一种抑制膀胱癌转移的新靶标及其应用制造技术

本发明专利技术属于生物技术领域，涉及一种抑制膀胱癌转移的新靶标及其应用。本发明专利技术以膀胱癌T24T，UMUC3细胞为模型，抑制miR‑3648表达可在体内外降低膀胱癌细胞的转移特性。可见，miR‑3648表达抑制剂可以抑制膀胱癌转移。利用实时荧光定量PCR技术、生物信息学分析TCGA数据库等方法检测到大部分临床高级别浸润性膀胱癌组织中miR‑3648表达均呈显著上调趋势。可见，通过检测miR‑3648的表达与高级别浸润性膀胱癌密切相关。本发明专利技术有望为抑制膀胱癌转移提供新的靶标及相应措施。

【技术实现步骤摘要】
一种抑制膀胱癌转移的新靶标及其应用
本专利技术属于生物
，涉及一种抑制膀胱癌转移的新靶标及其应用。
技术介绍
膀胱癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤。近年来，据统计显示膀胱癌发病率呈逐渐上升趋势。膀胱癌中70-80%被诊断患有非肌肉浸润性肿瘤，患有非肌肉浸润性膀胱癌病人的5年存活率接近90%，因缺乏较为完善的分子靶标及相应措施而较难治愈，使得在该群体中复发率高达50-70%。除此之外，复发的膀胱癌的15%会发展成肌肉浸润性疾病，肌肉浸润性膀胱癌病人5年存活率只接近60%，且近80%淋巴结转移病人在诊断后死于第一个5年期。因此，研发新型药物及新防治措施是防治膀胱癌转移工作中迫在眉睫的任务，而新分子靶标鉴定则是其中的基础环节，该领域基础研究的突破有望为膀胱癌转移防治提供新的理论依据，提高人民群众的生活质量，是膀胱癌研究中的重要领域。MicroRNA（miRNA）是一类长度约18-25nt的小分子非编码RNA，通过其“种子区”（2–8个核苷酸）与靶mRNA的3'UTR互补配对，调控该基因转录后的mRNA的稳定性及蛋白翻译。miRNA与靶mRNA互补的程度决定了miRNA发挥功能的作用模式。当miRNA与靶mRNA的3'UTR不完全互补配对时，该基因的翻译过程受到抑制;完全互补配对时，靶mRNA在核酸内切酶作用下降解。miRNA仅占人类基因组的1–3%，但是它们却调控将近33%的人类基因组，几乎参与了与肿瘤相关的所有过程，包括增殖、分化、凋亡、转移、血管生成、免疫应答等。目前，已鉴定出近3000种miRNA，并且已有miRNA与转移相关报道。其中miR-200家族成员是参与EMT的典型调节因子，miR-200家族成员(miR-200a–c,miR-141和miR-429)表达的缺失与ZEB1及ZEB2表达增加有关，促进EMT的进程，从而促进肿瘤转移。然而他们中的绝大部分在膀胱癌转移中的作用及其分子机制仍不清楚。因此新miRNA分子靶标的鉴定及机制阐明，有助于全面了解miRNA的生物学功能，同时也有助于促进新高效防治膀胱癌转移药物的研发及公共卫生防治的新举措的实施。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供miR-3648作为抑制膀胱癌转移的新靶标及其应用。本专利技术所采取的技术方案如下：miR-3648表达抑制剂在制备抑制膀胱癌转移的药物中的应用。所述miR-3648表达抑制剂为miR-3648inhibitorsponge表达质粒。一种预防或/和治疗膀胱癌的组合物，组合物包含：（1）miR-3648表达抑制剂；（2）药剂学上能够接受的载体。包含在本专利技术的药剂学组合物的药剂学上许可的载体为在制剂时通常利用的载体，该载体包含乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、淀粉、阿拉伯橡胶、磷酸钙、藻酸盐、凝胶、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙酸吡咯烷酮、纤维素、水、糖浆、甲基纤维素、羟基苯甲酸甲酯、丙基羟基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸镁及矿物油等，但并非局限与此。本专利技术的药剂学组合物除了上述成分以外还可以包含润滑剂、湿润剂、甜味剂、香味剂、乳化剂、防腐剂等。药剂学上许可的适合的载体和制剂详细记载于雷明登氏药学全书。所述miR-3648(GeneID:100500862)表达抑制剂为miR-3648inhibitorsponge表达质粒。一种检测miR-3648表达的试剂，所述miR-3648表达的试剂包含基于荧光定量PCR定量检测方法的试剂,荧光定量PCR定量检测方法的试剂包含一对特异性引物，引物序列为5’-AGCCGCGGGGATCGCCGAG-3’与通用引物(Qiagen公司提供)。本专利技术的有益效果如下：本专利技术以膀胱癌T24T，UMUC3细胞为模型，抑制miR-3648可在体内外抑制膀胱癌细胞迁移和浸润。可见，可以通过抑制miR-3648进而降低膀胱癌细胞的转移能力，最终起到预防或/和治疗膀胱癌转移的作用。利用实时荧光定量PCR技术，生物信息学分析TCGA数据库等方法检测临床大部分高级别浸润性膀胱癌组织中miR-3648表达均呈显著上调趋势。可见，通过检测miR-3648的表达，可以辅助诊断或/和预后检测膀胱癌。附图说明图1为生物信息学分析TCGA数据库中miR-3648在膀胱癌的表达。图2A、2B为miR-3648在人膀胱癌组织样本和人膀胱癌细胞中表达显著上调的qPCR图，Normal是正常组织，Tumor是肿瘤组织。图3A、3B为实时荧光定量PCR检测T24T-miR-3648-inhibitor，UMUC3-miR-3648-inhibitor及其空载稳定转染细胞中miR-3648表达的柱状图，p<0.001。图3C、3D为抑制miR-3648表达而抑制膀胱癌细胞T24T、UMUC3浸润能力及定量分析结果。通过transwell实验证实抑制miR-3648表达后膀胱癌细胞浸润能力显著降低，p<0.05。图4A、4B为miR-3648促进膀胱癌细胞T24T、UMUC3浸润及定量分析结果。通过transwell实验证实miR-3648后膀胱癌细胞图5为抑制miR-3648表达而抑制膀胱癌细胞T24T体内肺转移。将T24T-miR-3648-inhibitor及其对照细胞经尾静脉注入小鼠体内，待3个月后将小鼠处死，取小鼠肺组织，采用Bouin’s液染色24h后拍照(图A)，对其转移点计数（图B），最后通过苏木精-伊红染色法（HE）进一步证实肺组织的病理组织学变化(图A)，p<0.01。图6为抑制miR-3648表达而抑制膀胱癌细胞UMUC3体内肺转移图，p<0.01。具体实施方式下面结合附图以及本专利技术的具体实施方式，可以更好地说明本专利技术。实验实施例1生物信息学分析TCGA数据库中miR-3648在膀胱癌病人中表达上调。1）生物信息学下载并分析TCGA数据库中的RNA-seqV2和miRNA-seq的level3数据。2）集合样本的barcode信息，选取PrimarysolidTumor（sampeID以-01结尾）和SolidTissueNormal（samplesID以11结尾）的样本作分析，共19对，38个样本。用R包edgeR分析癌症（tumor）和癌旁（normal）配对的样本中miRNA差异表达量，该包采取的是对数表达比率的加权截断均值（trimmedmeanofMvalues，TMM）归一化方法。为降低假阳性（falsediscoverrate,fdr）,p-value用Benjamini–Hochberg(BH)方法校正。差异显著性的筛选阈值为log2fold-change(logFC)不小于3，fdr<0.01，其中miR-3648在膀胱癌中显著上调。于是进一步分析miR-3648在每一对癌症和癌旁样本中的变化，结果如图1所示，19例病人中，有18例表达量显著升高，其余1例表达量降低。实验实施例2临床膀胱癌样本和人膀胱癌细胞中miR-3648的表达1)组织样本收集2014年3月至2016年12月期间在温州医科大学第一附属医院泌尿外科行膀胱癌手术的33例患者的组织标本。收集患者姓名、性别、年龄、病理号码、病理等资料。入选患者大部分为男性且均经膀胱全切本文档来自技高网...

【技术保护点】
miR‑3648表达抑制剂在制备抑制膀胱癌转移的药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.miR-3648表达抑制剂在制备抑制膀胱癌转移的药物中的应用。2.根据权利要求1所述的miR-3648表达抑制剂在制备抑制膀胱癌转移的药物中的应用，其特征在于：所述miR-3648表达抑制剂为miR-3648inhibitorsponge表达质粒。3.一种预防或/和治疗膀胱癌的组合物，其特征在于，组合物包含：（1）miR-3648表达抑制剂；（2）药剂学上能够接受的载体。4.根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄海山，金红蕾，孙文瑞，古佳艳，王帅，邓文海，
申请(专利权)人：温州医科大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33