一种白簕叶片中总多酚分离纯化工艺制造技术

本发明专利技术涉及一种白簕叶片中总多酚分离纯化工艺，属于含有来自植物的药物制剂技术领域。将白簕叶片总多酚粗提液作为上样液，将其上样在装有纯化大孔树脂的层析柱上，控制上样液的浓度为0.5‑10mg/mL，pH为2‑6，流速1‑3mL/min；待上样完毕，以洗脱液进行解吸，解吸以体积浓度为10‑90%的乙醇水溶液作为脱附液，脱附液pH2‑7，速度为1‑3mL/min，解吸所得解吸液浓缩真空冷冻干燥即得多酚样品。将发明专利技术应用于白簕茎干、叶片以及类似植物中多酚的分离纯化，具有纯化效率高、多酚活性高等优点。

A total polyphenols in the leaves of Acanthopanax trifoliatus purification process

The invention relates to a total polyphenols in the leaves of acanthopanaxtrifoliatus purification process, belonging to the technical field of plant derived from pharmaceutical preparations. The total polyphenol trifoliatus leaf crude extracts as the sample solution, the sample in a purification column of macroporous resin, the concentration control of sample solution was 0.5 10mg/mL, pH 2 6, a flow rate of 1 3mL/min; to sample after desorption with eluent, the desorption the volume concentration of 10 aqueous ethanol 90% as desorption solution, desorption liquid pH2 7, speed is 1 3mL/min, the desorption solution liquid condensation vacuum freeze drying to obtain the polyphenols. The invention is applied to trifoliatus stem, leaves and similar plant polyphenol separation in purification, purification of higher PPO activity has the advantages of high efficiency.

【技术实现步骤摘要】
一种白簕叶片中总多酚分离纯化工艺
本专利技术涉及一种白簕叶片中总多酚分离纯化工艺，属于含有来自植物的药物制剂

技术介绍
咖啡酰奎宁酸类，是一种广泛存在于植物中，具有抗氧化、抗炎、抗菌等药理活性，由一分子的奎宁酸和多个咖啡酸通过缩合反应形成的化合物。Zhang等对24种五加属植物进行了黄酮及咖啡酸奎宁等酚类物质进行了含量测定，证实了不同产地的白簕叶中均含有丰富的咖啡酰奎宁酸多酚类物质。Kiem等首次报道了从白簕茎皮中分离得到的苯丙素糖苷类成分，分别为1-β-D-吡喃葡萄糖基-2,6-二甲氧基-4-丙炔基—烯醇(1)和1-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖基]-2,6-二甲氧基-4-丙烯基苯酚(2)；张元对白簕不同部位多酚含量及活性研究发现，白簕叶中多酚含量高且含量最好。综上研究结果表明，在白簕植株的各个部位中均有酚类物质存在，其中黄酮和酚酸类含量相当可观，可作为进一步开发利用基础。通过前期研究表明：五加属植物白簕叶中咖啡酰奎宁酸类多酚类化学成分群含量丰富，通过HPLC-UV法对白簕叶中多酚类成分进行定性定量分析，发现其含量达到2％。而且研究发现，近些年对于白簕多酚类化合物的研究仅限于白簕总多酚的提取工艺研究；对不同品种的白簕总多酚含量研究；以及对白簕不同部位的多酚含量及抗氧化活性比较，且其他研究并未公布于众，这也为本课题的研究提供机会。我国作为白簕主要生产国之一，深度利用这一资源研究开发白簕叶中总多酚纯化工艺对后期开发相应医药及保健品奠定科学基础，具有良好的应用前景。在对于传统药用植物中多酚类化合物的分离和纯化，据相关文献记述，主要方法有金属离子沉淀法、柱层析法、色谱法及生物膜技术等。其中利于大孔树脂对天然植物中活性化学成分的分离和纯化分析取得了极大的进展，也有工厂中放大生产的应用。在Wu等通过利用不同类型大孔吸附树脂对枸杞中类黄酮化合物进行吸附与解吸附的研究中可以得出，D101型树脂能够将溶质中黄酮类化合物的含量从0.58％提高到10.77％。Kim等也利用大孔吸附树脂对褐藻多酚进行吸附与解吸附纯化。这些实验虽然验证了大孔树脂在分离和纯化中的作用，然而含量均在15％以下，无法真正应用到实际操作中。基于此，做出本申请。
技术实现思路
本申请以五加属药食同源植物白簕作为材料，同时利用超声提取-石油醚去脂溶性成分法获得白簕叶总多酚粗提取物，然后选出适合的填充材料，从而获得白簕叶总多酚的工业化、高纯的总多酚分离纯化工艺。为实现上述目的，本申请采取的技术方案如下：一种白簕叶片中总多酚分离纯化工艺，将白簕叶片总多酚粗提液作为上样液，将其上样在装有纯化大孔树脂的层析柱上，控制上样液的浓度为0.5-10mg/mL，pH为2-6，流速1-3mL/min；待上样完毕，以洗脱液进行解吸，解吸以体积浓度为10-90％的乙醇水溶液作为脱附液，脱附液pH2-7，速度为1-3mL/min，解吸所得解吸液浓缩真空冷冻干燥即得多酚样品。进一步的，作为优选：所述的白簕叶片总多酚粗取液的制备方法为：将白簕粉碎后加入萃取剂，以超声处理后，过滤得清液，浓缩，蒸馏水溶解后，加入石油醚，震荡混合，静置分层，将富集有多酚的水相蒸发浓缩、冷冻干燥获得粗提物，粗提物溶解配置形成不同浓度的粗提液。更优选的，所述的萃取剂为体积浓度为95％的乙醇，添加量为白簕体积的3倍；所述的过滤除去清液后的滤渣反复提取3-4次所得的回收清液与过滤所得清液合并浓缩；所述的蒸馏水温度为40-60℃，用于溶解，溶解过程中，为加快溶解效率，可配合超声进行促进；所述的石油醚的添加量为溶解液的3倍；所述的水相经过3-4次的萃取后，合并水相进行蒸发浓缩。所述的纯化大孔树脂为HPD100、AB-8、D101、HPD400、HPD600中的任一种，并优选为HPD100。大孔树脂要实现良好的纯化效果，不仅要考虑其吸附能力，还要考虑其解吸能力。大孔树脂HPD100对五加属植物白簕叶中总多酚有较强的吸附效果，其吸附率达到64％，其他4种树脂的吸附率从高到低依次是AB-8、D101、HPD400、HPD600。由此可见，不同类型的树脂对于白簕叶总多酚的吸附性能各不相同。可能原因是，对于5种不同类型树脂，其内部结构、构成分子的对称性、以及多酚的溶解度等，这些情况的存在对于树脂吸附多酚能力均有不同程度的关系。而多酚由于在其分子中由酚羟基的存在，使得其分子对称性并不是很高，因而在与极性较弱或者非极性的树脂进行吸附时效果更好。而在解吸过程中，上述五种大孔树脂对于白簕叶总多酚的解吸率都普遍较高，其中以D101树脂的解吸附效果最好，其解吸率达78.2％。而HPD100仅次之，HPD400、HPD600、AB-8再次之。整体来讲，D101型树脂对白簕叶总多酚的解吸效果最好，但吸附率却并不是最高的；而HPD100型树脂吸附率最大，解吸率也仅次于D101，达到77.9％，能够将大部分多酚洗脱下来，因此最优选使用HPD100型大孔吸附树脂作为对白簕叶中总多酚的纯化大孔树脂材料。所述的大孔树脂在纯化吸附前需进行预处理，将大孔树脂以无水乙醇进行浸泡，待充分溶胀，置入层析柱中，控制使树脂层无气泡产生，取无水乙醇上柱洗脱，在洗脱液加等体积蒸馏水后洗脱液不变混后停止；再用蒸馏水洗脱树脂至其中乙醇含量小于10％；待蒸馏水流尽后，加入3倍量的5％NaOH浸泡一段时间后，用蒸馏水洗脱树脂至洗脱液呈中性，再加入3倍量5％HCl溶液浸泡相同时间，用蒸馏水洗至中性，即可得处理好的大孔树脂，将树脂加蒸馏水浸泡于烧杯中备用。所述的上样液的浓度为1-3mg/mL，pH为2-4，流速1-2mL/min。更优选的，所述的上样液的浓度为1.0mg/mL，pH为3，流速2mL/min。所述的脱附液乙醇水溶液的体积浓度为10-50％，脱附液pH4-6，速度为1-2mL/min。更优选的，所述的脱附液乙醇水溶液的体积浓度为50％，脱附液pH6，速度为2mL/min。将所得多酚样品溶解，采用DPPH法、ABTS+法对纯化前后总多酚进行抗氧化活性测定，并以VC、VE作为对照，比较其抗氧化活性，为大孔树脂纯化白簕叶总多酚作为保健品使用提供实验基础。并通过高效液相色谱法进行纯度测定，获得大孔树脂对白簕叶中各多酚组分纯化的具体情况。结果表明：纯化后总多酚纯度较纯化前高，由纯化前的28.76％提升到90.17％，纯化效率为3.14倍；通过DPPH、ABTS+自由基清除实验得出纯化后多酚抗氧化活性较纯化前强，因此HPD100型树脂对白簕叶多酚的纯化并没有对其结构和性质造成影响。HPD100型大孔树脂是五种树脂中效果最好的白簕叶总多酚纯化材料。在所研究条件中，最终所得优化工艺为：取1.7cm*50cm的玻璃层析柱，加入4.0gHPD100树脂，以浓度为1.0mg/mL，pH为3.0左右的白簕叶总多酚粗提液作为上样液，同时控制其流速为2.0mL/min，上样量控制为30mL；然后以体积分数50％的乙醇水溶液洗脱，调节pH值为6.0，并控制洗脱流速为2.0mL/min，洗脱量为40mL。按照此工艺参数控制进行扩大实验，也证实白簕叶总多酚的纯化效率并不随大孔树脂数量改变而有所影响，即为HPD100型大孔树脂对白簕叶总多酚纯化的工业生产提供参考本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种白簕叶片中总多酚分离纯化工艺，其特征在于：将白簕叶片总多酚粗提液作为上样液，将其上样在装有纯化大孔树脂的层析柱上，控制上样液的浓度为0.5‑10mg/mL，pH为2‑6，流速1‑3mL/min；待上样完毕，以洗脱液进行解吸，解吸以体积浓度为10‑90%的乙醇水溶液作为脱附液，脱附液pH2‑7，速度为1‑3mL/min，解吸所得解吸液浓缩真空冷冻干燥即得多酚样品。

【技术特征摘要】
1.一种白簕叶片中总多酚分离纯化工艺，其特征在于：将白簕叶片总多酚粗提液作为上样液，将其上样在装有纯化大孔树脂的层析柱上，控制上样液的浓度为0.5-10mg/mL，pH为2-6，流速1-3mL/min；待上样完毕，以洗脱液进行解吸，解吸以体积浓度为10-90%的乙醇水溶液作为脱附液，脱附液pH2-7，速度为1-3mL/min，解吸所得解吸液浓缩真空冷冻干燥即得多酚样品。2.如权利要求1所述的一种白簕叶片中总多酚分离纯化工艺，其特征在于，所述的白簕叶片总多酚粗取液的制备方法为：将白簕粉碎后加入萃取剂，以超声处理后，过滤得清液，浓缩，蒸馏水溶解后，加入石油醚，震荡混合，静置分层，将富集有多酚的水相蒸发浓缩、冷冻干燥获得粗提物，粗提物溶解配置形成不同浓度的粗提液。3.如权利要求2所述的一种白簕叶片中总多酚分离纯化工艺，其特征在于：所述的萃取剂为体积浓度为95%的乙醇，添加量为白簕体积的3倍。4.如权利要求2所述的一种白簕叶片中总多酚分离纯化工艺，其特征在于：所述的蒸馏水温度为40-60℃。5.如权利要求2所述的一种白簕叶片中总多酚分离纯化工艺，其特征在于：所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：张晓丹，杨东风，梁宗锁，李小龙，冯彩霞，张岩，
申请(专利权)人：浙江理工大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33