豆芋花多糖及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种豆芋花多糖的制备方法，包括以下步骤：1)、豆芋花多糖粗品的制备：将豆芋花和蒸馏水混合后先进行提取，然后打浆，再离心、浓缩，得到浓缩液；在所得的浓缩液中加入乙醇至乙醇终浓度为80±5％，4±1℃下静置24±2h后收集沉淀，得豆芋花粗多糖；2)、豆芋花粗多糖的纯化：包括豆芋花粗多糖的活性炭脱色和Sevage法脱蛋白。所得的豆芋花多糖，含有β‑糖苷健和吡喃糖环，还含有葡萄糖、果糖和木糖，葡萄糖、果糖、木糖这三者摩尔比为1.79:1:0.03。

【技术实现步骤摘要】
豆芋花多糖及其制备方法
本专利技术涉及多糖提取领域，具体涉及一种从豆芋花中提取及纯化多糖的方法及所得的多糖。
技术介绍
豆芋(ApiosamericanaMedikus)原产于北美洲东部的加拿大至美国佛罗里达州的南部地区，属多年生豆科植物(蝶形花科亚科)。其可食用部分为地下块茎，且其蛋白质含量高于其他植物块茎，是一种既营养又有经济价值的作物，因而常被印第安人作为主食。豆芋自2009年国内引种成功，并被逐渐在富阳、金华、龙游、温州等地推广种植。研究表明豆芋不同部位(花、藤、叶、块茎)均含有丰富的游离氨基酸、可溶性蛋白、多糖、皂苷、黄酮、异黄酮、维生素C、维生素E和矿物质等成分。其中，豆芋花的维生素C含量最高，同时还含有较高含量的维生素E、总皂苷和异黄酮，具有极大的开发潜力。美国豆芋对高血压、糖尿病和高血脂症等现代生活习惯病具有明显的改善效果。多糖是由超过10个的单糖分子聚合而成的一类化合物，由醛醣或酮糖通过糖苷键连接而成。植物多糖的糖链结合以β－1,3或β－1,6键为主，有的多糖还带有分支链，整体而言结构较为复杂。多糖的结构与其生物活性之间具有密切的关系，多糖结构的解析有助于我们更好地开发和利用多糖。《美国豆芋不同部位生化特征成分分析》一文告知了：测量游离氨基酸、可溶性蛋白和总糖时：粉碎后过0.42mm筛，采用3:500(m/v)加入100℃的蒸馏水，于100℃进行恒温水浴提取。测量总皂苷、总黄酮和异黄酮含量时：采用1:100(m/v)加入无水乙醇，于60℃恒温水浴3h。测量VC时：取样品1g，用40ml0.01mol/L的HCL浸泡于60℃超声40min。测量VE时，取样品3g，用加入20ml无水乙醇，50℃恒温震荡50min。CN201210574017.9的专利技术《大越豆芋花总皂苷、多糖同时制备的方法及其用途》告知了以下内容：制备方法按以下步骤：1)采摘大越豆芋花，清洗，干燥，粉碎，过40目筛，得到大越豆芋花粉末；2)大越豆芋花粉末，按照料液比1:10～1:20，加入浓度为70％～90％乙醇，在50～80℃回流提取1～3次，每次时间1～3小时，过滤，得上清液和滤渣；3)上清液，挥干后用水溶解，石油醚脱脂，正丁醇萃取，取正丁醇部分经大孔吸附树脂吸附洗脱后，浓缩，干燥得到豆芋花皂苷粉；4)滤渣，挥干溶媒，用其重量10～20倍的蒸馏水，于70～90℃回流提取1～3次，每次时间2～3小时，过滤，收集合并滤过液；5)滤过液脱色、脱蛋白，浓缩，加入乙醇，静置过夜进行醇沉，收集沉淀，透析后，用DEAE～纤维素柱层析，分别用蒸馏水、0.1M，0.3M，0.5M～NaCl溶液洗脱液，收集0.3M～0.5M～NaCl洗脱液，透析，浓缩，干燥，得豆芋花多糖。本专利技术从大越豆芋花中同时制备得到的总皂苷和多糖，纯度高，活性强，可以在制备具有抗氧化、血糖调节作用的药物或功能食品中得到广泛应用。201310414063.7的《一种魔芋多肽提取物、制备方法及其用途》告知了以下内容：将魔芋飞粉加入纯水调节pH值至9.0进行浸提，然后经过2次酶解反应，再经超滤纯化，得魔芋多肽。该魔芋多肽能用于治疗糖尿病和糖尿病并发症，糖尿病并发症包括糖尿病并发症动脉粥样硬化、糖尿病视网膜病变、非酒精性脂肪肝和糖尿病肾病等。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种豆芋花多糖及其制备方法(提取及纯化方法)。为了解决上述技术问题，本专利技术提供一种豆芋花多糖的制备方法，包括以下步骤：1)、豆芋花多糖粗品的制备：按照1g:4～6ml(较佳为1g:5ml)的料液比将豆芋花和蒸馏水混合后先进行提取(提取的同时也实现了灭酶)，然后打浆，再离心(4000r/min离心15min)，将离心所得的上清液旋蒸浓缩至为原体积的1/4～1/6，得到浓缩液；于搅拌条件下，在所得的浓缩液中加入乙醇(纯乙醇)至乙醇终浓度为80±5％(体积％)，4±1℃下静置24±2h后收集沉淀，得豆芋花粗多糖；2)、豆芋花粗多糖的纯化，依次进行以下步骤：A、活性炭脱色：将豆芋花粗多糖用蒸馏水溶解(蒸馏水的用量只需能保证豆芋花粗多糖溶解即可)，得豆芋花粗多糖溶液，在豆芋花粗多糖溶液中加入活性炭搅拌后过滤；以所得的滤液替代上述豆芋花粗多糖溶液重复上述加入活性炭及搅拌后过滤的脱色过程，直至最终所得的滤液呈无色，得脱色后多糖粗品溶液；B、Sevage法脱蛋白：在脱色后多糖粗品溶液中加入Sevage试剂，于磁力搅拌器中1000±100转/min转速搅拌30±5min，然后离心(4000r/min离心25～30min)，除去位于下层的水层和位于上层的溶剂层之间的变性蛋白；所述Sevage试剂由正丁醇：氯仿＝1:2.5～3.5(较佳为1：3)的体积比混合而得；以所得的除去变性蛋白后的所得物替代上述脱色后多糖粗品溶液重复上述加入Sevage试剂、磁力搅拌、离心、除去变性蛋白的脱蛋白过程4～6次，得除去蛋白质的多糖溶液；将除去蛋白质的多糖溶液用旋蒸浓缩直至为原体积的8～12％，将浓缩液于-70～-90℃预冻5～7h，然后用真空冷冻干燥机干燥成粉末状，得到豆芋花多糖。作为本专利技术的豆芋花多糖的制备方法的改进：所述步骤1)中：提取(灭酶提取)为于90±5℃处理80～120min；以离心所得的滤渣替代豆芋花重复上述加入蒸馏水后先进行提取、然后打浆、再离心的过程1～3次(较佳为2次)，合并所有的离心所得的上清液旋蒸浓缩至原体积的1/4～1/6(较佳为1/5)，得浓缩液。作为本专利技术的豆芋花多糖的制备方法的进一步改进：所述步骤2)A中：豆芋花粗多糖与活性炭的质量比为18～22:1(较佳为20:1)，于80±10℃搅拌拌45±5min后过滤。备注：重复脱色过程的次数为2～4次。作为本专利技术的豆芋花多糖的制备方法的进一步改进：所述步骤2)B中：脱色后多糖粗品溶液与Sevage试剂的体积比为2.5～3.5:1(较佳为3:1)。本专利技术还同时提供了利用上述方法制备而得的豆芋花多糖：含有β-糖苷健和吡喃糖环，还含有葡萄糖、果糖和木糖，葡萄糖、果糖、木糖这三者摩尔比为1.79:1:0.03。备注说明：该豆芋花多糖种类单一，为圆球状聚集态，相对分子质量为3187Da。针对本专利技术所述方法提取纯化所得豆芋花多糖，首先采用扫描电镜分析观察其表观形态，进而对其结构、相对分子质量以及单糖组成进行分析。本专利技术为医药、保健品、食品等领域开发天然功能因子提供新资源，具有巨大的应用价值。该豆芋花多糖能用于制备神经细胞氧化损伤抑制剂。本专利技术具有以下如下技术优势：1、本专利技术中提供了从豆芋花中提取及纯化多糖的方法，通过简单高效的方法从豆芋花得到高纯度的多糖，制得的多糖具纯度高、能耗低，高纯度的多糖在医药、保健品、食品等领域具有巨大的应用价值。2、本专利技术对豆芋花多糖结构进行初步解析，为豆芋花多糖的开发利用奠定基础。本专利技术的豆芋花多糖的用法为口服，用量每次约150～250mg，每日三次。附图说明下面结合附图对本专利技术的具体实施方式作进一步详细说明。图1为豆芋花多糖表观形态图；图A代表放大倍数1000倍豆芋花多糖表面形态；图B代表放大倍数2000倍豆芋花多糖表面形态；图C代表放大倍数2500倍豆芋花多糖表面形态；图D代表放大倍数5000倍豆芋花多糖表面形态；图E代表放大本文档来自技高网...

【技术保护点】
豆芋花多糖的制备方法，其特征是包括以下步骤：1)、豆芋花多糖粗品的制备：按照1g:4～6ml的料液比将豆芋花和蒸馏水混合后先进行提取，然后打浆，再离心，将离心所得的上清液旋蒸浓缩至为原体积的1/4～1/6，得到浓缩液；于搅拌条件下，在所得的浓缩液中加入乙醇至乙醇终浓度为80±5％，4±1℃下静置24±2h后收集沉淀，得豆芋花粗多糖；2)、豆芋花粗多糖的纯化，依次进行以下步骤：A、活性炭脱色：将豆芋花粗多糖用蒸馏水溶解，得豆芋花粗多糖溶液，在豆芋花粗多糖溶液中加入活性炭搅拌后过滤；以所得的滤液替代上述豆芋花粗多糖溶液重复上述加入活性炭及搅拌后过滤的脱色过程，直至最终所得的滤液呈无色，得脱色后多糖粗品溶液；B、Sevage法脱蛋白：在脱色后多糖粗品溶液中加入Sevage试剂，于磁力搅拌器中1000±100转/min转速搅拌30±5min，然后离心，除去位于下层的水层和位于上层的溶剂层之间的变性蛋白；所述Sevage试剂由正丁醇：氯仿＝1:2.5～3.5的体积比混合而得；以所得的除去变性蛋白后的所得物替代上述脱色后多糖粗品溶液重复上述加入Sevage试剂、磁力搅拌、离心、除去变性蛋白的脱蛋白过程4～6次，得除去蛋白质的多糖溶液；将除去蛋白质的多糖溶液用旋蒸浓缩直至为原体积的8～12％，将浓缩液于‑70～‑90℃预冻5～7h，然后用真空冷冻干燥机干燥成粉末状，得到豆芋花多糖。...

【技术特征摘要】
1.豆芋花多糖的制备方法，其特征是包括以下步骤：1)、豆芋花多糖粗品的制备：按照1g:4～6ml的料液比将豆芋花和蒸馏水混合后先进行提取，然后打浆，再离心，将离心所得的上清液旋蒸浓缩至为原体积的1/4～1/6，得到浓缩液；于搅拌条件下，在所得的浓缩液中加入乙醇至乙醇终浓度为80±5％，4±1℃下静置24±2h后收集沉淀，得豆芋花粗多糖；2)、豆芋花粗多糖的纯化，依次进行以下步骤：A、活性炭脱色：将豆芋花粗多糖用蒸馏水溶解，得豆芋花粗多糖溶液，在豆芋花粗多糖溶液中加入活性炭搅拌后过滤；以所得的滤液替代上述豆芋花粗多糖溶液重复上述加入活性炭及搅拌后过滤的脱色过程，直至最终所得的滤液呈无色，得脱色后多糖粗品溶液；B、Sevage法脱蛋白：在脱色后多糖粗品溶液中加入Sevage试剂，于磁力搅拌器中1000±100转/min转速搅拌30±5min，然后离心，除去位于下层的水层和位于上层的溶剂层之间的变性蛋白；所述Sevage试剂由正丁醇：氯仿＝1:2.5～3.5的体积比混合而得；以所得的除去变性蛋白后的所得物替代上述脱色后多糖粗品溶液重复上述加入S...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑晓冬，楚强，陈鹏华，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33