药物组合物及其用途制造技术

本发明专利技术提供一种药物组合物及其用途，属于生物医药技术领域。本发明专利技术提供的药物组合物包括土贝母皂甙和自噬抑制剂氯喹；进一步提供土贝母皂甙在制备治疗肿瘤药物中的用途和药物组合物在制备肿瘤药物中的用途，通过氯喹抑制土贝母皂甙诱导的细胞自噬，从而抵消肿瘤由于细胞自噬引起的对土贝母皂甙治疗的拮抗作用，增强土贝母皂甙的治疗疗效。本发明专利技术拓展了传统中药材土贝母皂甙的应用范围，提高其实用性。

Drug composition and its use

The invention provides a pharmaceutical composition and its use, which belongs to the field of biological and pharmaceutical technology. The invention provides a pharmaceutical composition comprising tubeimoside and chloroquine; further provide tubeimoside in preparation for treating cancer drug use and medicine composition in preparation for the use of antitumor drugs, through inhibition of chloroquine bolbastemmosaponins induced cell autophagy, which offset tumor due to the antagonistic effect of autophagy induced by the tubeimoside treatment, enhance the curative effect of tubeimoside. The invention extends the application range of traditional Chinese medicinal herb saponins and improves its practicality.

【技术实现步骤摘要】
药物组合物及其用途
本专利技术属于生物医药
，具体涉及一种药物组合物及其用途，更具体地涉及土贝母皂甙与自噬抑制剂的药物组合物及其用途。
技术介绍
细胞自噬(autophagy)是真核生物中进化保守的对细胞内物质进行周转的重要生物学过程。该过程中一些损坏的蛋白或细胞器被双层膜结构的自噬小泡包裹后，送入溶酶体(动物)或液泡(酵母和植物)中进行降解，降解产物如小分子的氨基酸、核苷和脂肪酸可以被循环利用。自噬具有多种生理功能包括耐受饥饿，清除细胞内折叠异常的蛋白质或蛋白质聚合物、受损或多余的细胞器，促进发育和分化，延长寿命，清除微生物等等。由于自噬重要的生物学功能，自噬调节的异常能够直接或间接地影响疾病的发生发展，肿瘤是最早被发现与自噬相关的疾病。自噬在促进肿瘤细胞增殖和转移中发挥重要作用。另外，肿瘤细胞对治疗的敏感性也受到自噬的影响，抑制自噬能够增加细胞对药物和放射治疗的敏感性。土贝母是块茎类植物，具有抗病毒、抗肿瘤、提高免疫力和杀精子等多方面药理作用，土贝母皂甙是葫芦科植物土贝母属土贝母的地下部块根中提取分离得到的三萜皂甙，经化学分析鉴定是一种新的五环三萜衍生物，目前它作为治疗乳头瘤病毒的活性成分，同时具有抗炎作用。土贝母皂甙的分子结构为：近几年土贝母皂甙的抗肿瘤作用越来越受到重视。从天然植物中提取出有效、低毒的具有抗肿瘤作用的活性成分是世界抗肿瘤药物研究的热点。研究发现，土贝母皂甙能够诱导肿瘤细胞凋亡，包括前列腺癌、肺癌、肝癌、宫颈癌和肠癌。另外，土贝母皂甙也能够抑制肿瘤细胞侵袭、诱导细胞周期阻滞。但是，土贝母皂甙对细胞自噬的作用未见报道。
技术实现思路
针对现有技术的不足，本专利技术提供一种药物组合物及其用途，该药物组合物中的土贝母皂甙能够诱导肿瘤细胞发生自噬，自噬发挥保护细胞的作用，通过联用自噬抑制剂抑制自噬能够增强肿瘤细胞对土贝母皂甙的敏感性。为解决上述问题，一方面，本专利技术在于提供一种药物组合物，包括土贝母皂甙和自噬抑制剂。进一步地，所述自噬抑制剂包括氯喹等。进一步地，所述药物组合物采用联合给药或序贯使用的方式使用。进一步地，所述药物组合物还包括药学上可接受的载体、赋形剂、稀释剂、辅剂和媒介物中的至少一种。一方面，本专利技术提供一种土贝母皂甙在制备治疗肿瘤药物中的用途。进一步地，所述土贝母皂甙诱导肿瘤细胞发生自噬。进一步地，所述肿瘤细胞包括乳腺癌细胞。进一步地，所述乳腺癌细胞包括MCF-7、MDA-MB-231或T47D细胞。又一方面，本专利技术提供一种药物组合物在制备治疗肿瘤药物中的用途，所述药物组合物包括土贝母皂甙和自噬抑制剂。进一步地，所述肿瘤为乳腺癌。进一步地，所述自噬抑制剂通过抑制土贝母皂甙诱导的细胞自噬，从而抵消肿瘤由于细胞自噬引起的对土贝母皂甙治疗的拮抗作用，增强土贝母皂甙的治疗疗效。与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：本专利技术提供一种药物组合物及其用途，所述药物组合物用于治疗肿瘤，药物组合物中的土贝母皂甙能够诱导乳腺癌细胞发生自噬，自噬发挥保护细胞的作用，降低了药物的疗效；通过土贝母皂甙与自噬抑制剂联用抑制土贝母皂甙诱导的细胞自噬而抵消肿瘤细胞由于细胞自噬而引起的对土贝母皂甙治疗的拮抗作用，从而能够增强肿瘤细胞对土贝母皂甙的敏感性，增强土贝母皂甙的疗效。这些均进一步明确了传统中药材土贝母皂甙的抗肿瘤作用机制，对指导土贝母皂甙和自噬抑制剂联合应用的临床实验具有重要的理论和实际意义。土贝母皂甙具有良好的诱导细胞自噬功能；将土贝母皂甙与自噬抑制剂联用后可增强土贝母皂甙对癌细胞的杀伤作用，增强疗效。本专利技术拓展了传统中药材土贝母皂甙的应用范围，提高其实用性；为肿瘤治疗提供一种疗效好的药物组合物。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1不同浓度的土贝母皂甙(TBMS1)处理MDA-MB-231、MCF-7和T47D细胞后LC3的表达；图2土贝母皂甙作用MDA-MB-231、MCF-7和T47D细胞不同时间后LC3的表达；图3氯喹(CQ)与土贝母皂甙联用处理MDA-MB-231、MCF-7和T47D细胞后LC3的累积情况；图4电子显微镜下土贝母皂甙处理的MDA-MB-231细胞的自噬小体；图5氯喹与土贝母皂甙联用对癌细胞MDA-MB-231存活率的影响。图6氯喹与土贝母皂甙联用对癌细胞MCF-7存活率的影响。图7氯喹与土贝母皂甙联用对癌细胞T47D存活率的影响。图中：β-actin内参基因；Control对照组；cellviability细胞活力；TBMS1土贝母皂甙。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。除非特别说明，本专利技术采用的试剂、设备和方法为本
常规市购的试剂、设备和常规使用的方法。为了方便理解本专利技术的上述技术方案，以下通过具体使用方式上对本专利技术的上述技术方案进行详细说明。人乳腺癌细胞株培养：人乳腺癌细胞株MCF-7、MDA-MB-231和T47D，分别接种于无菌培养瓶中，加入适量的DMEM高糖培养基(含10％的胎牛血清)，于37℃、5％CO2及饱和湿度的培养箱中培养。细胞呈单纯贴壁生长，每3～5天传代一次。实施例1：土贝母皂甙诱导乳腺癌细胞发生自噬1.1土贝母皂甙诱导乳腺癌细胞发生自噬呈浓度依赖性将土贝母皂甙溶于二甲基亚砜(DMSO)中，配制成20mM浓缩液，-20℃保存，使用时分别稀释为0.5μM、1μM、2μM、4μM、8μM。接种：取对数生长期的乳腺癌细胞(MCF-7、MDA-MB-231和T47D)消化并吹打制成细胞悬液，分别按3×105密度接种于六孔板中；加药：隔日细胞贴壁后，分别加入用培基配好的浓度梯度为0、0.5、1、2、4、8μM的土贝母皂甙，置于37℃、5％CO2的培养箱中培养24小时；土贝母皂甙处理24小时后，收集贴壁细胞和悬浮的细胞，RIPA裂解液提取细胞总蛋白：1)去除培基，PBS洗两遍；2)去掉PBS，加入含有蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂的RIPA强裂解液100μL；3)冰上裂解30分钟；4)13000转/分钟离心15分钟，收集蛋白上清，留取4μLBCA法测蛋白浓度，其余加入4X蛋白上样缓冲液，100℃变性10分钟。蛋白免疫印迹法检测：1)制胶：12％分离胶，5％浓缩胶；2)恒压80V跑浓缩胶30分钟，进入分离胶后恒压120V跑分离胶；3)252毫安恒流转膜，0.22μMPVDF膜(聚偏氟乙烯膜)转膜90分钟；4)PBST配5％脱脂牛奶，室温封闭1小时；5)一抗稀释液稀释目标蛋白抗体，4℃孵育相应PVDF膜过夜；6)PBST洗膜10分钟，洗三次；7)以1∶5000比例，用PBST稀释二抗，室温孵育1小时；8)PBST洗膜10分钟，洗3次；9)ECL显影法暗室中显影；10)分析整理结果细胞内存在两种形式的LC3蛋白：LC3-I和LC3-II。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种药物组合物，其特征在于，包括土贝母皂甙和自噬抑制剂。

【技术特征摘要】
1.一种药物组合物，其特征在于，包括土贝母皂甙和自噬抑制剂。2.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述自噬抑制剂为氯喹。3.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物采用联合给药或序贯使用的方式使用。4.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物还包括药学上可接受的载体、赋形剂、稀释剂、辅剂和媒介物中的至少一种。5.一种土贝母皂甙在制备治疗肿瘤药物中的用途，其特征在于，所述土贝母皂甙诱导肿瘤细胞发生自噬。6.根据权利要求5所述的用途，...

【专利技术属性】
技术研发人员：程岩，姜世龙，关怡荻，
申请(专利权)人：中南大学，
类型：发明
国别省市：湖南,43