马齿苋提取物及其应用制造技术

本发明专利技术涉及植物中草药的应用，具体涉及马齿苋提取物及其应用。该马齿苋提取物的制备方法为：马齿苋全草粉碎、过筛，采用超声萃取法提取马齿苋全草中的总黄酮。所述马齿苋提取物能够抑制病原菌、杀菌、诱导病原菌凋亡。

Purslane extract and its application

The invention relates to the application of plant Chinese herbal medicine, in particular to the purslane extract and its application. The preparation method of the purslane extract is to crush and sift the whole grass of purslane, and to extract the total flavonoids from the whole of Purslane by ultrasonic extraction. The purslane extract can inhibit the pathogenic bacteria, sterilize and induce the apoptosis of the pathogenic bacteria.

【技术实现步骤摘要】
马齿苋提取物及其应用
本专利技术涉及植物中草药的应用，具体涉及马齿苋提取物及其应用。
技术介绍
近年来，由于抗生素等化学抗菌药的广泛应用，耐药性细菌快速增长，使有效治疗感染性疾病成为严重困扰人类及动物健康的难题，为此，如何消除细菌耐药性的研究成为大家关注的热点。细菌耐药性的消除，以往国内外主要采取各种化学，物理处理方法，但处理过程中使用的化学药物毒副作用大，不适合用于人类或动物机体。马齿苋(PortulacaoleraceaL.)为马齿苋科植物，清热解毒，利水去湿，散血消肿，除尘杀菌，消炎止痛，止血凉血。虽然现有研究已报道马齿苋提取物能够抑制大肠杆菌和金黄色葡萄球菌等。然而，一方面，提取物的制备方法不同导致活性组分的组成不同，因此不同提取方法制备的提取物的抑菌效果显著差异；另一方面，菌株的生理特性不同，马齿苋提取物对不同菌株的抑菌效果有显著差异。因此，马齿苋的抗菌机制尚未有明确的定论，这必将影响马齿苋的进一步开发和应用。程序性细胞死亡是真核生物中非常重要的一种机制，它可引起细胞自杀。凋亡是程序性细胞死亡的一种基。凋亡是细胞自身自主程序性死亡过程，当药物引起细菌凋亡时，不会对宿主细胞释放炎症因子等有害成分。因此，生产新型的能激活细菌凋亡的天然抗菌药物和饲料添加剂，将为细菌性疾病的控制另辟途径，这将有助于解决越来越重要的抗生素带来的人类及动物健康问题。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供马齿苋提取物，并且研究该提取物在抗菌药物和饲料添加剂中的应用。根据本专利技术的具体实施方式，马齿苋提取物的制备方法包括步骤：马齿苋全草阴干，粉碎成粗粉，过60目分析筛，采用超声萃取法提取马齿苋全草中的总黄酮，在超生功率500W，乙醇浓度85％，料液比g:mL为1:30，超声温度50℃，pH8.5的条件下，超声30min，提取2次，5000rpm，离心10min，取上清液，浓缩，冷冻干燥，得马齿苋提取物。本专利技术考察了马齿苋提取物对金黄色葡萄球菌，藤黄微球菌，大肠杆菌，克雷伯氏肺炎菌，沙门氏菌，阴沟肠杆菌的抑菌效果。结果发现，马齿苋提取物对金黄色葡萄球菌具有更显著的抑菌作用。然而不同的工艺参数会导致不同的抑菌效果，我们对马齿苋提取物的提取条件进行了优化，结果表明乙醇浓度，料液比，超声功率，超声温度，pH值，超声时间和提取次数均会影响马齿苋抑制金黄色葡萄球菌的效果。在本专利技术的马齿苋提取物提取条件下，马齿苋提取物对金黄色葡萄球菌具有最好的抑菌效果。乙醇浓度为85％时，马齿苋提取物对金黄色葡萄球菌的抑制率可达到56.04±3.31％。料液比为g:mL1:30时，马齿苋提取物对金黄色葡萄球菌的抑制率可达到56.28±1.91％。超声功率为500w时，马齿苋提取物对金黄色葡萄球菌的抑制率可达到64.01±0.98％。超声温度50℃时，马齿苋提取物对金黄色葡萄球菌的抑制率可达到65.29±1.28％。pH8.5时，马齿苋提取物对金黄色葡萄球菌的抑制率可达到72.31±1.76％。超声时间为30min时，马齿苋提取物对金黄色葡萄球菌的抑制率可达到79.78±2.01％。提取次数为2次时，马齿苋提取物对金黄色葡萄球菌的抑制率可达到100％。本专利技术还提供了上述马齿苋提取物抑制病原菌和诱导病原菌凋亡的应用。在本专利技术确定的马齿苋提取物的提取条件下，所获得的马齿苋提取物对细菌的抑菌效果最好，金黄色葡萄球菌(ATCC25923)，藤黄微球菌(ATCC10240)，大肠杆菌(ATCC25922)，克雷伯氏肺炎菌(ATCC10031)，沙门氏菌(ATCC14028)，阴沟肠杆菌(ATCC13047)的最小抑菌浓度分别为10.0±0.12，15.0±0.08,15.0±0.06,20.0±0.02,25.0±0.01和25.0±0.06mg/mL。马齿苋提取物通过增加金黄色葡萄球菌(ATCC25923)胞活性氧的水平和DNA损伤程度来诱导金黄色葡萄球菌死亡。本专利技术的优点和有益效果为：(1)本专利技术通过MTT法分析了马齿苋提取物对6种病原菌(金黄色葡萄球菌(ATCC25923)，藤黄微球菌(ATCC10240)，大肠杆菌(ATCC25922)，克雷伯氏肺炎菌(ATCC10031)，沙门氏菌(ATCC14028)，阴沟肠杆菌(ATCC13047))抑制率的影响，马齿苋提取物具有显著的抑制病原菌的作用。本专利技术探讨了马齿苋抑制金黄色葡萄球菌的机制，结果表明马齿苋对革兰氏阳性细菌抑制效果好于革兰氏阴性细菌。这主要取决于革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌细胞壁结构的差异，革兰氏阴性细菌拥有外部膜和一个独特的细胞周质间隙。缺乏外部脂多糖膜的革兰氏阳性细菌可以增加马齿苋提取物的渗透率，增加革兰氏阳性菌对马齿苋提取物的敏感性。通过马齿苋提取物抑制金黄色葡萄球菌机制的研究发现马齿苋提取物能够通过增加金黄色葡萄球菌胞活性氧的水平和DNA损伤程度来诱导金黄色葡萄球菌死亡。(2)本专利技术通过马齿苋提取物对金黄色葡萄球菌(ATCC25923)，藤黄微球菌(ATCC10240)，大肠杆菌(ATCC25922)，克雷伯氏肺炎菌(ATCC10031)，沙门氏菌(ATCC14028)，阴沟肠杆菌(ATCC13047)杀菌作用分析说明：马齿苋提取物对金黄色葡萄球菌(ATCC25923)，藤黄微球菌(ATCC10240)，大肠杆菌(ATCC25922)，克雷伯氏肺炎菌(ATCC10031)具有杀菌作用。(3)本专利技术通过2,7-dichlorodihydrofluoresceindiacetate(H2DCFDA)染色法，证明了马齿苋提取物对金黄色葡萄球菌(ATCC25923)具有凋亡的作用。(4)本专利技术通过TUNEL/DAPI和Hoechst33342/PI双染色法，证明了马齿苋提取物对金黄色葡萄球菌(ATCC25923)具有凋亡的作用。(5)本专利技术通过Annexin-V/PI双染色法，证明了马齿苋提取物对金黄色葡萄球菌(ATCC25923)具有凋亡的作用。(6)本专利技术通过CaspACEFITC-VAD-FMKInSituMarker，证明了马齿苋提取物对金黄色葡萄球菌(ATCC25923)具有凋亡的作用。(7)本专利技术通过MitochondrialMembranePotentialandAnnexinVApoptosisKit和Rhodamine123染色法，证明了马齿苋提取物对金黄色葡萄球菌(ATCC25923)具有凋亡的作用。杀菌作用和抑菌作用是杀菌剂对病原菌毒力表现的两种不同的作用方式。杀菌作用是杀菌剂使病菌失去生长繁殖能力，真正杀死病菌的作用方式。抑菌作用是杀菌剂使用后，病菌在受抑制的一定时间内，会失去致病力，当药剂被洗除或分解后，病菌又能恢复生长繁殖。一般认为细菌不存在凋亡，本专利技术证明了马齿苋提取物对金黄色葡萄球菌(ATCC25923)具有凋亡的作用。此凋亡系统能够在不良条件下被活化，如营养缺乏或存在抗生素等。金黄色葡萄球菌凋亡系统的发现，表现细菌的死亡可能具有类似其他细胞的凋亡方式。细菌凋亡机制的阐明，以这些细菌专属的凋亡调节因子作为抗菌靶点，研发出具有较小毒副作用甚至完全无毒副作用的抗菌药物，将极大的促进临床细菌感染的治疗。另外，凋亡是细胞自身自主程序性死亡过程，当药物引起细菌凋亡时，不会对宿本文档来自技高网...

【技术保护点】
马齿苋提取物，其特征在于，所述马齿苋提取物的制备方法包括步骤：马齿苋全草粉碎、过筛，采用超声萃取法提取马齿苋全草中的总黄酮，在超生功率600W，乙醇浓度70％，料液比g:mL为1:30，超声温度40℃的条件下，超声20min，5000rpm离心10min，取上清液，浓缩干燥得马齿苋提取物。

【技术特征摘要】
1.马齿苋提取物，其特征在于，所述马齿苋提取物的制备方法包括步骤：马齿苋全草粉碎、过筛，采用超声萃取法提取马齿苋全草中的总黄酮，在超生功率600W，乙醇浓度70％，料液比g:mL为1:30，超声温度40℃的条件下，超声20min，5000rpm离心10min，取上清液，浓缩干燥得马齿苋提取物。2.权利要求1所述的马齿苋提取物的抑制病原菌的应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨培龙，李秀梅，刘婧，闻治国，石冬冬，牛灿芳，
申请(专利权)人：中国农业科学院饲料研究所，
类型：发明
国别省市：北京,11