一种含金黄色葡萄球菌B型肠毒素蛋白的软膏及制备与应用制造技术

本发明专利技术属于日化领域，具体涉及一种含金黄色葡萄球菌B型肠毒素蛋白的软膏及制备与应用。所述的含金黄色葡萄球菌B型肠毒素蛋白的软膏，包含如下组分：摩擦剂、保湿剂、增稠剂、发泡剂、甜味剂、缓冲剂、香料、植酸钠、单氟磷酸钙、SEB蛋白和水。本发明专利技术通过合理配比，使得超抗原金黄色葡萄球菌B型肠毒素蛋白能够稳定有效存在于软膏中，且有效预防和治疗牙周炎。

Preparation and application of a type of Staphylococcus aureus B enterotoxin ointment

The invention belongs to the field of daily chemistry, in particular to the ointment of a Staphylococcus aureus B enterotoxin protein, and the preparation and application of the ointment. The ointment of Staphylococcus aureus type B enterotoxin protein contains the following components: rubbing agent, moisturizing agent, thickening agent, foaming agent, sweetener, buffer, perfume, phytic acid sodium, mono fluorocalcium phosphate, SEB protein and water. The present invention makes the superantigen Staphylococcus aureus B enterotoxin protein stable and effective in the ointment through reasonable proportioning, and effectively prevents and treats periodontitis.

【技术实现步骤摘要】
一种含金黄色葡萄球菌B型肠毒素蛋白的软膏及制备与应用
本专利技术属于日化领域，具体涉及一种含金黄色葡萄球菌B型肠毒素蛋白的软膏及制备与应用。
技术介绍
葡萄球菌属(Staphylococcus)中的金黄色葡萄球菌(S.aureus)致病力最强，常引起食物中毒。金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，直径为0.8～1.0μm，呈葡萄状。无芽抱、无鞭毛。需氧和兼性厌氧菌，生长温度在6.5～46℃之间，最适温度为30～37℃。可在pH4.0～9.8范围内生长，最适生长pH7.4。能在15％NaCl和40％胆汁中生长。在普通肉汤固体培养基上能形成光滑、低凸、闪光、边缘整齐的菌落，菌落色素不稳定，但多数为金黄色。该菌在20～37℃条件下，能产生引起食物中毒的肠毒素。其中，金黄色葡萄球菌肠毒素B是由金黄色葡萄球菌分泌的一种细菌性超抗原，具有多种生物学活性。超抗原活化T细胞的方式与通常抗原不同，它可不经过抗原提呈细胞(APC)的内化、降解过程，直接与MHCⅡ类分子及TCR-β链的V区结合，选择性地大量扩增和激活T细胞，故表达MHCⅡ类分子的细胞都能与之结合，激活的T细胞能对表达MHCⅡ类分子的靶细胞产生细胞毒作用，这种作用被称为超抗原依赖的细胞介导的细胞毒作用(superantigen-dependentcellmediatedcytotoxicity，SDCC)。与此同时还能诱导肿瘤敏感性细胞因子如IFN-γ、TNF-α、IL-2的产生，从而达到间接杀伤肿瘤细胞、抑制肿瘤生长的作用。与普通抗原相比，超抗原SEB不需APC的处理，亦不受MHCⅡ类分子的限制，又由于Vβ基因的多态性，针对某一特定的超抗原，在T细胞库中约有5％～20％细胞可发生反应。基于此，超抗原SEB目前被越来越多地应用于肿瘤治疗方面，成为免疫学研究的一个重要方向。
技术实现思路
为了克服现有技术的不足与缺点，本专利技术的首要目的在于提供一种含金黄色葡萄球菌B型肠毒素蛋白的软膏。本专利技术的另一目的在于提供上述含金黄色葡萄球菌B型肠毒素蛋白的软膏的制备方法。本专利技术的再一目的在于提供上述含金黄色葡萄球菌B型肠毒素蛋白的软膏的应用。本专利技术的目的通过下述技术方案实现：一种含金黄色葡萄球菌B型肠毒素蛋白的软膏，包含如下按质量百分比计的组分：所述的金黄色葡萄球菌B型肠毒素蛋白的软膏，优选包含如下按质量百分比计的组分：所述的摩擦剂优选为云石粉、二氧化硅、碳酸钙、焦磷酸钙、磷酸氢钙和氢氧化铝中的至少一种；所述的保湿剂优选为聚乙二醇、丙二醇、山梨醇和甘油中的至少一种；所述的增稠剂优选为黄原胶、羟丙基瓜尔胶和羧甲基纤维素钠中的至少一种；所述的发泡剂优选为月桂醇硫酸钠和十二烷基硫酸钠中的至少一种；所述的甜味剂优选为糖精钠；所述的缓冲剂优选为磷酸氢二钠和焦磷酸钠中的至少一种；所述的SEB蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示；所述的编码SEB蛋白的基因的核苷酸序列如下所示：GAGAACCTGTACTTCCAGGGCGAAAGCCAGCCGGACCCGAAACCGGATGAACTGCACAAAAGCAGCAAATTCACCGGCCTGATGGAAAACATGAAAGTGCTGTACGACGACAACCACGTCTCCGCCATCAACGTGAAAAGCATCGATCAGTTCCTGTACTTCGACCTGATCTACTCCATCAAAGACACCAAACTGGGTAACTACGACAACGTCCGCGTCGAGTTCAAAAACAAAGACCTGGCGGACAAGTACAAAGACAAATACGTGGACGTTTTCGGCGCGAACTACTACTACCAGTGCTACTTCTCCAAAAAGACCAACGACATCAACTCCCACCAGACCGATAAACGCAAGACCTGCATGTACGGCGGCGTGACCGAACACAACGGCAACCAGCTGGACAAATACCGCAGCATCACCGTGCGCGTGTTCGAGGACGGCAAAAACCTGCTGAGCTTCGATGTGCAGACCAACAAGAAAAAAGTGACCGCGCAGGAACTGGACTACCTGACCCGTCACTACCTGGTGAAAAACAAAAAACTGTACGAGTTCAACAACTCCCCGTACGAAACCGGCTACATCAAGTTCATCGAAAACGAAAACAGCTTCTGGTACGACATGATGCCGGCGCCGGGCGACAAGTTCGACCAGTCCAAGTACCTGATGATGTACAACGACAACAAAATGGTTGACAGCAAAGACGTGAAAATCGAAGTGTACCTGACCACCAAAAAGAAATAATGA所述的SEB蛋白的制备方法，优选包含如下步骤：(1)通过全基因合成，得到如SEQIDNO.1所示的编码重组金黄色葡萄球菌B型肠毒素蛋白的基因；(2)使用引物X5523-1和引物X5523-34对步骤(1)得到的基因进行PCR扩增，得到目的片段并回收纯化；(3)将步骤(2)回收纯化后的目的产物与载体进行连接，得到重组质粒；(4)将步骤(3)制得的重组质粒转入宿主细胞中，得到表达重组金黄色葡萄球菌B型肠毒素蛋白的菌株；(5)将步骤(4)制得的表达重组金黄色葡萄球菌B型肠毒素蛋白的菌株作为表达菌株，基于大肠杆菌表达系统进行诱导表达；离心收集菌体，洗涤悬浮，然后超声破碎，离心，收集上清，纯化，得到SEB蛋白；步骤(2)中所述的引物X5523-1和引物X5523-34的核苷酸序列如下所示：引物X5523-1：GACACGGTACCGAGAACCTGTACTTCCAG；引物X5523-34：GTGTCCTCGAGTCATTATTTCTTTTTGGTGGTCAGG；步骤(3)中所述的载体优选为pET-32a；步骤(4)中所述的宿主细胞优选为大肠杆菌BL21(DE3)；步骤(5)中所述的诱导表达的具体操作优选为：将表达重组金黄色葡萄球菌B型肠毒素蛋白的菌株进行液体扩大培养至OD值达到0.5～0.6时，添加终浓度为0.5mM的IPTG，220rpm、37℃诱导4h；所述的液体扩大培养，包含如下步骤：挑取表达重组金黄色葡萄球菌B型肠毒素蛋白的菌株的单菌落于含有终浓度为50μg/mL氨苄青霉素的LB液体培养基，37℃，220rpm过夜培养，得到种子液；将培养的种子液按1：100体积比接种于含有终浓度为50μg/mL氨苄青霉素的LB液体培养基，37℃，220rpm培养；步骤(5)中所述的洗涤悬浮的试剂优选为破碎Buffer，所述的破碎Buffer为含0.1％w/vTritonX-114的1×PBS缓冲液，pH值为7.4；步骤(5)中所述的超声破碎的条件优选为：冰浴下，超声功率为400～450W，超声时间为5～25min，其中，超声2s，暂停6s为一个循环；步骤(5)中所述的纯化，包含如下步骤：(Ⅰ)第一次镍琼脂糖亲和层析①将Ni-IDA(镍-亚氨基二乙酸，亲和层析介质)装柱，用3倍柱床体积的Bindingbuffer1清洗平衡柱子，流速5mL/min；②将超声破碎、离心、收集得到的上清上柱，流速为2mL/min；③5倍柱床体积的Bindingbuffer1清洗柱子，流速3mL本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种含金黄色葡萄球菌B型肠毒素蛋白的软膏，其特征在于包含如下按质量百分比计的组分：

【技术特征摘要】
1.一种含金黄色葡萄球菌B型肠毒素蛋白的软膏，其特征在于包含如下按质量百分比计的组分：2.根据权利要求1所述的金黄色葡萄球菌B型肠毒素蛋白的软膏，其特征在于包含如下按质量百分比计的组分：3.根据权利要求1或2所述的金黄色葡萄球菌B型肠毒素蛋白的软膏，其特征在于：所述的摩擦剂为云石粉、二氧化硅、碳酸钙、焦磷酸钙、磷酸氢钙和氢氧化铝中的至少一种；所述的保湿剂为聚乙二醇、丙二醇、山梨醇和甘油中的至少一种。4.根据权利要求1或2所述的金黄色葡萄球菌B型肠毒素蛋白的软膏，其特征在于：所述的增稠剂为黄原胶、羟丙基瓜尔胶和羧甲基纤维素钠中的至少一种；所述的发泡剂为月桂醇硫酸钠和十二烷基硫酸钠中的至少一种；所述的缓冲剂为磷酸氢二钠和焦磷酸钠中的至少一种。5.根据权利要求1或2所述的金黄色葡萄球菌B型肠毒素蛋白的软膏，其特征在于：所述的SEB蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。6.根据权利要求5所述的金黄色葡萄球菌B型肠毒素蛋白的软膏，其特征在于：编码所述的SEB蛋白的基因的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。7.根据权利要求5所述的金黄色葡萄球菌B型肠毒素蛋白的软膏，其特征在于：所述的SEB蛋白的制备方法，包含如下步骤：(1)通过全基因合成，得到如SEQIDNO.1所示的编码重组金黄色葡萄球菌B型肠毒素蛋白的基因；(2)使用引物X5523-1和引物X5523-34对步骤(1)得到的基因进行PCR扩增，得到目的片段并回收纯化；(3)将步骤(2)回收纯化后的目的产物与载体进行连接，得到重组质粒；(4)将步骤(3)制得的重组...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾庆明，
申请(专利权)人：曾庆明，
类型：发明
国别省市：广东,44