一种辅酶I的树脂填料分离方法技术

本发明专利技术属于涉及辅酶I提取领域，提出一种辅酶I的树脂填料分离方法，将过滤后的含有辅酶I的细胞过滤液经过D945大孔树脂柱交换后水洗和洗脱，收集洗脱液，即得。本发明专利技术仅采用一种树脂填料对辅酶I进行分离纯化，且能在辅酶I最适宜的PH范围内进行分离操作，降低副产品的生成率，大大提高了辅酶I经树脂分离后的纯度。

A resin filler separation method for coenzyme I

The invention belongs to the field of coenzyme I extraction, and puts forward a resin packing separation method of coenzyme I. After filtrating and filtrating the cell filtrate containing coenzyme I through D945 macroporous resin column, it washes and eluates and collects eluent. The present invention only uses a resin filler to separate and purify coenzyme I, and can separate operation in the most suitable PH range of coenzyme I, reduce the generation rate of by-products, and greatly improve the purity of coenzyme I after separation by resin.

【技术实现步骤摘要】
一种辅酶I的树脂填料分离方法
本专利技术涉及辅酶I提取领域，特别是一种辅酶I的树脂填料分离方法。
技术介绍
辅酶I(NAD)，化学名为烟酰胺腺嘌呤二核甘酸或二磷酸烟苷，在哺乳动物体内存在氧化型(NAD+)和还原型(NADH)两种状态，是人体氧化还原反应中重要的辅酶，参与细胞物质代谢、能量合成、细胞DNA修复等多种生理活动，对机体免疫能力有重要作用。在健康状态下，人体内烟酰胺腺嘌呤二核苷酸浓度稳定，维持各项细胞正常功能。体内的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸浓度决定了细胞衰老的过程和程度，浓度下降会加速细胞衰老的过程。目前，生物制品常用树脂分离的方法对有效成分进行分离纯化，以得到高纯度的目的物。而采用树脂分离的方法对辅酶I进行纯化的报道极少，之前有报道提出，依次用122#树脂和732#树脂对辅酶I粗品进行层析分离，用122#树脂分离时，洗脱剂为氨水；用732#树脂分离时，洗脱剂为蒸馏水；需调节PH。此种方法存在弊端：采用两种树脂进行层析分离，步骤繁琐；122#树脂为弱酸性酚醛系阳离子交换树脂，要求PH的使用范围为4-14，且在偏碱性环境中吸附效果比较好，而辅酶I在PH值为2.5-3.5时最为稳定，且在碱性环境下极易变质，因此，用122#树脂对辅酶I粗品进行柱洗脱，洗脱剂为氨水，此种条件下，辅酶I容易发生变质，产生副产物，影响辅酶I纯度。因此需要寻求一种合适的树脂填料分离技术。
技术实现思路
本专利技术旨在提供一种新型树脂填料分离技术。本专利技术采用D945大孔树脂代替122#树脂和732#树脂，用于辅酶I的分离纯化。相较于122#树脂和732#树脂，D945大孔树脂的优点比表面积大、吸附力强、选择性高、重复利用率高，不需要调节PH，条件要求比较温和。本专利技术仅采用一种树脂填料对辅酶I进行分离纯化，且能在辅酶I最适宜的PH范围内进行分离操作，降低副产品的生成率，大大提高了辅酶I经树脂分离后的纯度。其具体方案为：一种辅酶I的树脂填料分离方法，将过滤后的含有辅酶I的细胞过滤液经过D945大孔树脂柱交换后水洗和洗脱，收集洗脱液，即得。在上述的辅酶I的树脂填料分离方法中，洗脱液为7-10vol％的乙醇溶液。在上述的辅酶I的树脂填料分离方法中，洗脱液为8-9vol％的乙醇溶液。在上述的辅酶I的树脂填料分离方法中，水洗操作中的水为纯化水。在上述的辅酶I的树脂填料分离方法中，所述的含有辅酶I的细胞过滤液以20-30ml/min的速度进行上柱交换。在上述的辅酶I的树脂填料分离方法中，D945大孔树脂和水洗操作中的水的体积比为1：2-4。在上述的辅酶I的树脂填料分离方法中，所述的水洗操作中水洗速度为20-30ml/min。在上述的辅酶I的树脂填料分离方法中，洗脱操作中的洗脱速度为15-20ml/min。在上述的辅酶I的树脂填料分离方法中，所述的方法具体为：S1、从鲜酵母中提取辅酶I：采用温差法对鲜酵母进行破壁，得细胞液，将细胞液经陶瓷膜微滤，得微滤液，继续超滤得超滤液，再经过纳滤得纳滤液，所述的纳滤液即为含有辅酶I的细胞过滤液；S2、上柱：将S1中得到的纳滤液上D945大孔树脂柱交换；S3、水洗：S2结束后，用纯化水洗涤；S4、洗脱：S3结束后，用乙醇溶液进行洗脱，得洗脱液。在上述的辅酶I的树脂填料分离方法中，陶瓷膜孔径为100nm，超滤膜的截留分子量为2000，纳滤膜为聚醚砜膜，截留分子量为300；S4中，通过色谱仪检测洗脱液中辅酶I的浓度，随时观察色谱图上信号峰值变化，待响应值呈直线上升趋势，且上升至为500-1000时开始收集，待信号峰值500-700一定峰值，且呈平稳状态时，停止收集。本专利技术的有益效果在于：本专利技术选用D945大孔树脂对纳滤后的辅酶I进行洗脱分离，有效地去除了无机盐及一部分有机杂质，大大提高了辅酶I的纯度；且D945大孔树脂再生方法简单，操作方便，节省能耗，适合工业化应用。具体实施方式下面结合具体实施方式，对本专利技术的技术方案作进一步的详细说明，但不构成对本专利技术的任何限制。为了更加清楚的对本专利技术进行说明，列举如下实施例来说明本专利技术的优越性。实施例1辅酶I的一种新型洗脱方法，包括如下步骤：S1、从鲜酵母中提取辅酶I：采用温差法对鲜酵母进行破壁，得细胞液A。将细胞液A经100nm陶瓷膜微滤，得微滤液B，继续用截留分子量为2000D的超滤膜进行超滤，得超滤液C，再经过截留分子量为300D的纳滤膜，得纳滤液D。S2、上柱：将S1中得到的纳滤液D以20ml/min的速度上D945大孔树脂柱。S3、水洗：S2结束后，用纯化水以23ml/min的速度进行洗涤，纯化水用量为2倍树脂柱体积。S4、洗脱：S3结束后，用7％乙醇溶液以15ml/min的速度进行洗脱，得洗脱液E。洗脱过程中，用紫外检测器进行实时监控，随时观察色谱图上信号峰值变化，待响应值呈直线上升趋势，且上升至为500时开始收集，待信号峰值500一定峰值，且呈平稳状态时，停止收集。实施例2辅酶I的一种新型洗脱方法，包括如下步骤：S1、从鲜酵母中提取辅酶I：采用温差法对鲜酵母进行破壁，得细胞液A。将细胞液A经100nm陶瓷膜微滤，得微滤液B，继续用截留分子量为2000D的超滤膜进行超滤，得超滤液C，再经过截留分子量为300D的纳滤膜，得纳滤液D。S2、上柱：将S1中得到的纳滤液D以25ml/min的速度上D945大孔树脂柱。S3、水洗：S2结束后，用纯化水以20ml/min的速度进行洗涤，纯化水用量为2.5倍树脂柱体积。S4、洗脱：S3结束后，用7.5％乙醇溶液以17ml/min的速度进行洗脱，得洗脱液E。洗脱过程中，用紫外检测器进行实时监控，随时观察色谱图上信号峰值变化，待响应值呈直线上升趋势，且上升至为560时开始收集，待信号峰值700一定峰值，且呈平稳状态时，停止收集。实施例3辅酶I的一种新型洗脱方法，包括如下步骤：S1、从鲜酵母中提取辅酶I：采用温差法对鲜酵母进行破壁，得细胞液A。将细胞液A经100nm陶瓷膜微滤，得微滤液B，继续用截留分子量为2000D的超滤膜进行超滤，得超滤液C，再经过截留分子量为300D的纳滤膜，得纳滤液D。S2、上柱：将S1中得到的纳滤液D以22.5ml/min的速度上D945大孔树脂柱。S3、水洗：S2结束后，用纯化水以25.5ml/min的速度进行洗涤，纯化水用量为3倍树脂柱体积。S4、洗脱：S3结束后，用8％乙醇溶液以18.5ml/min的速度进行洗脱，得洗脱液E。洗脱过程中，用紫外检测器进行实时监控，随时观察色谱图上信号峰值变化，待响应值呈直线上升趋势，且上升至为750时开始收集，待信号峰值600一定峰值，且呈平稳状态时，停止收集。实施例4辅酶I的一种新型洗脱方法，包括如下步骤：S1、从鲜酵母中提取辅酶I：采用温差法对鲜酵母进行破壁，得细胞液A。将细胞液A经100nm陶瓷膜微滤，得微滤液B，继续用截留分子量为2000D的超滤膜进行超滤，得超滤液C，再经过截留分子量为300D的纳滤膜，得纳滤液D。S2、上柱：将S1中得到的纳滤液D以27.5ml/min的速度上D945大孔树脂柱。S3、水洗：S2结束后，用纯化水以30ml/min的速度进行洗涤，纯化水用量为3.5倍树脂柱体积。S4、洗脱：S3结束后，用9％乙醇溶液以20ml/min的速度进行本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种辅酶I的树脂填料分离方法，其特征在于，将过滤后的含有辅酶I的细胞过滤液经过D945大孔树脂柱交换后水洗和洗脱，收集洗脱液，即得。

【技术特征摘要】
1.一种辅酶I的树脂填料分离方法，其特征在于，将过滤后的含有辅酶I的细胞过滤液经过D945大孔树脂柱交换后水洗和洗脱，收集洗脱液，即得。2.根据权利要求1所述的辅酶I的树脂填料分离方法，其特征在于，洗脱液为7-10vol％的乙醇溶液。3.根据权利要求2所述的辅酶I的树脂填料分离方法，其特征在于，洗脱液为8-9vol％的乙醇溶液。4.根据权利要求3所述的辅酶I的树脂填料分离方法，其特征在于，水洗操作中的水为纯化水。5.根据权利要求1所述的辅酶I的树脂填料分离方法，其特征在于，所述的含有辅酶I的细胞过滤液以20-30ml/min的速度进行上柱交换。6.根据权利要求1所述的辅酶I的树脂填料分离方法，其特征在于，D945大孔树脂和水洗操作中的水的体积比为1：2-4。7.根据权利要求6所述的辅酶I的树脂填料分离方法，其特征在于，所述的水洗操作中水洗速度为20-30ml/min。8.根据权利要求1所述的辅酶I的树脂填料分离方法...

【专利技术属性】
技术研发人员：金永红，郎巧洁，李映峤，
申请(专利权)人：开封康诺药业有限公司，
类型：发明
国别省市：河南,41