1；更优选地，所述硼酸盐缓冲液的浓度为100mmol·L-1。进一步的方案，所述毛细管电泳分析中分离电压为13～25kV，优选地，分离电压为20～25kV，更优选地，分离电压为25kV。分离电压为13～25kV范围内时，能够得到多个特征峰，随着电压的升高，分离时间越短，但分离度无明显差异，分离电压为20～25kV的分离时间明显短于分离电压为13kV、16kV的分离时间。分离电压为25kV时，分离度较好，可以明显提高柱效，缩短分离时间，基线平稳。因此最优选方案的分离电压为25kV。进一步的方案，所述毛细管电泳分析的条件为：运行缓冲液包括pH＝8.0的100mmol·L-1硼酸盐缓冲液、25mmol·L-1的SDS和体积分数为20％的无水乙醇；分离电压：25kV，检测波长214nm。进一步的方案，紫草的对照品溶液和供试品溶液的进样量为3.45kPa×3s～3.45kPa×5s，优选地，进样量为3.45kPa×5s。进一步的方案，新疆紫草的供试品溶液的制备方法为：取新疆紫草药材，加无水乙醇超声提取，减压抽滤；再将滤渣加无水乙醇，超声过滤；将两次滤液合并，旋蒸浓缩后再加运行缓冲溶液定容，得到供试品溶液。进一步的方案，所述毛细管电泳分析采用未涂层的毛细管柱，其内径为50μm，总长度为50.2cm，有效长度为40.0cm。进一步的方案，所述新疆紫草供试品溶液的制备方法包括：取新疆紫草药材，加无水乙本文档来自技高网...

【技术保护点】
基于HPCE建立新疆紫草指纹图谱的方法，包括新疆紫草的供试品溶液及对照品溶液的制备、毛细管电泳分析，其特征在于，毛细管电泳分析中的运行缓冲液包括15～35mmol·L

【技术特征摘要】
1.基于HPCE建立新疆紫草指纹图谱的方法，包括新疆紫草的供试品溶液及对照品溶液的制备、毛细管电泳分析，其特征在于，毛细管电泳分析中的运行缓冲液包括15～35mmol·L-1的十二烷基硫酸钠。2.根据权利要求1所述的基于HPCE建立新疆紫草指纹图谱的方法，其特征在于，所述十二烷基硫酸钠的浓度为25～35mmol·L-1，优选地，十二烷基硫酸钠的浓度为25mmol·L-1。3.根据权利要求1或2所述的基于HPCE建立新疆紫草指纹图谱的方法，其特征在于，运行缓冲液中还包括体积分数为10％～30％的无水乙醇；优选地，运行缓冲液中无水乙醇的体积分数为20～25％；更优选地，运行缓冲液中无水乙醇的体积分数为20％。4.根据权利要求1-3任意一项所述的基于HPCE建立新疆紫草指纹图谱的方法，其特征在于，运行缓冲液还包括磷酸缓冲液或硼酸盐缓冲液，优选硼酸盐缓冲液；所述硼酸盐缓冲液的pH为7.4～9.0，优选地，硼酸盐缓冲液的pH为8.0。5.根据权利要求4所述的基于HPCE建立新疆紫草指纹图谱的方法，其特征在于，所述硼酸盐缓冲液的浓度为100～200mmol·L-1，优选地，硼酸盐缓冲液的浓度为100～150mmol·L-1，更优选地，硼酸盐缓冲液的浓度为100mmol·...

【专利技术属性】
技术研发人员：申刚义，张蕾，张爱芹，王嫚，
申请(专利权)人：中央民族大学，
类型：发明
国别省市：北京,11