非小细胞肺癌诊断标记物microRNA‑769‑5p及在药物和诊断试剂盒中的应用制造技术

本发明专利技术属于分子生物学技术领域，公开了一组用于非小细胞肺癌发生转移、预后或靶向治疗的分子标记物microRNA‑769‑5p。本发明专利技术进一步公开了所述分子标记物在制备非小细胞肺癌发生转移、预后或靶向治疗诊断试剂或试剂盒中的应用。本发明专利技术还公开了microRNA‑769‑5p在制备具有抑制肿瘤药物中的应用和microRNA‑769‑5p的基因表达情况在制备具有抑制肿瘤预后或靶向治疗药物中的应用。本发明专利技术利用分子生物学技术，能够有效地进行分子水平检测来判断非小细胞肺癌患者发生转移、预后及靶向治疗的标志，进而为个体化治疗这些疾病提供便利。同时对后续临床研究的开展具有重要的指导意义。

Non small cell lung cancer diagnostic marker microRNA 769 5p and its application in pharmaceutical and diagnostic kit in

The invention belongs to the technical field of molecular biology, a group for non small cell lung cancer, metastasis, prognosis and targeted therapy of the molecular marker microRNA 769 5p open. The invention further discloses the application of the molecular marker in the preparation of diagnostic reagent or kit for the metastasis, prognosis, or targeted therapy of non-small cell lung cancer. The invention also discloses the expression of microRNA 769 5p in preparation of drugs can inhibit tumor and the application of microRNA 769 5p gene in preparation can inhibit the application of tumor prognosis or targeted therapy in the. The invention can detect the metastasis, prognosis and target treatment signs of non-small cell lung cancer patients by using molecular biology technology effectively, and further facilitate the individualized treatment of these diseases. At the same time, it has important guiding significance for the development of follow-up clinical research.

【技术实现步骤摘要】
非小细胞肺癌诊断标记物microRNA-769-5p及在药物和诊断试剂盒中的应用
本专利技术属于分子生物学
，具体地说，涉及一组标志基因microRNA-769-5p作为非小细胞肺癌诊断标记物及在药物和诊断试剂盒中的应用。
技术介绍
肺癌一直是最危险的恶性肿瘤之一,其高发病率和高病死率是导致当今国内乃至世界范围内癌症致死的主要原因。据病理类型将肺癌主要分为两大类：一类是小细胞肺癌，约占肺癌比例的15％；另一类是非小细胞肺癌约占85％。虽然针对肺癌的研究方面有一定进展,包括肺癌患者的早期诊断、术前辅助化疗、放疗甚至靶向治疗的应用,但肺癌发病隐匿，肺癌患者就诊时大多数已属于中晚期，错过了最佳治疗时机，加上缺乏敏感、特异、有效的诊断和治疗方法，肺癌患者总的5年生存率仍低至15％，即便就诊时为早期，但因复发率很高，治疗效果也不佳。据统计，每年全球因肺癌致死的患者超过100万,并且以每年120万的新发肺癌病例递增，对人类健康和生命造成严重威胁。在我国的大部分地区，肺癌的发病率和死亡率呈持续上升趋势,男女肺癌发病率和死亡率居各类癌症榜首，若不采取相应的措施加以控制，到2025年我国预计将成为全球第一肺癌大国。因此探索有效地诊断、治疗以及预防肺癌的方法尤为重要。利用分子生物学技术，能够有效地进行分子水平检测来判断恶性肿瘤患者发生转移、预后及靶向治疗的标志。进而为个体化治疗这些疾病提供便利。MicroRNA是长约19-22个核苷酸的小片段单链非编码RNA。它通过有缺陷的碱基配对绑定其靶基因的3’非翻译区的互补序列来控制基因表达，从而使靶基因在转录或者翻译水平表达下调。近来microRNA成为从生长发育到癌症等很多病理生理过程的重要和革命性的保守调节因素。在不同的恶性肿瘤中，同一microRNA的作用可能不同。一个microRNA可以有很多属于不同通路的靶基因，而一个基因可以被几个microRNA调控。科学家发展技术来识别与肿瘤分期和患者预后相关的特异的基因表达标记，以改善预后和治疗。人们使用全面转录研究来识别以基因表达为基础的预后标识，但是，目前为止无一能应用于临床。与经典的mRNA表达谱相比，microRNA肿瘤表达谱似乎能够更准确地确定肿瘤亚型的分类。越来越多的证据支持实体肿瘤有特异的microRNA标记。与此同时，人们发现越来越多的microRNA的靶基因在肺癌发生中起重要作用，例如let-7、miR-34家族和miR-17-92簇。目前，科学家对microRNA的靶基因的识别仍然有限。在分子框架中，成熟microRNA带电后成为microRNA诱导的沉默复合体(miRISC)。该复合体含有Argonaute家族(一类庞大的蛋白质家族)，与通常位于靶基因3’端非翻译区的互补位点反应。目前的模型认为microRNA和其靶基因的反应起源于位于microRNA的5’端的一段被称为“种子序列”的6至8个核苷酸短片段。MicroRNA诱导的沉默复合体能够将靶基因再配置成特别间隔，在其中处理翻译阻滞和mRNA衰变。许多研究证实了microRNA诱导的mRNA失稳。联合计算预测，mRNA表达谱的测量代表了识别功能microRNA-靶关系的有效方法。在非小细胞肺癌中，许多不同的microRNA调节异常，可能有致癌或抑癌作用，并预测预后。识别能够预测肺癌患者预后的microRNA是一项重要发现，这表明microRNA可能在肿瘤进展中起重要作用。现行的临床病理分期在预测患者脑转移上有其局限性。具有相似临床病理特点或者相同分期的肺癌患者的转移发生和预后可能明显不同。分子标记物可以帮助医生鉴别高危患者，以便给予患者个体化治疗，从而改善生存。肿瘤分子标志物(TumorMarker)是反映肿瘤存在的化学类物质。它们或不存在于正常成人组织而仅见于胚胎组织，或在肿瘤组织中的含量大大超过在正常组织里的含量，它们的存在或量变可以提示肿瘤的性质，借以了解肿瘤的组织发生、细胞分化、细胞功能，以帮助肿瘤的诊断、分类、预后判断以及治疗指导。
技术实现思路
为了解决目前非小细胞肺癌患者的早期发现难，早期干预难的技术难题，本专利技术提供了一组标志基因microRNA-769-5p作为非小细胞肺癌诊断标记物及在药物和诊断试剂盒中的应用。为了解决上述技术问题，本专利技术通过下述技术方案得以解决：含有如下所述物质在制备具有抑制肿瘤药物中的应用：a)microRNA-769-5p；b)含有microRNA-769-5p的非编码基因的重组载体；c)含有microRNA-769-5p的非编码基因的重组病毒载体。所述microRNA-769-5p序列为：UGAGACCUCUGGGUUCUGAGCU。作为优选，所述抑制肿瘤为抑制非小细胞肺癌发生转移、扩散。本专利技术还提供了所述物质的基因表达情况在制备具有抑制肿瘤预后或靶向治疗药物中的应用：a)microRNA-769-5p；b)含有microRNA-769-5p的非编码基因的重组载体；c)含有microRNA-769-5p的非编码基因的重组病毒载体。作为优选，所述肿瘤为非小细胞肺癌。本专利技术再一个目的用于非小细胞肺癌发生转移、预后或靶向治疗的分子标记物，所述的分子标记物为microRNA-769-5p。进一步的，所述分子标记物在制备非小细胞肺癌发生转移、预后或靶向治疗诊断试剂或试剂盒中的应用。进一步的，所述预后为检测、疗效评估或转移复发监控。分子标记物为microRNA-769-5p，简称miR-769-5p。与现有技术相比，本专利技术的有益技术效果如下：1)利用分子生物学技术，能够有效地进行分子水平检测来判断非小细胞肺癌患者发生转移、预后及靶向治疗的标志，进而为个体化治疗这些疾病提供便利。2)本专利技术公开了一种与非小细胞肺癌患者相关的基因microRNA-769-5p，并进一步证实上述基因能作为非小细胞肺癌患者发生转移、预后及靶向治疗的分子标记物，不仅精确度大大提高，同时对后续临床研究的开展具有重要的指导意义。附图说明图1为本专利技术microRNA-769-5p在非小细胞组织中的表达水平明显低于癌旁正常肺组织图。图2为本专利技术miR-769-5p表达水平与临床分期呈明显负相关图,miR-769-5p在III+IV期非小细胞肺癌组织中的表达水平低于在I+II期非小细胞肺癌组织中的表达水平。图3为本专利技术miR-769-5p表达水平与淋巴结转移呈明显负相关图,miR-769-5p在淋巴结转移非小细胞肺癌组织中的表达水平低于在无淋巴结转移非小细胞肺癌组织中的表达水平。图4为本专利技术生存分析显示miR-769-5p低表达组患者(n＝70)生存期显著低于高表达组图。图5为本专利技术生存分析显示miR-769-5p低表达组患者(n＝93)生存期显著低于高表达组图。图6为本专利技术miR-769-5p高表达能抑制非小细胞肺癌细胞株细胞增殖图。图7为本专利技术miR-769-5p高表达能抑制非小细胞肺癌细胞株细胞平板克隆形成能力图。图8为本专利技术miR-769-5p高表达能抑制非小细胞肺癌细胞株细胞侵袭转移图。图9为本专利技术miR-769-5p低表达能促进非小细胞肺癌细胞株细胞的增殖能力图。图10为本专利技术miR-769-5p低表达能促进非小细胞肺癌细胞株细胞的平板克隆本文档来自技高网...

【技术保护点】
含有如下所述物质在制备具有抑制肿瘤药物中的应用：a)microRNA‑769‑5p；b)含有microRNA‑769‑5p的非编码基因的重组载体；c)含有microRNA‑769‑5p的非编码基因的重组病毒载体。

【技术特征摘要】
1.含有如下所述物质在制备具有抑制肿瘤药物中的应用：a)microRNA-769-5p；b)含有microRNA-769-5p的非编码基因的重组载体；c)含有microRNA-769-5p的非编码基因的重组病毒载体。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述抑制肿瘤为抑制非小细胞肺癌发生转移、扩散。3.含有如下所述物质的基因表达情况在制备具有抑制肿瘤预后或靶向治疗药物中的应用：a)microRNA-769-5p；b)含有microRNA-769-5...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙国贵，胡万宁，
申请(专利权)人：唐山市人民医院，
类型：发明
国别省市：河北,13