一种皂角刺中抗乳腺癌活性的五环三萜皂苷类化合物及其提取方法技术

本发明专利技术公开了一种皂角刺中抗乳腺癌活性的五环三萜皂苷类化合物及其提取方法，其提取方法包括如下步骤：1）将皂角刺药材粉碎后，利用有机提取剂加热回流提取、浓缩后，得皂角刺粗提物；2）将步骤1）中得到的皂角刺粗提物分散在水中，并依次用石油醚和乙酸乙酯萃取，得到水相，将水相浓缩后得到水相部位；3）将得到的水相部位加水稀释后通过吸附树脂色谱柱吸附，然后再用乙醇‑水体系梯度洗脱，将各洗脱部分浓缩至干；4）将60%乙醇‑水洗脱部分，过硅胶柱色谱吸附后，用CH2Cl2‑MeOH 体系进行梯度洗脱；5）将CH2Cl2‑MeOH体积比为1:1的洗脱部分过RP‑C18中压柱色谱后，采用甲醇‑水体系进行梯度洗脱，将80%甲醇‑水洗脱部位用CH3CN /H2O (26:74,v/v)进行制备，得到皂刺皂苷A。

Five a spina Gleditsiae anti breast cancer activity of three terpene saponins compounds and extraction method

The invention discloses a five spina Gleditsiae anti breast cancer activity of three saponins compounds and its extraction method, the extraction method comprises the following steps: 1) the spina Gleditsiae after crushing, extraction and concentration by using organic solvent after refluxing to Gleditsia sinensis extract; 2) in step 1) the Gleditsia sinensis extracts and dispersed in water, followed by extraction, petroleum ether and ethyl acetate from aqueous phase, the aqueous phase obtained after concentration of aqueous parts; 3) the water part get diluted with water by adsorption resin adsorption column, and then use the ethanol water system gradient elution, the elution concentration to dry; 4) 60% ethanol water elution, silica column adsorption chromatography, gradient elution with CH2Cl2 MeOH system; 5) CH2Cl2 MeOH volume ratio is 1:1 RP C1 diffluences 8 medium pressure column chromatography, using methanol water system by gradient elution, 80% methanol water elution with CH3CN /H2O (26:74, v/v) were prepared by Gleditsia saponin A.

【技术实现步骤摘要】
一种皂角刺中抗乳腺癌活性的五环三萜皂苷类化合物及其提取方法
本专利技术属于皂苷类化合物及其制备方法
，具体涉及一种皂角刺中抗乳腺癌活性的五环三萜皂苷类化合物及其提取方法。
技术介绍
皂苷类化合物广泛分布于如人参、麦冬、田七、柴胡、甘草等植物中和海参、软珊瑚等海洋生物中，根据苷元结构的不同可分为三萜皂苷和甾体皂苷。其中，以三萜皂苷分布最为广泛，可分为四环三萜皂苷和五环三萜皂苷，后者最为常见。三萜皂苷在体内和体外均具有良好的抗肿瘤作用，其抗肿瘤机制多样，不仅可直接抑制肿瘤细胞生长，而且可通过增强机体免疫，抑制肿瘤侵袭转移，诱导肿瘤细胞分化等机制抗肿瘤，该类化合物有良好的开发应用前景。皂角刺GleditsiaeSpina又称皂刺、皂角针和天丁等，为豆科(Leguminosae)皂荚属(GleditsiaL.)植物皂荚GleditsiasinensisLam.的干燥棘刺，为我国传统中药材，具有悠久的临床应用历史和广泛的药用价值。其味辛，性温，归肝、胃经，具有消肿托毒、排脓、杀虫、抗癌等功效，临床常用于治疗痈疽初起和脓成不溃。皂角刺对改善心血管系统、抗肝纤维化、抗菌、抗炎和提高免疫力等方面具有良好的治疗作用，对乳腺癌、肝癌、宫颈癌、直肠癌等多种癌细胞均具有一定的体外细胞毒活性，同时也是中医治疗多种癌症的常用药之一。但由于没有对皂角刺中的成分进行研究，所以无法得知皂角刺中的何种物质对癌细胞起到了细胞毒活性。
技术实现思路
针对上述现有技术中存在的技术问题，本专利技术的目的是提供一种皂角刺中抗乳腺癌活性的五环三萜皂苷类化合物及其提取方法。通过对皂角刺中的化学成分进行研究，发现了一种新的五环三萜皂苷类化合物，该化合物的皂角皂苷C-28位连有糖链且糖链上连接有单萜基团，该化合物具有显著的抗乳腺癌活性。为了解决以上技术问题，本专利技术的技术方案如下：一种皂角刺中抗乳腺癌活性的五环三萜皂苷类化合物，命名为皂刺皂苷A(glespinosideA)，具有如下结构式：皂刺皂苷A的化学名称为：3-O-β-D-xylopyranosyl-(1→2)-α-L-arabinopyranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranosylechinocysticacid28-O-β-D-xylopyranosyl-(1→4)-[β-D-galactopyranosyl-(1→2)]-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-[(6S,2E)-6-hydroxy-2,6-dimethyl-2,7-octadienoyl-(1→6)]-β-D-glucopyranosylester。上述皂刺皂苷A的提取方法，包括如下步骤：1)将皂角刺药材粉碎后，利用有机提取剂加热回流提取、浓缩后，得皂角刺粗提物；2)将步骤1)中得到的皂角刺粗提物分散在水中，并依次用石油醚和乙酸乙酯萃取，得到水相，将水相浓缩后得到水相部位；3)将步骤2)中得到的水相部位加水稀释后通过吸附树脂色谱柱吸附，然后再用乙醇-水体系梯度洗脱，将各洗脱部分浓缩至干；4)将60％乙醇-水洗脱部分，过硅胶柱色谱吸附后，用CH2Cl2-MeOH体系进行梯度洗脱，每1000ml作为一个单位接收，浓缩得各馏分；5)将CH2Cl2-MeOH体积比为1:1的洗脱部分过RP-C18中压柱色谱后，采用甲醇-水体系进行梯度洗脱，将80％甲醇-水洗脱部位用CH3CN/H2O(26:74,v/v)进行制备，得到皂刺皂苷A。步骤2)中，用石油醚和乙酸乙酯依次萃取是将粗提物中低极性和较高极性的化合物分开，石油醚萃取物为低极性化合物，乙酸乙酯萃取物为较高极性的化合物。步骤3)中，大孔树脂的洗脱溶剂为乙醇-水，梯度洗脱目的是将不同极性化合物分开，水洗脱下来的是大极性化合物，依次洗脱下来较低极性化合物。步骤4)中，CH2Cl2-MeOH梯度洗脱目的是将不同极性化合物分开，先洗脱下来的是低极性化合物，依次洗脱下来较高极性化合物。优选的，步骤1)中，所述有机提取剂为95％乙醇。常规提取溶剂为95％乙醇，由于药材提取量大，溶剂需求量大，而乙醇毒性小，提取率高，为优先考虑的溶剂。此处的95％为体积分数。进一步优选的，步骤1)中，对粉碎后的皂角刺药材进行提取时，固液比为1:2-4，优选为1:3。更进一步优选的，步骤1)中，加热回流提取的次数为2-4次，每次提取的时间为1.5-2.5h；优选的，加热回流提取的次数为3次，每次提取的时间为2h。优选的，步骤1)中还包括将提取液合并过滤的步骤，过滤后的提取液进行浓缩。浓缩是将有机溶剂挥发完全，避免对后续分离的影响。优选的，步骤2)中，将得到的皂角刺粗提物分散在水中的方法为：向粗提物中加入水后，超声分散。优选为，粗提物与水的体积比为1:1。优选的，步骤2)中，依次用石油醚和乙酸乙酯进行萃取，石油醚和乙酸乙酯的萃取次数均为3次。进一步优选的，步骤2)中，每次萃取时加入的石油醚和乙酸乙酯的体积与水的体积相等。优选的，步骤3)中，将步骤2)中得到的水相部位加水稀释的倍数为1:1。优选的，步骤3)中，所述吸附树脂色谱柱为D101大孔吸附树脂色谱柱。优选的，步骤3)中，乙醇-水体系梯度洗脱的方法是依次用水、20％乙醇-水、40％乙醇-水和80％乙醇-水进行洗脱。优选的，步骤3)中，各洗脱部分浓缩至干的方法为减压浓缩。减压浓缩是使用抽真空的方式降低水的沸腾温度使水蒸发干燥。优选的，步骤4)中，用CH2Cl2-MeOH体系进行梯度洗脱的方法为：依次以CH2Cl2和MeOH的体积比为100:1→50:1→25:1→15:1→10:1→5:1→1:1→0:1进行梯度洗脱。优选的，步骤4)中，还包括将各馏分用TLC检测后，将成分相似部分合并的步骤。优选的，步骤5)中，用甲醇-水体系进行梯度洗脱的方法为：依次用10％甲醇-水、35％甲醇-水、50％甲醇-水、60％甲醇-水、80％甲醇-水、100％甲醇进行洗脱。优选的，步骤5)中，将80％甲醇-水洗脱部位用CH3CN/H2O(26:74，v/v)进行制备，其具体方法为将80％甲醇-水洗脱部位用1mL甲醇溶解，使用ShimadzuLC-6AD半制备液相仪进行制备，AB两流动相分别设定为CH3CN和H2O，流动相比例设定为26:74，流速设定为3mLmin-1，检测波长设定为210nm，每次进样量为80μL。进一步优选的，步骤5)中，采用CH3CN/H2O进行制备时，流速为3mLmin-1，检测波长为210nm。本专利技术的有益效果为：通过对皂角刺中的化学成分进行研究，发现了一种新的五环三萜皂苷类化合物，该化合物的皂角皂苷C-28位连有糖链且糖链上连接有单萜基团，该化合物具有显著的抗乳腺癌活性。附图说明构成本申请的一部分的说明书附图用来提供对本申请的进一步理解，本申请的示意性实施例及其说明用于解释本申请，并不构成对本申请的不当限定。图1为皂刺皂苷A的1HNMR图谱；图2为皂刺皂苷A的13CNMR图谱；图3为皂刺皂苷A的HMQC图谱；图4为皂刺皂苷A的HMBC图谱；图5为皂刺皂苷A的1H1H-COSY图谱；图6为皂刺皂苷A的HRESIMS图谱。具体实施方式应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本申请提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种皂角刺中抗乳腺癌活性的五环三萜皂苷类化合物，命名为皂刺皂苷A，其特征在于：具有如下结构式：

【技术特征摘要】
1.一种皂角刺中抗乳腺癌活性的五环三萜皂苷类化合物，命名为皂刺皂苷A，其特征在于：具有如下结构式：2.权利要求1所述的五环三萜皂苷类化合物的提取方法，其特征在于：包括如下步骤：1)将皂角刺药材粉碎后，利用有机提取剂加热回流提取、浓缩后，得皂角刺粗提物；2)将步骤1)中得到的皂角刺粗提物分散在水中，并依次用石油醚和乙酸乙酯萃取，得到水相，将水相浓缩后得到水相部位；3)将步骤2)中得到的水相部位加水稀释后通过吸附树脂色谱柱吸附，然后再用乙醇-水体系梯度洗脱，将各洗脱部分浓缩至干；4)将60％乙醇-水洗脱部分，过硅胶柱色谱吸附后，用CH2Cl2-MeOH体系进行梯度洗脱，每1000ml作为一个单位接收，浓缩得各馏分；5)将CH2Cl2-MeOH体积比为1:1的洗脱部分过RP-C18中压柱色谱后，采用甲醇-水体系进行梯度洗脱，将80％甲醇-水洗脱部位用CH3CN/H2O(26:74,v/v)进行制备，得到皂刺皂苷A。3.根据权利要求2所述的提取方法，其特征在于：步骤1)中，所述有机提取剂为95％乙醇；优选的，步骤1)中，对粉碎后的皂角刺药材进行提取时，固液比为1:2-4，优选为1:3。进一步优选的，步骤1)中，加热回流提取的次数为2-4次，每次提取的时间为1.5-2.5h；优选的，加热回流提取的次数为3次，每次提取的时间为2h。4.根据权利要求2所述的提取方法，其特征在于：步骤2)中，将得到的皂角刺粗提物分散在水中的方法为：向粗提物中加入水后，超声分散；优选为，粗提物与水的体积比为1:1；优选的，步骤2)中，依次用石油醚和乙酸乙酯进行萃取，石油醚和乙酸乙酯的萃取次数均为3次；优选的，步骤2...

【专利技术属性】
技术研发人员：于金倩，王晓，段文娟，王岱杰，耿岩玲，
申请(专利权)人：山东省分析测试中心，
类型：发明
国别省市：山东,37