泛素羧基端酯酶L1自身抗体的应用制造技术

本发明专利技术提供了泛素羧基端酯酶L1的自身抗体在神经精神性狼疮诊断中的应用，包括分析对象的生物样品以检测生物标志物的存在；基于样品中生物标志物的比例诊断神经精神性狼疮。提供了诊断神经精神性狼疮的具体方法和标准。

Application of ubiquitin carboxyl terminal esterase L1 autoantibody

The invention provides the application of ubiquitin carboxyterminal esterase L1 autoantibody in the diagnosis of neuropsychiatric lupus, including analyzing biological samples of objects to detect the existence of biomarkers, and diagnosing neuropsychiatric lupus based on the proportion of biomarkers in the samples. The specific methods and criteria for the diagnosis of neuropsychiatric lupus are provided.

【技术实现步骤摘要】
泛素羧基端酯酶L1自身抗体的应用
本专利技术涉及标志物的鉴定和使用，具体是涉及泛素羧基端酯酶L1自身抗体的应用，更具体的，涉及用于神经精神性狼疮诊断的方法。本专利技术涉及利用Luminex液相芯片分析技术、酶联免疫吸附测定(ELISA)检测NPSLE患者脑脊液、血清中的泛素羧基端酯酶L1(UbiquitinCarboxylHydrolaseL1，UCH-L1)自身抗体。
技术介绍
系统性红斑狼疮(systemiclupuserythematosus，SLE)是一种由自身免疫机制介导的弥漫性结缔组织病，以产生针对细胞成分的多种自身抗体并导致多系统、多器官受累为特征。神经精神性狼疮(NeuropsychiatricSystemicLupusErythematosus，NPSLE)主要包括19种SLE神经精神损害类型，是重型SLE的常见系统受累表现和严重预后不良因素。NPSLE患者可死于各种神经系统损害或精神行为异常，包括颅内血栓或出血、脑炎、癫痫持续状态等引起的脑组织坏死；颅内压严重升高引起的脑疝以及精神损害患者的自伤、自杀行为等等，造成了沉重的社会经济负担。NPSLE患者病情难以缓解、预后极差，与目前该病的临床诊断困难、缺乏特异性的辅助检查方法有关。UCH-L1自身抗体有望填补NPSLE在诊断学标志物方面的空白，提高临床诊断的准确度，并协助评估病情、指导治疗，从而降低该病的致残率与死亡率。
技术实现思路
本申请提供了一种用于诊断和治疗对象中系统性红斑狼疮的专利技术方法，包括分析对象的生物样品以检测一个或更多生物标志物的存在；基于样品中一个或更多生物标志物的比例诊断神经系统疾病；和对对象施用治疗物以改变一个或更多生物标志物的比例。本专利技术诊断方法在诊断神经精神性系统性红斑狼疮中是有用的。我们通过Luminex液相芯片分析技术比较了多种神经元相关蛋白在重型NPSLE患者(sNPSLE)、轻型NPSLE(mNPSLE)患者及对照组脑脊液中的浓度，发现UCH-L1在sNPSLE患者脑脊液中显著升高，并且与NPSLE的临床严重程度及SLE疾病活动指数呈显著正相关。进一步研究发现，UCH-L1的脑脊液自身抗体有望用于NPSLE的临床诊断，其敏感性和特异性分别达到53％和91％，明显优于此前报道的少数标志物(阳性率6-46％，敏感性及特异性均未报道)，对于提高NPSLE的诊断准确性很有帮助。本专利技术的目的之一是提供能够有效诊断NPSLE的标志物——UCH-L1自身抗体。其中，所述的泛素羧基端酯酶L1自身抗体(anti-UCH-L1)为NPSLE患者体内产生的结合UCH-L1蛋白或其降解产物(如蛋白中的部分序列片段、多肽)或衍生物的自身内源性抗体；本专利技术同时提供一种用于区分神经精神性狼疮和非神经精神性狼疮以及其他神经损伤的组合物，包括：从怀疑具有损害的神经细胞的对象分离的生物样品，和泛素羧基端酯酶L1(UCH-L1)蛋白或其降解产物(如蛋白中的部分序列片段、多肽)或衍生物，以上述泛素羧基端酯酶L1(UCH-L1)蛋白或其降解产物(如蛋白中的部分序列片段、多肽)或衍生物为抗原的自身抗体。另外的，本专利技术同时提供一种用于诊断和治疗神经精神性狼疮可能性的试剂盒，该试剂盒包括：用于连接检测从怀疑具有损害的神经细胞的对象分离的生物样品中的生物标志物的抗原成分的基体；作为抗原的泛素羧基端酯酶L1(UCH-L1)蛋白或其降解产物(如蛋白中的部分序列片段、多肽)或衍生物；用于检测UCH-L1自身抗体的其他抗体或检测试剂；和用于将抗体与生物样品或一部分生物样品反应以检测生物样品中标志物的存在或量的操作指南。附图说明图1：脑脊液UCH-L1浓度在sNPSLE组、mNPSLE组、非NPSLE的SLE对照组、其它CTD组和其他神经疾病组(NSD组)中的比较；图2：UCH-L1与SLEDAI(系统性红斑狼疮疾病活动指数)和NPSLE累积类型数的关系；图3：anti-UCH-L1在NPSLE及对照组脑脊液中的比较及反映诊断效率的ROC曲线图具体实施方式为了更清楚地理解本专利技术，现参照下例实施例及附图进一步描述本专利技术。实施例仅用于解释而不以任何方式限制本专利技术。实施例中未注明的具体条件的实验方法为所属领域熟知的常规方法和常规条件，或按照试剂盒及仪器制造商所建议的条件。实施例：泛素羧基端酯酶L1及其自身抗体在神经精神性狼疮诊断及疾病严重程度评估中的应用一、病例及对照样本入选标准脑脊液标本选自36例NPSLE患者、19例除外NPSLE的SLE患者(SLE对照组)、4例其它结缔组织病对照组和10例其它神经系统疾病对照患者(见图3)。血清标本选自与脑脊液标本匹配的21例NPSLE患者和6例SLE对照组。所有NPSLE患者符合1999年美国风湿病学会制定的NPSLE诊断标准，并分为符合2001年NPSLE修订标准(severeNPSLE，简称sNPSLE)组和不符合2001年NPSLE修订标准(mildNPSLE，简称mNPSLE)组。SLE患者符合1997年美国风湿病学会制定的SLE诊断标准。所有对照组患者均出现神经精神表现，并由有经验的风湿免疫科医生除外NPSLE。脑脊液及血清均来源于临床检验的剩余标本。患者的病例资料采集如下：1、临床资料：包括年龄、NPSLE神经精神受累表现和SLE疾病活动性评分。NPSLE神经精神受累表现：根据1999年美国风湿病学会制定的NPSLE标准进行分类。SLE疾病活动度评分(Systemiclupuserythematosusdiseaseactivityindex，SLEDAI)：为经典的SLE疾病活动度评估方法，根据有无癫痫发作、器质性脑病综合征、视力受损、脑神经异常等表现及实验室异常进行评分。2、实验室指标：包括常规化验、免疫学非特异性指标、血清自身抗体、脑脊液压力及化验，记录其原始检测数据，并根据正常范围转换为正常、升高、降低或阳性、阴性。自身抗体的检测方法分别为：间接免疫荧光法(ANA)、ELISA法(抗dsDNA抗体、ACL、β2-GPI、ANuA)、免疫斑点法(抗Ro/SSA抗体、抗La/SSB抗体、抗U1RNP抗体、抗Sm抗体、抗r-RNP抗体)、凝固法(狼疮抗凝血因子试验)。二、实验方案1、UCH-L1的检测使用本实验室的Luminex液相芯片分析系统及MERCKMILLIPORE(Germany)公司的UCH-L1抗体荧光微球溶液，按说明书进行规范操作，每例标准品、对照及待测样品均设置复孔，变异系数(CV)＞20％者重新进行检测。具体步骤为：在96孔滤膜板上每孔加入200ul的assaybuffer，再加入25ul的待测样品原液及25ul微球溶液，混匀后4℃隔夜孵育20小时，弃去孔内液体并反复洗涤后，每孔加入25ul的detectionantibody，常温孵育1小时后，每孔加入25ul显色剂(streptavidin-phycoerythrin)，常温孵育30分钟后，弃去孔内液体并反复洗涤后，每孔加入鞘液100ul。通过Luminex200高通量检测平台读取每孔荧光值。使用Luminex系统的配套xPONENT软件进行数据分析。2、UCH-L1自身抗体的检测ELISA法检测合成UCH-L1蛋白与NPSLE患者血清本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种生物标志物在制备用于诊断和治疗神经精神性狼疮可能性的药物中的用途，其特征在于，包括：分析对象的生物样品以检测生物标志物的存在；基于样品中生物标志物的比例诊断神经精神性狼疮；和对对象施用治疗物以改变所述的生物标志物的比例。

【技术特征摘要】
1.一种生物标志物在制备用于诊断和治疗神经精神性狼疮可能性的药物中的用途，其特征在于，包括：分析对象的生物样品以检测生物标志物的存在；基于样品中生物标志物的比例诊断神经精神性狼疮；和对对象施用治疗物以改变所述的生物标志物的比例。2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述生物标志物是以泛素羧基端酯酶L1(UbiquitinCarboxylHydrolaseL1，UCH-L1)蛋白或其降解产物(如蛋白中的部分序列)或其衍生物为抗原的自身抗体；或该自身抗体的衍生物，和它们的组合的组。3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述治疗物是直接治疗物。4.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述治疗物是间接治疗物。5.一种用于区分神经精神性狼疮和非神经精神性狼疮以及其他神经损伤的组合物，其特征在于，包括：从怀疑具有损害的神经细胞的对象分离的生物样品；泛素羧基端酯酶L...

【专利技术属性】
技术研发人员：栗占国，孙晓麟，李雪，
申请(专利权)人：北京大学人民医院，
类型：发明
国别省市：北京,11