一种从莲蓬壳中同时提取多糖和原花青素的方法技术

本发明专利技术公开一种从莲蓬壳中同时提取多糖和原花青素的方法，其包括以下步骤：莲蓬壳粉碎过筛，进行亚临界萃取，得到莲蓬壳亲脂性成分和残渣；残渣采用不同浓度的乙醇溶液梯度递减式提取，合并多次提取液；提取液减压浓缩得到粗提浓缩液，粗提浓缩液醇沉，得上清液和沉淀物，沉淀物干燥后即为莲蓬壳多糖；上清液减压浓缩至无乙醇味，获得的浓缩液通过色谱柱A进行柱色谱分离，所得洗脱液减压浓缩、醇沉得到莲蓬壳多糖；然后将色谱柱A与色谱柱B串联，采用乙醇进行串联洗脱，至洗脱液为无色，停止收集，洗脱液减压浓缩、干燥后得到莲蓬壳原花青素。本发明专利技术工艺流程简单，绿色无毒，提取率、纯度较高，实现了同步分离的效果，适合工业化生产。

A method for simultaneously extracting polysaccharide and proanthocyanidins from lotus in the shell

The invention discloses a method for the simultaneous extraction of polysaccharide and proanthocyanidins from Lotus shell, which comprises the following steps: Lotus shell crushing and sieving, for subcritical extraction, get the lotus shell lipophilic and residue residue; using ethanol solution of different concentration gradient descending with multiple extraction, extract; extract obtained vacuum concentration the crude extract, crude extract of concentrated liquid alcohol, the supernatant and sediment, sediment and dry after the lotus shell polysaccharide; supernatant was concentrated under reduced pressure to no alcohol taste, concentrated liquid obtained by column chromatography of A column separation, the eluent is decompressed and concentrated, alcohol from Lotus chitosan; then tandem column A and column B, in tandem with ethanol elution, elution was to stop collecting the eluent, colorless, concentrated and dried to obtain the lotus shell procyanidins Su. The invention has the advantages of simple process, non - toxic green, high extraction rate and high purity, which can achieve the effect of synchronous separation and is suitable for industrial production.

【技术实现步骤摘要】
一种从莲蓬壳中同时提取多糖和原花青素的方法
本专利技术属于植物有效活性成分提取
，尤其是涉及一种从莲蓬壳中同时提取多糖和原花青素的方法。
技术介绍
莲(荷)(Nelumbonucifera)，科属：睡莲科、莲属，多年生水生植物、草本植物，在我国具有2000多年的种植历史。目前，我国拥有的荷花品种多达800个以上，主要分布于福建、浙江、湖北、湖南、江苏、安徽以及江西等地[李珊珊,等.植物学报,2014,49(6):738-750；WuYB,etal.AfricanJournalofPharmacyandPharmacology,2011,5(22):2454-2461.]。莲除具观赏价值外，还可食用、饮用、药用和包装用。莲全身各处均可使用，荷叶可用于治疗心烦暑热、便血崩漏等；莲子心可用于治疗失眠多梦、血热吐血等；莲子具有养心安神、涩精益肾等作用；莲藕为日常食用水生蔬菜。莲富含生物碱、黄酮、糖苷类、三萜类、多糖、多酚、挥发油等多种活性成分，具有抗氧化、消炎、抗菌、抗心律失常、降血糖、止泻、免疫调控等生理活性[SheikhSA.JMedPlantsRes,2014,2(2):42-46；ZhengLJ,etal.JournalofMedicinalPlantsResearch,2012,6(10):1902-1911；HuangB,etal.FoodChemistry,2010,120(3):873-878；WuYB,etal.Internationaljournalofmolecularsciences,2012,13(6):7163-7173.]。目前关于莲产品的开发与研制多停留在莲叶、莲子与莲心等植物器官制品上，而对于废弃下脚料莲蓬壳的研究较少。莲蓬壳，为睡莲科植物莲的干燥花托，也叫莲房。是在莲子的加工过程中产生的农业废弃物，目前只是用于动物饲料，甚至是作为废弃物被随意丢置于路边或沟旁，腐烂霉变，或直接掩埋和焚烧；即使利用，方式也比较初级，技术含量低，这不仅造成环境污染，还是对莲资源的极大浪费。国内外目前对莲子皮、莲蓬壳中化学成分及其药用作用的相关研究只有“零星”报道，一直未得到重视。迄今为止，莲蓬壳已知的成分仅仅限于生物碱(alkaloids)、黄酮类(flavonoids)物质[HuW,etal.Horticulture,Environment,andBiotechnology,2015,56(5):712-720；LeeSetal.JournaloftheKoreanSocietyforAppliedBiologicalChemistry,2015,58(1):53-60.]。
技术实现思路
本专利技术的目的提供一种从莲蓬壳中同时提取多糖和原花青素的方法，其利用绿色脱脂、溶剂浓度递减式提取以及串联柱色谱方法同时从莲蓬壳中提取多糖和原花青素两种活性成分，工艺流程简单，易于操作，绿色无毒、高效，投资少，成本低，适合大规模生产。为实现上述专利技术目的，本专利技术采用如下技术方案：一种从莲蓬壳中同时提取制备多糖和原花青素的方法，其包括以下步骤：S1、将莲蓬壳阴干、粉碎、过筛，加入有机溶剂丁烷后进行亚临界萃取，得到莲蓬壳亲脂性成分和残渣；亚临界丁烷萃取条件为：莲蓬壳与有机溶剂丁烷的料液比为1:3～7kg/L，萃取温度为40～90℃，超声波功率为500～800W，萃取压力为0.2～1.0MPa，萃取时间为30～100min；S2、将上述残渣采用不同浓度的乙醇溶液梯度递减式提取，合并多次提取液；S3、将步骤S2中得到的提取液减压浓缩至原体积的1/2～1/20得到粗提浓缩液，粗提浓缩液中加入乙醇溶液醇沉，使溶液最终浓度为70～85vt％，4～10℃静置冷藏10～12h；离心过滤后，得上清液和沉淀物，所得沉淀物干燥后即为莲蓬壳多糖；S4、将步骤S3中得到的上清液减压浓缩至无乙醇味，获得的浓缩液加入到色谱柱A中进行柱色谱分离，先用水洗脱，所得洗脱液采用步骤S3中的操作得到莲蓬壳多糖；S5、将步骤S4中的色谱柱A再用浓度为5～30％的乙醇水溶液洗脱后与色谱柱B串联，采用浓度为40～80％乙醇进行串联洗脱，至洗脱液为无色，停止收集，洗脱液减压浓缩、干燥后得到莲蓬壳原花青素。进一步地，上述的步骤S2中不同浓度的乙醇溶液梯度递减式提取，乙醇溶液依次为90％乙醇、70％乙醇、50％乙醇、30％乙醇、10％乙醇。进一步地，上述的步骤S4中的色谱柱A使用的填料为大孔树脂，其型号为XDA-6、DM130、NKA-9、AB-8、S-8、ADS-7、D101、HPD-100、HPD-300、HPD-450中的一种或两种以上组合。进一步地，上述的步骤S5中的色谱柱B所用色谱填料为大孔树脂、聚酰胺树脂、MIC、葡聚糖凝胶和反相ODS中的一种或两种以上组合。进一步地，上述的步骤S4对层析柱A中的大孔树脂进行洗脱的水为蒸馏水、纯净水或去离子水。进一步地，上述的步骤S3、S5中的干燥采用喷雾干燥、真空干燥、常压干燥和/或冷冻干燥。本专利技术从莲蓬壳中同时提取制备多糖和原花青素的方法，其莲蓬壳多糖得率为5～20％，莲蓬壳原花青素得率为3～10％。本专利技术从莲蓬壳中同时提取制备多糖和原花青素的方法，其制得的莲蓬壳多糖在制备免疫调节药物中的应用。由于采用如上所述的技术方案，本专利技术具有如下优越性：本专利技术从莲蓬壳中同时提取制备多糖和原花青素的方法，其运用亚临界流体萃取脱脂技术具有节能、环保和效率高的优点，采用溶剂不同浓度递减式提取，利用乙醇和水的不同配比，协同作用，对原材料进行充分提取，节约溶剂用量，减低成本；通过色谱柱A与色谱柱B串联达到了对原花青素分离效果；能够同时制备莲蓬壳多糖和原花青素，制备过程没有毒性有机溶剂的使用，绿色制备，适合工业化生产，有效减少农林废弃物环境污染且能实现废弃物高值化利用。附图说明图1是本专利技术的工艺流程图；图2是MTT法检测莲蓬壳多糖对细胞存活率的影响；图3是Griess试剂和ELISA试剂盒测定细胞NO和PGE2、TNF-α的含量；图4是莲蓬壳多糖刺激RAW264.7细胞对iNOS、TNF-α和COX-2mRNA转录水平的影响。具体实施方式参照以下实施例可以对本专利技术作进一步详细说明；但是，以下实施例仅仅是例证，本专利技术并不局限于这些实施例。如图1所示，一种从莲蓬壳中同时提取制备多糖和原花青素的方法，其包括以下具体步骤：S1、将莲蓬壳阴干、粉碎、过40～60目筛，加入有机溶剂丁烷后进行亚临界萃取，得到莲蓬壳亲脂性成分和残渣；亚临界丁烷萃取条件为：莲蓬壳与有机溶剂丁烷的料液比为1:3～7kg/L，萃取温度为40～90℃，超声波功率为500～800W，萃取压力为0.2～1.0MPa，萃取时间为30～100min，萃取次数为2～5次；S2、将上述残渣采用不同浓度的乙醇溶液梯度递减式提取，乙醇初始浓度为90％，经减压浓缩后，回收的乙醇再加水配制成浓度为70％的乙醇进行二次提取，依次类推，使乙醇浓度依次为50％、30％、10％进行五级提取，合并多次提取液；S3、将步骤S2中得到的提取液减压浓缩至原体积的1/2～1/20得到粗提浓缩液，粗提浓缩液中加入乙醇溶液醇沉，使溶液最终浓度为70～85vt％，4～10℃静置冷藏10～12h；离心过滤后，得本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从莲蓬壳中同时提取制备多糖和原花青素的方法，其特征是：其包括以下步骤：S1、将莲蓬壳阴干、粉碎、过筛，加入有机溶剂丁烷后进行亚临界萃取，得到莲蓬壳亲脂性成分和残渣；亚临界丁烷萃取条件为：莲蓬壳与有机溶剂丁烷的料液比为1:3～7kg/L，萃取温度为40～90℃，超声波功率为500～800W，萃取压力为0.2～1.0MPa，萃取时间为30～100min；S2、将上述残渣采用不同浓度的乙醇溶液梯度递减式提取，合并多次提取液；S3、将步骤S2中得到的提取液减压浓缩至原体积的1/2～1/20得到粗提浓缩液，粗提浓缩液中加入乙醇溶液醇沉，使溶液最终浓度为70～85vt％，4～10℃静置冷藏10～12h；离心过滤后，得上清液和沉淀物，所得沉淀物干燥后即为莲蓬壳多糖；S4、将步骤S3中得到的上清液减压浓缩至无乙醇味，获得的浓缩液加入到色谱柱A中进行柱色谱分离，先用水洗脱，所得洗脱液采用步骤S3中的操作得到莲蓬壳多糖；S5、将步骤S4中的色谱柱A再用浓度为5～30％的乙醇水溶液洗脱后与色谱柱B串联，采用浓度为40～80％乙醇进行串联洗脱，至洗脱液为无色，停止收集，洗脱液减压浓缩、干燥后得到莲蓬壳原花青素。...

【技术特征摘要】
1.一种从莲蓬壳中同时提取制备多糖和原花青素的方法，其特征是：其包括以下步骤：S1、将莲蓬壳阴干、粉碎、过筛，加入有机溶剂丁烷后进行亚临界萃取，得到莲蓬壳亲脂性成分和残渣；亚临界丁烷萃取条件为：莲蓬壳与有机溶剂丁烷的料液比为1:3～7kg/L，萃取温度为40～90℃，超声波功率为500～800W，萃取压力为0.2～1.0MPa，萃取时间为30～100min；S2、将上述残渣采用不同浓度的乙醇溶液梯度递减式提取，合并多次提取液；S3、将步骤S2中得到的提取液减压浓缩至原体积的1/2～1/20得到粗提浓缩液，粗提浓缩液中加入乙醇溶液醇沉，使溶液最终浓度为70～85vt％，4～10℃静置冷藏10～12h；离心过滤后，得上清液和沉淀物，所得沉淀物干燥后即为莲蓬壳多糖；S4、将步骤S3中得到的上清液减压浓缩至无乙醇味，获得的浓缩液加入到色谱柱A中进行柱色谱分离，先用水洗脱，所得洗脱液采用步骤S3中的操作得到莲蓬壳多糖；S5、将步骤S4中的色谱柱A再用浓度为5～30％的乙醇水溶液洗脱后与色谱柱B串联，采用浓度为40～80％乙醇进行串联洗脱，至洗脱液为无色，停止收集，洗脱液减压浓缩、干燥后得到莲蓬壳原花青素。2.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴磊，胡居吾，熊伟，付建平，韩晓丹，
申请(专利权)人：江西省科学院应用化学研究所，
类型：发明
国别省市：江西,36