一种松香烷型二萜化合物及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供一种新的松香烷型二萜化合物，制备方法为以干燥的长叶大青枝条碎片为原料，通过乙醇水溶液加热回流提取，提取液经过反复的硅胶柱层析、反相C18柱层析、凝胶柱色谱分离得到式(I)所示的单体化合物12(16),8(9)–二环氧–18(4→3)–移–3,5,12–松香烷三烯–7,11,14–三酮。本发明专利技术得到的新化合物具有很好的抗肿瘤活性，可以为医药工业提供有药用价值的新化合物或先导化合物，制备过程操作简单，可实现大规模生产，提高了长叶大青的药用价值。

Rosin type two terpene compound and its preparation method and Application

The present invention provides a new type of two abietane diterpenoid compounds, preparation method for dry leaf debris Daqing branches as raw material, through the aqueous solution of ethanol refluxing extraction, extract by silica gel column chromatography, repeated reversed-phase C18 column chromatography and gel column chromatographic separation type (I) shown in the list 12 compounds (16), 8 (9) - two (4 - 3 - 18 epoxy) - shift - 3,5,12 - three - 7,11,14 - alkyl rosin allyl ketone three. The new compounds obtained by the invention has good antitumor activity, can provide new compounds or leading compounds have medicinal value for the pharmaceutical industry, simple preparation process, can realize large-scale production, improve the medicinal value of long Ye Daqing.

【技术实现步骤摘要】
一种松香烷型二萜化合物及其制备方法和应用
本专利技术涉及植物次生代谢产物分离纯化领域，具体涉及一种从药用植物中提取、分离具有抗肿瘤活性的松香烷型二萜化合物及制备方法和应用。
技术介绍
长叶大青为马鞭草科大青属药用植物。大青属植物味苦，性寒，有清热解毒，祛风除湿的功效，用于治疗乙脑、流脑、感冒高烧、头痛、肠炎、痢疾、黄疸、齿痛、鼻衄、咽喉肿痛等症,为我国传统民间中药。中医临床作为抗病毒感染药物疗效确切，被用于传染性肝炎、流行性感冒、上呼吸道感染及登革热的治疗，临床效果显著。本专利技术中的化合物为松香烷型二萜化合物是一种新的化合物，在已有文献中未见报道，实验证实该化合物具有较好的抗肿瘤活性，可在制备抗肿瘤药物中应用。
技术实现思路
本专利技术的目的之一在于提供了从长叶大青中分离得到一种新的二萜化合物，如式(I)所示松香烷型二萜化合物为：12(16),8(9)–二环氧–18(4→3)–移–3,5,12–松香烷三烯–7,11,14–三酮。本专利技术的另一个目的是提供上述松香烷型二萜化合物的制备方法本专利技术的另一个目的是提供上述松香烷型二萜化合物在抗肿瘤药物中的应用，尤其是在抗白血病或人肺癌药物中的应用。本专利技术采用如下的技术方案：一种如式(I)所示的松香烷型二萜化合物的制备方法，所述方法具体按如下步骤进行：(1)以干燥的长叶大青枝条碎片为原料，用90％-95％的乙醇水溶液加热回流提取，提取完毕，合并提取液减压浓缩后得浸膏。(2)将步骤(1)所得浸膏加水混合成悬浊液后，用等量乙酸乙酯萃取，合并萃取液，得到乙酸乙酯萃取物。(3)取步骤(2)所得乙酸乙酯萃取物，进行硅胶柱层析，以石油醚-乙酸乙酯作为洗脱剂进行梯度洗脱，收集洗脱液并通过薄层层析分析，对相似组分进行合并，得到不同的组分。(4)将步骤(3)所得不同的组分进行反相C18柱层析，分别采用20％、40％、60％和80％的甲醇水溶液作为流动相，收集洗脱液。(5)将步骤(4)所得洗脱液通过凝胶柱色谱分析，以甲醇：氯仿＝4:1作为流动相，得到式(I)所示的松香烷型二萜化合物。进一步，步骤(1)中所述提取是在回流温度下提取3次，每次为6小时。进一步，步骤(1)中乙醇加入量以长叶大青枝条碎片质量计为5mL/g。进一步，步骤(3)中洗脱梯度石油醚:乙酸乙酯的体积比依次为100：1、20：1、5：1、3：1、1：1、1：3和1：10。再进一步，步骤(4)中所述组分为步骤(3)以石油醚：乙酸乙酯为3:1为洗脱剂得到的洗脱部分。更进一步，步骤(5)中所述组分为步骤(4)中以80％甲醇水溶液洗脱所得部分。更进一步，本专利技术中所得二萜化合物经过抗肿瘤活性检测，结果显示该化合物具有良好的抗肿瘤活性，可为医药工业提供有药用价值的新化合物或先导化合物。与现有技术相比，本专利技术的有益效果主要体现在：1、提供一种具有抗肿瘤活性的新化合物。2、操作简单，可实现大规模生产，提高了长叶大青的药用价值。附图说明：图1为式(I)所示的单体化合物的氢谱(氘代试剂：CDCl3)。图2为式(I)所示的单体化合物的碳谱(氘代试剂：CDCl3)。图3为式(I)所示的单体化合物的DEPT135谱(氘代试剂：CDCl3)。图4为式(I)所示的单体化合物的COSY谱(氘代试剂：CDCl3)。图5为式(I)所示的单体化合物的HSQC谱(氘代试剂：CDCl3)。图6为式(I)所示的单体化合物的HMBC谱(氘代试剂：CDCl3)。具体实施方式：为了使本专利技术的目的和优点更加明白清楚，下面结合实施例对本专利技术做进一步阐述，必须说明此处所描述的具体实施例仅用于解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。实施例1：(1)取干燥的长叶大青枝条碎片9kg作为原料，用90％的乙醇45L加热回流提取3次，每次6小时，合并提取液并减压浓缩后得浸膏(630g)。(2)取500g浸膏加2L的水混合成悬浊液后，用等体积(2L)的乙酸乙酯萃取3次，合并萃取液，乙酸乙酯萃取相(81g)。(3)采用浸膏70g，以100g硅胶拌样，1500g硅胶装柱，进行硅胶柱层析，用石油醚-乙酸乙酯作为洗脱剂进行梯度洗脱，洗脱梯度分别为100:1，20:1，5:1，3:1，1:1，1:3，1:10，每个梯度收集10个馏分，共70个馏分，每个馏分为500mL，所得馏分通过薄层层析分析将相似组分合并，共得到19个组分、分别为E1-E19。(4)在石油醚-乙酸乙酯(3:1)洗脱部分得到组分E11(0.8g)，对此进行反相C18柱层析，采用20％、40％、60％及80％的甲醇水溶液作为流动相，分别得到组分E11-1～E11-4。(5)将E11-4组分过SephadexLH-20凝胶柱色谱，以甲醇：氯仿＝4:1作为流动相，得到单体化合物12(16),8(9)–二环氧–18(4→3)–移–3,5,12–松香烷三烯–7,11,14–三酮90mg,收率0.01％。实施例2：(1)取干燥的长叶大青枝条碎片100g作为原料，用95％的乙醇500mL加热回流提取3次，每次6小时，合并提取液并减压浓缩后得浸膏(6.5g)。(2)取5g浸膏加20mL的水混合成悬浊液后，用等体积20mL的乙酸乙酯萃取3次，合并萃取液，乙酸乙酯萃取相0.82g。(3)采用浸膏0.7g，以1g硅胶拌样，15g硅胶装柱，进行硅胶柱层析，用石油醚-乙酸乙酯作为洗脱剂进行梯度洗脱，洗脱梯度分别为100:1，20:1，5:1，3:1，1:1，1:3，1:10，每个梯度收集10个馏分，共70个馏分，每个馏分为5mL，所得馏分通过薄层层析分析将相似组分合并，共得到19个组分、分别为E1-E19。(4)在石油醚-乙酸乙酯(3:1)洗脱部分得到组分E11(0.008g)。对此进行反相C18柱层析，采用20％、40％、60％和80％的甲醇水溶液作为流动相，分别得到组分E11-1～E11-4。(5)将E11-4组分过SephadexLH-20凝胶柱色谱，以甲醇：氯仿＝4:1作为流动相，得到单体化合物12(16),8(9)–二环氧–18(4→3)–移–3,5,12–松香烷三烯–7,11,14–三酮，1mg，得率0.01％。实施例3二萜单体化合物结构鉴定由图1～图6为所述单体化合物的核磁共振波谱图可知，1H–NMR(CDCl3)谱中显示分子中含有4个甲基氢原子的吸收峰:δH1.49(3H,d,J＝13.0,H–17),1.39(3H,s,Me–18),1.79(3H,s,Me–19),1.89(3H,s,Me–20)；2个次甲基上的氢原子:δH5.93(1H,s,H–6),5.10(1H,m,H–16)；6个亚甲基质子δH3.16(1H,dd,J＝15.4,9.6,H–15α),2.70(1H,dd,J＝15.4,7.2,H–15β),1.91(1H,m,H–1α),2.89(1H,dd,J＝15.3,7.3,H–1β),1.91(1H,m,H–2α),2.26(1H,m,H–2β)。13C–NMR谱＝中显示分子中含有20个碳原子,结合DEPT谱可知分子中含有4个CH3,3个饱和CH2,2个次甲基,11个季碳；碳谱中显示分子中含有3个羰基碳原子δC188.8,182.9,181.7；3个双键δC142.3,123.9,157.3,115.8(CH),157.6,12本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种式(I)所示的松香烷型二萜化合物：

【技术特征摘要】
1.一种式(I)所示的松香烷型二萜化合物：。2.一种如权利要求1所述式(I)所示的松香烷型二萜化合物的制备方法，其特征在于所述化合物(I)从长叶大青枝条碎片中利用乙醇为提取溶剂提取获得。3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于所述提取是将长叶大青枝条碎片在乙醇溶剂中以回流温度提取。4.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于所述方法按如下步骤进行：(1)以干燥的长叶大青枝条碎片为原料，用90％-95％的乙醇水溶液加热回流提取，提取完毕，合并提取液减压浓缩后得浸膏。(2)将步骤(1)所得浸膏加水混合成悬浊液后，用乙酸乙酯萃取，合并萃取液，得到乙酸乙酯萃取物。(3)取步骤(2)所得乙酸乙酯萃取物，进行硅胶柱层析，以石油醚-乙酸乙酯作为洗脱剂进行梯度洗脱，收集洗脱液并通过薄层层析分析，对相似组分进行合并，得到不同的组分。(4)将步骤(3)所得不同的组分进行反相C18柱层析，分别采用20％、40％、60％和80％的甲醇水溶液作为流动相，依次收集相应...

【专利技术属性】
技术研发人员：许明峰，白雪莲，石陆娥，刘奇，
申请(专利权)人：杭州师范大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33