本发明专利技术提供了一种与绝经后骨质疏松相关的miRNA标志物和试剂盒，具体涉及miR‑338簇在作为绝经后骨质疏松标志物中的应用。本发明专利技术发现miR‑338簇如miR‑338‑3p和/或miR‑3065‑5p在绝经后骨质疏松病人中的高表达，可作为绝经后骨质疏松病的标志物，用于制备针对绝经后骨质疏松病辅助诊断试剂盒，可以特异地检测组织中miR‑338簇的表达量，及早且有效地用于临床绝经后骨质疏松病的早期辅助诊断，且无创。另外，miR‑338簇的抑制剂有促进成骨类的功效，有效地治疗或预防绝经后骨质疏松。
【技术实现步骤摘要】
与绝经后骨质疏松相关的miRNA标志物和试剂盒
本专利技术涉及基因工程领域，更具体地，涉及与绝经后骨质疏松相关的miRNA标志物和试剂盒。
技术介绍
microRNA(miRNAs)代表了特定的一种小分子的非编码RNA，它通过转录后调控基因的表达。单独的一个miRNA可以通过抑制一系列相关功能基因的表达，因此可以与转录因子相互作用。至今已有多个研究证明，阻断miRNA可以阻滞骨质疏松的进程。多个独立的动物模型实验也证实，有许多miRNA在骨质疏松中表达出现改变，也参与了骨质疏松的病理过程。自1993年miRNA被首次发现以后，miRNA受到越来越多科研工作者的重视。miRNA在多种疾病的发生发展过程中起到的作用也在近年来进行了广泛而深入的探索。人体内有超过2000个miRNA被报道具有组织或细胞特异性。越来越多的研究证明人的体液如尿液、汗液、唾液等中存在稳定表达的miRNA，尤其是血清或血浆中的miRNA。miRNA可以稳定，可复制，持续地存在于血清或者血浆中，从而使得miRNA作为诊断或者治疗多种疾病成为可能，包括骨质疏松。通过分析外周循环血中miRNA的表达情况诊断骨质疏松是无创，稳定，实时的。通过生物信息学的技术和实验手段可以寻找任意一个miRNA的多个与疾病相关的靶点基因，而寡聚核苷酸化学技术的合成的发展促使我们可以直接的抑制某一特定miRNAs的表达，自由的穿梭于细胞之间，通过碱基互补配对的方式特异地结合于特定的miRNAs,从而阻断该miRNAs的功能。因此与转录因子不同的是，在人体和动物内，特定的miRNAs更易于通过寡聚核苷酸的方式被特异性的靶定。骨质疏松是一种以骨量减少，骨组织微结构发生破坏，骨脆性增加，骨折发生发生率增加的代谢性骨病变。绝经后骨质疏松症是绝经后妇女的高发病症，为多因素性疾病：雌激素的缺乏、遗传因素、营养状况、生活习惯、体格锻炼、月经周期紊乱、绝经早于40岁等均与发病有关，但绝经后雌激素缺乏则是绝经后骨质疏松症发生的重要原因。在绝经后的妇女，第一个5～7年中骨的丢失以每年1％～5％的速度递增。目前，通过双能X线吸收技术对骨密度进行测定是骨质疏松早期发现和诊断的黄金标准，此外还可通过对骨代谢生化指标，如BAP，OC，Tracp5b，PINP，NTX，CTX等进行测定来反映骨代谢情况。骨密度检测可以在正常、较低以及骨质疏松情况下推测骨密度，并预测某些骨折发生的风险。然而骨质疏松发生过程中是非常缓慢的，短时间内变化不明显，需要长时间的观察和连续的检测，并且一旦发现骨质流失，骨密度降低则难以逆转，给临床病人的早期诊断带来极大的困难。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供miR-338簇在作为绝经后骨质疏松标志物中的应用。其中，miRNA簇是指在基因组上距离相近(通常为小于2kb)的两个或多个成簇存在的miRNA。本专利技术中miR-338簇为在基因组上与编码miR-338的基因组上距离相近(小于2kb)的miRNA，miR-338-3p和miR-3065-5p均属于miR-338簇，编码两者的基因的位置关系如图1所示。其中，miR-338簇优选为miR-338-3p和/或miR-3065-5p。绝经后骨质疏松为早期绝经后骨质疏松，即可以检测当T值在-2.5和-1之间时的骨质疏松。例如当小鼠的骨质疏松发生12周后，现有的骨质疏松影像检测才能检测出来，而使用本专利技术的miR-338簇可以检测小鼠早期绝后骨质疏松，例如当骨质疏松发生8周以后，优选当骨质疏松发生1周以后，即使用本专利技术的miRNA簇可以在8周内可明显检测出来，优选1周内即可明显检测出来。本专利技术检测了早期绝经后骨质疏松病人血清中miR-338簇如miR-338-3p和miR-3065-5p的表达含量，结果显示miR-338簇的表达水平显著高于对照健康组样本。同时ROC分析的结果显示miR-338簇有较高的诊断价值。当miR-338簇为miR-338-3p和miR-3065-5p时，在作为绝经后骨质疏松标志物中效果更好。本专利技术还提供了一种含有miR-338簇的生物材料在作为绝经后骨质疏松标志物中的应用。其中，miR-338簇优选为miR-338-3p和/或miR-3065-5p。优选地，生物材料可以为载体、宿主细胞、转基因细胞系、工程菌中的一种或多种。本专利技术还提供了miR-338簇在制备绝经后骨质疏松辅助诊断试剂盒中的应用。其中，所述miR-338簇在绝经后骨质疏松患者的血清中高表达。本专利技术中所指的“高表达”以及“显著”均是指从统计学意义上讲，p值通常小于0.05。其中，miR-338簇优选为miR-338-3p和/或miR-3065-5p。使用本专利技术的诊断试剂盒，只需要测定患者的血清中miR-338族的含量，与以往的诊断方法好处在于，无创且灵敏，若患者在早期患有绝经后骨质疏松，即可被诊断出，优选地是，若患者患有早期绝经后骨质疏松，即当T值在-2.5和-1之间时的骨质疏松，即可被诊断出。本专利技术还提供了一种miR-338簇如miR-338-3p和/或miR-3065-5p的抑制剂在制备治疗或预防绝经后骨质疏松药物中的应用。其中，治疗或预防绝经后骨质疏松的药物为促进成骨分化类药物。本专利技术还提供了一种用于治疗或预防绝经后骨质疏松药物，该药物中含有miR-338簇的抑制剂，优选为miR-338-3p和/或miR-3065-5p的抑制剂。本专利技术首次意外发现miR-338簇优选miR-338-3p和/或miR-3065-5p在绝经后骨质疏松病人中的高表达，可作为绝经后骨质疏松病的标志物，用于制备针对绝经后骨质疏松病辅助诊断试剂盒，可以特异地检测组织的血清中miR-338簇优选miR-338-3p和/或miR-3065-5p的表达量，及早且有效地用于临床绝经后骨质疏松病的早期辅助诊断，且在血清中即可实现上述诊断，不需要额外的创伤口。本专利技术还发现miR-338簇的抑制剂可以有效地阻滞骨质疏松的进程，促进成骨，从而有效地治疗或预防绝经后骨质疏松，可以将其作为治疗或预防绝经后骨质疏松药物，具有较好的临床应用价值和广阔的应用前景。附图说明图1为根据本专利技术一个优选实施方式中编码miR-338-3p和miR-3065-5p的基因的位置关系图；图2A为根据本专利技术实施例1中绝经后骨质疏松病人组和健康组中miR-338-3p的含量曲线图；图2B为根据本专利技术实施例1中绝经后骨质疏松病人组和健康组中miR-3065-5p的含量曲线图；图2C为根据本专利技术实施例1中miR-338-3p和miR-3065-5p的ROC曲线图；图3A为根据本专利技术实施例1中双侧卵巢摘除术后0周，1周，4周，8周，12周，16周和18周的小鼠及其对照(Sham组：未做处理组)股骨的micro-CT图；图3B为根据本专利技术实施例1中双侧卵巢摘除术后0周，1周，4周，8周，12周，16周和18周的小鼠及其对照(Sham组：未做处理组)股骨切片并进行HE染色的染色图；图3C为根据本专利技术实施例1中双侧卵巢摘除术后0周，1周，4周，8周，12周，16周和18周的小鼠及其对照组的股骨骨髓间充质干细胞(BMSCs)，矿化诱导14天后进行茜素红染色的染色图；图4A为根据本专利技术实施例1中miR-338-3p本文档来自技高网...
【技术保护点】
miR‑338簇在作为绝经后骨质疏松标志物中的应用。
【技术特征摘要】
1.miR-338簇在作为绝经后骨质疏松标志物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述绝经后骨质疏松为早期绝经后骨质疏松。3.含有miR-338簇的生物材料在作为绝经后骨质疏松标志物中的应用。4.根据权利要求3所述的应用，所述生物材料为载体、宿主细胞、转基因细胞系、工程菌中的一种或多种。5.miR-338簇在制备绝经后骨质疏松辅助诊断试剂盒中的应用。6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述miR-3...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘欢，林楚娇，陈智，
申请(专利权)人：武汉大学，
类型：发明
国别省市：湖北,42
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