一种用于诊断川崎病的生物标记物及试剂盒与用途制造技术

本发明专利技术公开了一种用于诊断川崎病的生物标记物及试剂盒与用途。所述用于诊断川崎病的生物标记物包含miR‑223‑3p、miR‑182‑5p、miR‑183‑5p、miR‑378a‑3p、miR‑30c‑5p、miR‑148a‑3p、miR‑27a‑3p、miR‑145、miR‑140‑3p、miR‑125a‑5p与miR‑30e‑3p等11种miRNAs。所述试剂盒中含有针对这11种miRNAs进行PCR检测所用引物，使用该试剂盒并配套相应的PCR试剂盒即可获得11种miRNAs的含量，并通过CT值计算得到川崎病的患病风险。本发明专利技术具有灵敏度高、稳定性好等优点，提高了川崎病在早期诊断的检出率。

【技术实现步骤摘要】
一种用于诊断川崎病的生物标记物及试剂盒与用途
本专利技术涉及分子生物学
，更具体地，涉及用于DNA
，特别是指一种用于诊断川崎病的生物标记物及试剂盒与其用途。
技术介绍
川崎病(Kawasakidisease，KD)于1967年由日本川崎富作首先报告，曾被称为皮肤黏膜淋巴结综合征(mucocutaneouslymphnodesyndrome,MCLS)，是一种原因未明的急性、自限性全身免疫性血管炎。它主要发病年龄为6个月～4岁，其特征为广泛的中小血管炎，以心血管系统的损害最为严重，主要累及冠状动脉，大约15％～25％未经治疗的儿童最终发展为冠状动脉损害，使其成为发达国家儿童获得性心脏病最常见的原因。研究认为，KD急性期、恢复期均存在长期的血管内皮功能紊乱，成为成人易患冠状动脉粥样硬化的危险因素。2004年美国心脏病协会提出：KD恢复后血管内皮功能持续性障碍，可能是冠心病发生的新的危险因素。川崎病(KD)作为一种急性、自限性的全身性血管炎，主要临床表现为发热、口腔黏膜改变、皮疹、颈部淋巴结肿大、球结膜充血和肢端改变等。其特征为广泛的中、小血管炎症，以心血管系统损害最为严重，组织病理表现包括全血管炎、内皮坏死、单核细胞浸润中、小血管等。如果未及时经正规治疗，25％～30％的患儿会出现冠状动脉病变；而早期应用静脉大剂量丙种球蛋白(IVIG)～将冠状动脉瘤的发生率降低到3％～5％左右。由于川崎病的早期最主要的症状是高者热程超过5天，易与颈淋巴结炎、猩红热、荨麻疹、败血症等其他发热性疾病混淆而产生误诊，据相关文献报道，川崎病的早期误诊率可高达26.7％，使误诊患儿不能在川崎病早期及时使用IVIG进行联合治疗而导致后期的冠状动脉损伤。血小板作为血液中第二丰富的细胞类型，血小板是由骨髓造血组织中的巨核细胞产生。多功能造血干细胞在造血组织中经过定向分化形成原始的巨核细胞，又进一步成为成熟的巨核细胞。成熟的巨核细胞膜表面形成许多凹陷，伸入胞质之中，相邻的凹陷细胞膜在凹陷深部相互融合，使巨核细胞部分胞质与母体分开。最后这些被细胞膜包围的与巨核细胞胞质分离开的成分脱离巨核细胞，经过骨髓造血组织中的血窦进入血液循环成为血小板。存在于外周血液循环中的血小板,在机体中起着止血和伤口愈合作用。近年来研究发现，血小板已成为全身和局部反应的中心分子，在细胞交流和免疫反应中扮演了重要作用，并且由于血小板没有细胞核，在研究其RNA时不会存在rRNA的背景干扰。血小板在免疫反应中也起到了信号交流和转移传播的作用，由于川崎病是一种全身性的免疫性疾病，所以研究血小板RNA对川崎病的早期诊断有着理论基础和实际意义，而目前关于这方面的研究报道非常少见。
技术实现思路
本专利技术的主要目的就是针对以上现状，提供一种用于诊断川崎病的生物标记物，以克服现有技术中的不足。本专利技术的第二目的还在于提供一种诊断川崎病的试剂盒与其用途。为实现前述专利技术目的，本专利技术采用的技术方案包括：本专利技术实施例提供了miRNAsmiR-223-3p、miR-182-5p、miR-183-5p、miR-378a-3p、miR-30c-5p、miR-148a-3p、miR-27a-3p、miR-145、miR-140-3p、miR-125a-5p与miR-30e-3p的组合作为诊断川崎病的生物标记物的用途。在一些较为具体的实施方案中，所述的miRNAsmiR-223-3p、miR-182-5p、miR-183-5p、miR-378a-3p、miR-30c-5p、miR-148a-3p、miR-27a-3p、miR-145、miR-140-3p、miR-125a-5p及miR-30e-3p来源于血小板。本专利技术实施例还提供了一种用于诊断川崎病的生物标记物，其包含miRNAsmiR-223-3p、miR-182-5p、miR-183-5p、miR-378a-3p、miR-30c-5p、miR-148a-3p、miR-27a-3p、miR-145、miR-140-3p、miR-125a-5p及miR-30e-3p。在一些较为具体的实施方案中，所述的miRNAsmiR-223-3p、miR-182-5p、miR-183-5p、miR-378a-3p、miR-30c-5p、miR-148a-3p、miR-27a-3p、miR-145、miR-140-3p、miR-125a-5p及miR-30e-3p来源于血小板。本专利技术实施例还提供了一种用于诊断川崎病的试剂盒，其包含对患者血小板中miRNAsmiR-223-3p、miR-182-5p、miR-183-5p、miR-378a-3p、miR-30c-5p、miR-148a-3p、miR-27a-3p、miR-145、miR-140-3p、miR-125a-5p及miR-30e-3p的表达量进行定量检测的试剂。在一些较为具体的实施方案中，所述试剂盒包含用于对miRNAsmiR-223-3p、miR-182-5p、miR-183-5p、miR-378a-3p、miR-30c-5p、miR-148a-3p、miR-27a-3p、miR-145、miR-140-3p、miR-125a-5p及miR-30e-3p进行PCR检测的引物组。进一步的，所述引物组中对应于miRNAsmiR-223-3p、miR-182-5p、miR-183-5p、miR-378a-3p、miR-30c-5p、miR-148a-3p、miR-27a-3p、miR-145、miR-140-3p、miR-125a-5p及miR-30e-3p的引物的序列分别如SEQIDNO：1～SEQIDNO：11所示。本专利技术实施例还提供了生物标记组在制备用于检测受试者中存在川崎病的体外方法中的试剂中的用途，所述的方法包括：测定来源于受试者的血小板的生物标记组中各生物标记的表达水平以获得测定值，所述的生物标记组选自miRNAsmiR-223-3p、miR-182-5p、miR-183-5p、miR-378a-3p、miR-30c-5p、miR-148a-3p、miR-27a-3p、miR-145、miR-140-3p、miR-125a-5p与miR-30e-3p的组合；将所述的测定值与参考值比较，若测定值高于参考值，则确定受试者患有川崎病。优选的，所述的方法包括：提取受试者的血小板中的生物标记组；提供与所述生物标记组中各生物标记一一对应的引物，其中各引物的序列分别如SEQIDNO：1～SEQIDNO：11所示；以及，通过PCR检测方法测得所述测定值。与现有技术相比，本专利技术的优点包括：1)本专利技术提供的用于诊断川崎病的生物标记物选取11种miRNA来自于第二代高深度测序的结果并结合临床信息综合分析评分所得，联合分析11种生物标志物准确度远远大于单一生物标准物的检测，降低假阳性的发生。2)本专利技术提供的用于诊断川崎病的试剂盒中含有针对这11种miRNAs进行TaqMan荧光定量PCR检测所用引物，使用者只需取1mL全血分离获得血小板中的RNA，使用该试剂盒并配套相应的PCR试剂盒即可获得11种miRNAs的含量，并通过CT值计算得到川崎病的患病风险。3)本专利技术具有取材便利、成本低廉、灵敏度高、稳定性好、本文档来自技高网...

【技术保护点】
miRNAs miR‑223‑3p、miR‑182‑5p、miR‑183‑5p、miR‑378a‑3p、miR‑30c‑5p、miR‑148a‑3p、miR‑27a‑3p、miR‑145、miR‑140‑3p、miR‑125a‑5p与miR‑30e‑3p的组合作为诊断川崎病的生物标记物的用途。

【技术特征摘要】
1.miRNAsmiR-223-3p、miR-182-5p、miR-183-5p、miR-378a-3p、miR-30c-5p、miR-148a-3p、miR-27a-3p、miR-145、miR-140-3p、miR-125a-5p与miR-30e-3p的组合作为诊断川崎病的生物标记物的用途。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述的miRNAsmiR-223-3p、miR-182-5p、miR-183-5p、miR-378a-3p、miR-30c-5p、miR-148a-3p、miR-27a-3p、miR-145、miR-140-3p、miR-125a-5p及miR-30e-3p来源于血小板。3.用于诊断川崎病的生物标记物，其特征在于包含miRNAsmiR-223-3p、miR-182-5p、miR-183-5p、miR-378a-3p、miR-30c-5p、miR-148a-3p、miR-27a-3p、miR-145、miR-140-3p、miR-125a-5p及miR-30e-3p。4.根据权利要求3所述的用于诊断川崎病的生物标记物，其特征在于：所述的miRNAsmiR-223-3p、miR-182-5p、miR-183-5p、miR-378a-3p、miR-30c-5p、miR-148a-3p、miR-27a-3p、miR-145、miR-140-3p、miR-125a-5p及miR-30e-3p来源于血小板。5.一种用于诊断川崎病的试剂盒，其特征在于包含对患者血小板中miRNAsmiR-223-3p、miR-182-5p、miR-183-5p、miR-378a-3p、miR-30c-5p、miR-148a-3p、miR-27a-3p、miR-145、miR-140-3p、miR-125a-5p及miR-30e-3p的表达量进行定量检测的试剂。6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于包含用于对miRNAsmiR-223...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏冬凯，丁国徽，吴洁，浦宇，
申请(专利权)人：苏州贝斯派生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32