一种重组人表皮生长因子声敏纳米脂质体及其制备方法技术

本发明专利技术一种重组人表皮生长因子声敏纳米脂质体及其制备方法，属于医药制剂技术领域。所述制备方法包括：(1)、油酸改性的Fe3O4磁性纳米粒子的制备；(2)、重组人表皮生长因子声敏纳米脂质体的制备。所述重组人表皮生长因子声敏纳米脂质体为通过上述制备方法制备得到的。本发明专利技术具有以下优点：本发明专利技术中油酸改性的Fe3O4磁性纳米粒子分散性好、不易聚集；制备过程在铺膜时加入磁性纳米粒子，使修饰的磁性纳米粒子位于疏水性的磷脂双分子层中，同时磷脂与胆固醇摩尔比为2.4左右使相变温度相对降低；本发明专利技术不但具有磁导向特性，同时还具有声敏的特性，在提高rhEGF生物利用度的同时，还能增强rhEGF的靶向治疗作用。

Recombinant human epidermal growth factor sound sensitive nano liposome and preparation method thereof

The invention relates to a recombinant human epidermal growth factor sound sensitive nano liposome and a preparation method thereof, belonging to the technical field of pharmaceutical preparations. The preparation method includes: (1) preparation of oleic acid modified Fe3O4 magnetic nanoparticles; (2) preparation of recombinant human epidermal growth factor sound sensitive nano liposome. The recombinant human epidermal growth factor sound sensitive nano liposome is prepared by the above preparation method. The invention has the following advantages: the invention of oleic acid modified Fe3O4 magnetic nanoparticles with good dispersion, easy aggregation; the preparation process of adding magnetic nanoparticles in the film, the magnetic nanoparticles modified on the hydrophobic lipid bilayer, while phospholipid and cholesterol ratio is about 2.4. The relative phase transition temperature reduced; the invention not only has magnetic characteristics, but also has the characteristics of sound sensitivity, in improving the bioavailability of rhEGF and rhEGF can enhance the effect of targeted therapy.

【技术实现步骤摘要】
一种重组人表皮生长因子声敏纳米脂质体及其制备方法
本专利技术属于医药制剂
，具体涉及一种重组人表皮生长因子声敏纳米脂质体及其制备方法。
技术介绍
重组人表皮生长因子(rhEGF)是最早发现最早应用于临床的多肽生长因子之一，由53个氨基酸组成，分子量约为6200Da。其具有酪氨酸激酶活性，与EGF组合后可启动细胞核内的有关基因，作为增强剂促进细胞分裂增殖。因而具有促进表皮和上皮细胞的增殖，刺激多种培养细胞的生长，增强蛋白质及DNA合成等多种生物学功能。在临床上主要用于创烧伤救治、皮肤和角膜移植、粘膜损伤及溃疡的治疗、促进伤口愈合等。然而，rhEGF作为多肽类药物，存在着分子量大，溶解度小，稳定性差，生物半衰期短，对pH、酶、温度等外界环境敏感等缺点，为了改善上述缺点和进一步增强rhEGF对创伤救治、伤口愈合等的靶向性，选择一种合适的药物载体，显得非常重要。
技术实现思路
磁性纳米脂质体作为一种磁导向新型药物传递系统，可利用外加磁场的引导来改变药物在体内的分布，提高其治疗部位的药物浓度，增强药物吸收，并降低其他非治疗部位的药物浓度，达到靶向治疗的效果。本专利技术选择rhEGF为原料药，采用蛋黄卵磷脂(EPC)与胆固醇作为磁性脂质体的膜材，通过正交试验进行制备工艺与处方工艺的优化，同时加入油酸改性纳米四氧化三铁，制成rhEGF磁敏纳米脂质体，使其不但具有磁导向特性，同时还具有声敏的特性，在提高rhEGF生物利用度的同时，还能增强rhEGF的靶向治疗作用。本专利技术的目的在于公开了一种重组人表皮生长因子声敏纳米脂质体。本专利技术的第二个目的在于公开了上述重组人表皮生长因子声敏纳米脂质体的制备方法。本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的：一种重组人表皮生长因子声敏纳米脂质体的制备方法，其中，所述制备方法包括下述步骤：(1)、油酸改性的Fe3O4磁性纳米粒子的制备；(2)、重组人表皮生长因子声敏纳米脂质体的制备。上述技术方案所述的一种重组人表皮生长因子声敏纳米脂质体的制备方法，其中，所述步骤(1)的具体过程为：(ⅰ)、取0.1mol·L-1的FeCl3·6H2O溶液和FeCl2·4H2O溶液各40mL置于250mL三口烧瓶中，搅拌使其充分混匀，于30℃边搅拌边缓慢滴加1mol·L-1氢氧化钠溶液直至pH为11，加热至60℃，搅拌1h，使Fe3O4颗粒熟化，停止搅拌后冷却至室温，用水和无水乙醇反复交替洗直至pH为7；(ⅱ)、步骤(ⅰ)所得溶液加热至60℃时逐滴加入油酸对Fe3O4颗粒进行改性，搅拌反应1h，反应停止后冷却至室温，用水反复洗涤油酸包覆的Fe3O4直至pH为7，于70℃真空干燥，得黑色的磁性纳米粒子即为油酸改性的Fe3O4磁性纳米粒子。上述技术方案所述的一种重组人表皮生长因子声敏纳米脂质体的制备方法，其中，所述步骤(2)的具体过程为：(a)、称取rhEGF10.0mg，蛋黄卵磷脂0.50g、胆固醇0.10g、步骤(1)中制得的油酸改性的Fe3O4磁性纳米粒子20.0mg、维生素E2.5mg，溶于200ml氯仿-甲醇(3:1)的溶剂中，置于500mL茄形瓶中常压旋转水化，水化时间50min，水化温度55℃；然后40℃减压蒸发氯仿-甲醇(3:1)的溶剂，形成均匀干燥薄膜；(b)、往干燥薄膜中加入含0.5％聚山梨酯-80的水200ml，45℃水化30min，得含药磁性声敏脂质体混悬液，挤压过0.22μm膜；(c)、在上述溶液中加入10ml10％甘露醇的水溶液，搅拌并充分溶解，于－80℃快速冷冻12h，转至冻干机中，于－40℃打开真空泵，抽真空24h，得rhEGF声敏纳米脂质体冻干品，复水后即得rhEGF磁性声敏纳米脂质体。一种重组人表皮生长因子声敏纳米脂质体，其中，所述重组人表皮生长因子声敏纳米脂质体由上述技术方案中任一技术方案所述的制备方法制备。本专利技术具有以下有益效果：1、本专利技术中制备得到的油酸改性的Fe3O4磁性纳米粒子与未修饰的四氧化三铁纳米粒子相比具有分散性好、不易聚集的特征。2、本专利技术的制备方法采用铺膜时加入磁性纳米粒子而不是水化后加入，使修饰的磁性纳米粒子位于疏水性的磷脂双分子层中；同时磷脂与胆固醇摩尔比为2.4左右(通常为0.3-1之间)使相变温度相对降低。3、本专利技术选择rhEGF为原料药，采用蛋黄卵磷脂(EPC)与胆固醇作为磁性脂质体的膜材，通过正交试验进行制备工艺与处方工艺的优化，同时加入油酸改性纳米四氧化三铁，制成rhEGF声敏纳米脂质体，使其不但具有磁导向特性，同时还具有声敏的特性，在提高rhEGF生物利用度的同时，还能增强rhEGF的靶向治疗作用。4、本专利技术制备的rhEGF声敏纳米脂质体性质稳定、形态完整、粒径大小适中、包封率高、渗漏率低、磁响应性好，具有良好的体外声敏释放特性，附图说明：1、图1为rhEGF声敏纳米脂质体的TEM(×93000)。2、图2为rhEGF的体外释放曲线。3、图3为超声时间对rhEGF声敏纳米脂质体累积释放度的影响。4、图4为超声强度对rhEGF声敏纳米脂质体累积释放度的影响。具体实施方式：为使本专利技术的技术方案便于理解，以下结合具体实施例对本专利技术一种重组人表皮生长因子声敏纳米脂质体及其制备方法作进一步的说明。本专利技术所使用的材料如下：一、材料：TECNAT10型透射电子显微镜，TK-12D型透皮扩散试验仪，UV-5500PC型紫外-可见分光光度计，AUW-120D型分析天平，HJ-3型数显恒温磁力搅拌器，安捷伦1160型高效液相色谱，雷磁pHS-25型pH计，LGJ-12型真空冷冻干燥机，DW-HL398S型超低温冷冻储存箱，超声治疗仪(频率设置1.0MHz，声强0.1～2.2W·cm－2，连续可调)，ELx800型酶标仪，Zatasize1000HSA型纳米激光粒度仪。人表皮生长因子(rhEGF)，维生素E和交联葡聚糖凝胶(sephadexG50)，蛋黄卵磷脂(EPC)，胆固醇，氯化铁，氯化亚铁，水为超纯水，试剂均为分析纯。实施例1：重组人表皮生长因子声敏纳米脂质体的制备：一、油酸改性的Fe3O4磁性纳米粒子的制备：取0.1mol·L-1的FeCl3·6H2O溶液和FeCl2·4H2O溶液各40mL置于250mL三口烧瓶中，搅拌使其充分混匀，于30℃边搅拌边缓慢滴加1mol·L-1氢氧化钠溶液直至pH为11，加热至60℃，搅拌1h，使Fe3O4颗粒熟化，停止搅拌后冷却至室温，用水和无水乙醇反复交替洗直至pH为7。加热至60℃时逐滴加入油酸对Fe3O4颗粒进行改性，搅拌反应1h，反应停止后冷却至室温，用水反复洗涤油酸包覆的Fe3O4直至pH为7，于70℃真空干燥，得黑色的磁性纳米粒子。二、rhEGF声敏纳米脂质体的制备：称取rhEGF10.0mg，蛋黄卵磷脂(EPC)0.50g、胆固醇0.10g、2.1中制得的磁性纳米粒子20.0mg、维生素E2.5mg，溶于200ml氯仿-甲醇(3:1)的溶剂中，置于500mL茄形瓶中常压旋转水化，水化时间50min，水化温度55℃；然后40℃减压蒸发氯仿-甲醇(3:1)的溶剂，形成均匀干燥薄膜；往干燥薄膜中加入含0.5％聚山梨酯-80的水200ml，45℃水化30min，得含药磁性声敏脂质体混悬液，挤压过膜(0.22μm)；本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种重组人表皮生长因子声敏纳米脂质体的制备方法，其特征在于：所述制备方法包括下述步骤：(1)、油酸改性的Fe3O4磁性纳米粒子的制备；(2)、重组人表皮生长因子声敏纳米脂质体的制备。

【技术特征摘要】
1.一种重组人表皮生长因子声敏纳米脂质体的制备方法，其特征在于：所述制备方法包括下述步骤：(1)、油酸改性的Fe3O4磁性纳米粒子的制备；(2)、重组人表皮生长因子声敏纳米脂质体的制备。2.根据权利要求1所述的一种重组人表皮生长因子声敏纳米脂质体的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)的具体过程为：(ⅰ)、取0.1mol·L-1的FeCl3·6H2O溶液和FeCl2·4H2O溶液各40mL置于250mL三口烧瓶中，搅拌使其充分混匀，于30℃边搅拌边缓慢滴加1mol·L-1氢氧化钠溶液直至pH为11，加热至60℃，搅拌1h，使Fe3O4颗粒熟化，停止搅拌后冷却至室温，用水和无水乙醇反复交替洗直至pH为7；(ⅱ)、步骤(ⅰ)所得溶液加热至60℃时逐滴加入油酸对Fe3O4颗粒进行改性，搅拌反应1h，反应停止后冷却至室温，用水反复洗涤油酸包覆的Fe3O4直至pH为7，于70℃真空干燥，得黑色的磁性纳米粒子即为油酸改性的Fe3O4磁性纳米粒子。3.根据权利要求1所述的一种重组人表皮生长因子声敏纳...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘畅，卢永锋，董源，刘博，
申请(专利权)人：中国人民解放军第三O五医院，
类型：发明
国别省市：北京,11