一种新的鉴定向日葵对菌核病抗性水平的方法技术

本发明专利技术提供了一种新的鉴定向日葵对菌核病抗性水平的方法，包括以下步骤：步骤一：核盘菌菌株活化，步骤二：接种基质的准备，步骤三：将步骤一得到核盘菌菌株接种于步骤二得到的接种基质上，步骤四：鉴定向日葵对菌核病抗性水平，所述接种为茎杆接种法，在步骤二中准备向日葵茎杆作为步骤三中核盘菌接种的基质。本发明专利技术提供的鉴定向日葵核菌病抗性的方法克服了现有技术中的缺陷，鉴定更加准确，同时适用于农家品系和杂交品系的鉴定。

A new method for identifying the resistance level of sunflower to Sclerotinia Sclerotinia

The present invention provides a method for resistance to sclerotiniose level a new identification of sunflower, comprises the following steps: activation of Sclerotinia sclerotiorum strain step two: inoculation of matrix preparation, step three: step one by inoculation matrix of Sclerotinia sclerotiorum strains inoculated in step two get on step four. Identification of Sunflower Sclerotinia sclerotiorum resistance level, the inoculation for stem inoculation, in a second step to stem the step 3 as matrix of Sunflower Sclerotinia inoculation. The invention provides a method for identifying the resistance of sunflower kernels, overcomes the defects in the existing technology, is more accurate in identification, and is suitable for the identification of farm strains and hybrid strains.

【技术实现步骤摘要】
一种新的鉴定向日葵对菌核病抗性水平的方法
本专利技术建立一种在向日葵茎秆上接种核盘菌，鉴定向日葵品种抗(耐)菌核病的方法，用于筛选不同向日葵品种对菌核病的抗性(耐)水平。
技术介绍
向日葵是世界上的四大油料作物之一，在我国的种植面积达100万hm2左右，总产量为192.8万吨，仅次于油菜和大豆。然而，近年来由于轮作倒茬困难，使得向日葵病害发生面积不断扩大，发生危害程度也不断增加。向日葵菌核病是由核盘菌(Sclerotiniasclerotiorum(Lib.)deBary)引起的一种真菌病害，该病菌是一种寄主范围十分广泛的植物病原真菌，能够侵染向日葵、油菜、大豆、花生、菜豆、胡萝卜、拟南芥等400多种植物。目前，向日葵菌核病已成为制约我国向日葵产业发展的主要病害之一。向日葵菌核病又称白腐病、烂盘病。这种病害在向日葵主产区里每年发病率在50％左右，严重时可达80％以上，对向日葵的产量和品质影响很大。主要表现为立枯型和烂盘型。立枯型：自幼苗开始到花盘形成前都能发生。幼苗期发病主要在茎基部，绕茎形成水浸状病斑，潮湿时长出白色絮状菌丝，干燥后病部收缩变细，茎内形成黑色菌核，植株呈立枯状枯死。成株期发病也以茎基部为主，呈现出淡褐色的湿润状病斑，逐渐扩大到整个植株的茎部，后期病斑干枯呈灰白色，边缘呈褐色，表皮破裂，由于茎内输导组织遭受破坏，影响养分的运输，叶片开始由下向上逐渐变黄、枯萎而脱落，最后造成整个植株枯死。烂盘型：这种病症在谢花期以后最重，当花盘受害时，在其背面出现水浸状病斑，花托呈褐色且软化。遇多雨天气，病斑迅速扩大，可穿透花盘，由背面转向正面，长出一种白色菌丝，造成花盘腐烂，使籽粒不能成熟，严重时可造成籽仁腐烂或籽粒自行脱落筛选耐/抗菌核病的育种材料是控制菌核病发生的重要的农业措施，室内鉴定不同向日葵品种对菌核病抗性水平是向日葵育种的前提。目前，室内鉴定向日葵品种对菌核病抗性水平的主要方法为离体叶片接种法，方法相对单一。而田间向日葵菌核病多为根腐型、茎腐型和盘腐型，因此需要建立一种新的向日葵抗(耐)菌核病的方法。申请号201110397710.9的中国专利公开了一种鉴定向日葵品种对菌核病抗性水平的鉴定方法，包括如下步骤：将活化好的核盘菌菌株接种在Minum培养基上(简称M培养基)，黑暗培养.然后用接菌针挑取单个菌丝琼脂块，准确接种在向日葵叶片主叶脉的两侧，置于20-25℃自然光下保湿培养，用十字交叉法量取病斑直径大小以鉴定向日葵的抗性水平，所述的M培养基含有NaOH、DL-苹果酸、NH4NO3、MgSO4、琼脂粉。本专利技术的方法利用M-培养基培养核盘菌接种向日葵叶片，能够区分不同向日葵品种的抗性，为向日葵新品种的选育和抗病育种奠定基础。现有技术中的缺陷为：菌核病一般在田间有三种症状类型，即茎基腐，茎腐和盘腐。而在叶片上形成叶腐型症状很少见。因此，传统的叶片接种法与田间向日葵核菌病致病后的表征存在差异，不能真是的反应致病水平，利用叶片接种进行鉴定得到的结果与实际结果会存在差异，不能鉴定得到最优质的具有的菌核病抗性向日葵。此外，叶片接种法将菌株接种在叶片上极易形成腐烂，不利于病斑的测量，造成鉴定结果不准确。
技术实现思路
为了克服现有技术中的缺陷，本专利技术提供了一种新的鉴定向日葵对菌核病抗性水平的方法，包括以下步骤：步骤一：核盘菌菌株活化，步骤二：接种基质的准备，步骤三：将步骤一得到核盘菌菌株接种于步骤二得到的接种基质上，步骤四：鉴定向日葵对菌核病抗性水平，所述接种为茎杆接种法，在步骤二中准备向日葵茎杆作为步骤三中核盘菌接种的基质。接种基质选用向日葵茎秆具有以下技术效果：1)菌核病一般在田间有三种症状类型，即茎基腐，茎腐和盘腐，而在叶片上形成叶腐型症状很少见。接种茎杆得出的结果更接近田间向日葵的致病症状，使鉴定结果更加准确。2)茎秆与叶片的细胞组成存在很大差异，作为核菌病的接种基质，其提供的水分、营养成分以及作为基质的物理结构存在差异，因此接种后，菌株的培养情况也不同。因此，使用茎秆作为接种基质与接种叶片相比，能够使在实验室的培养更加接近田间的培养环境，使得到的病斑更加接近田间情况，是鉴定的结果更加准确。3)茎秆接种病原菌后，病菌形成的病斑会纵向扩展形成梭形病斑，易于测量病斑大小，而接种在叶片上极易形成腐烂，不利于病斑的测量。因此，茎杆接种不仅接近于田间发病症状，而且还易于观察和测量，鉴定的结果更准确。优选的是，步骤二中截取6片真叶的向日葵茎杆用于接种核盘菌菌株。6片真叶的向日葵茎杆更适于核菌病菌株的接种和培养，培养后的病斑更易于观察和测量。上述任一项中优选的是，截取向日葵茎秆，冲洗干净，用湿润的棉花包裹向日葵茎杆两端，置于灭菌的培养皿中备用。上述任一项中优选的是，所述截取向日葵茎秆为向日葵幼苗长到6片真叶时，自茎基部向上截取6cm的向日葵茎杆。这一区域的向日葵茎杆更适于核菌病菌株的接种和培养，培养后的病斑更易于观察和测量。上述任一项中优选的是，步骤一菌株活化包括以下步骤：将保存的核盘菌菌株在PDA培养基进行活化，然后打取新鲜菌饼接种到MM培养基上，待用。上述任一项中优选的是，所述PDA培养基包括马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂粉13g，蒸馏水定容至1000mL。上述任一项中优选的是，保存的核盘菌菌株在PDA培养基进行活化的时间为2天。上述任一项中优选的是，从PDA上打取的新鲜菌饼在MM培养基上的培养时间为5天。上述任一项中优选的是，所述MM培养基包括NaOH1g，DL-malicacid3g，NH4NO32g，MgSO4·7H2O0.1g，Bacto-agar39g，蒸馏水定容至1000mL，pH调节至4.7-4.8，121℃高压灭菌25min后无菌操作台上倒置平板备用。其中，DL-malicacid为DL-苹果酸，Bacto-agar为细菌琼脂粉。本专利技术所使用的生物及化学试剂除特殊说明均为现有的可购买的商业产品。上述任一项中优选的是，步骤三接种包括以下步骤：将MM培养基上长好的核盘菌菌落边缘用打孔器打取菌饼，接种到备好的向日葵茎杆上，空白的MM培养基做对照，进行培养。上述任一项中优选的是，所述菌柄直径为4mm。上述任一项中优选的是，培养条件为置于22℃自然光下培养。上述任一项中优选的是，培养时间为84h。上述任一项中优选的是，所述MM培养基按照以下方法配置：NaOH1g，DL-malicacid3g，NH4NO32g，MgSO4·7H2O0.1g，Bacto-agar39g，蒸馏水定容至1000mL，pH调节至4.7-4.8，121℃高压灭菌25min后无菌操作台上倒置平板备用。其中，DL-malicacid为DL-苹果酸，Bacto-agar为细菌琼脂粉。本专利技术所使用的生物及化学试剂除特殊说明均为现有的可购买的商业产品。上述任一项中优选的是，步骤四中通过测量茎杆上的病斑大小鉴定向日葵对菌核病抗性水平。本专利技术的一优选实施例中提供一种新的鉴定向日葵对菌核病抗性水平的方法，即茎杆接种法，该方法包括以下步骤：步骤一：菌株活化，将保存的核盘菌菌株在PDA培养基进行活化，2d后打取新鲜菌饼接种到MM培养基上，培养5d后，待用。步骤二：向日葵茎杆准备，向日葵幼苗长到6片真叶时，自茎基部向上截取6cm的向日葵茎本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种新的鉴定向日葵对菌核病抗性水平的方法，包括以下步骤：步骤一：核盘菌菌株活化，步骤二：接种基质的准备，步骤三：将步骤一得到核盘菌菌株接种于步骤二得到的接种基质上，步骤四：鉴定向日葵对菌核病抗性水平，其特征在于，所述接种为茎杆接种法，在步骤二中准备向日葵茎杆作为步骤三中核盘菌接种的基质。

【技术特征摘要】
1.一种新的鉴定向日葵对菌核病抗性水平的方法，包括以下步骤：步骤一：核盘菌菌株活化，步骤二：接种基质的准备，步骤三：将步骤一得到核盘菌菌株接种于步骤二得到的接种基质上，步骤四：鉴定向日葵对菌核病抗性水平，其特征在于，所述接种为茎杆接种法，在步骤二中准备向日葵茎杆作为步骤三中核盘菌接种的基质。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤二中截取6片真叶的向日葵茎杆用于接种核盘菌菌株。3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，截取向日葵茎秆，冲洗干净，用湿润的棉花包裹向日葵茎杆两端，置于灭菌的培养皿中备用。4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述截取向日葵茎秆为向日葵幼苗长到6片真叶时，自茎基部向上截取6cm的向日葵茎杆。5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤一菌株活化包括以下步骤：将保存的核盘菌菌株在PDA培养基进行活化，然后打取新鲜菌饼接种到MM培养基上，待用。...

【专利技术属性】
技术研发人员：张键，赵君，周洪友，贾瑞芳，李敏，杨剑锋，侯亚光，
申请(专利权)人：内蒙古农业大学，
类型：发明
国别省市：内蒙古,15