The invention relates to a method for preparing RGD peptide modified hyperbranched polyethyleneimine based on nano probes include: (1) preparation of RGD PEG COOH; (2) preparation of PEI DTPA; (3) preparation of PEI DTPA mPEG; (4) preparation of PEI DTPA mPEG (PEG RGD); (5) preparation of RGD Au PENPs; (6) preparation of RGD
【技术实现步骤摘要】
一种基于RGD多肽修饰的超支化聚乙烯亚胺纳米探针的制备方法
本专利技术属于纳米造影剂领域,特别涉及一种基于RGD多肽修饰的超支化聚乙烯亚胺纳米探针的制备方法。
技术介绍
ComputerTomography(CT)成像技术具有较高的空间分辨率,较短的图像采集时间,并能提供高分辨的3D断层信息,但是自身存在软组织分辨率差、较高的放射性辐射等缺陷。PositionEmissionTomography(PET)和Single-PhotonEmissionComputedTomography(SPECT)成像可获得肿瘤部位的生理生化信息,但是对于肿瘤部位的解剖信息很难获得较高的分辨率。鉴于每种成像模式都有其自身不足之处,单一的成像模式已经不能满足对疾病精准诊断的需要。因此,结合两种或者两种以上的成像模式,实现功能成像(PET或者SPECT)与结构成像(CT或者MagneticResonanceImaging(MRI))的有机结合是目前疾病诊断的发展趋势之一。发展一种新型的、多功能的SPECT/CT双模态成像造影剂,可以结合CT和SPECT两种成像技术各自的优点从而提高疾病诊断的准确度,同时可以克服传统医用CT或SPECT成像造影剂的缺陷,如成像时间短、存在肾脏毒性等。这对于疾病的诊断尤其是癌症的早期诊断具有重大意义,它一方面减少造影剂对病患的毒副作用,另一方面可以提供更加全面而清晰的诊断信息。超支化聚乙烯亚胺(PEI)是一种分子量较大的支链状PEI,内部有疏水的空腔,可以用来稳定金属或金属氧化物、药物分子等(Sunetal.,Chem.Commun.2011,47 ...
【技术保护点】
一种基于RGD多肽修饰的超支化聚乙烯亚胺纳米探针的制备方法,包括:(1)在一端氨基、另一端羧基的聚乙二醇NH2‑PEG‑COOH溶液中加入6‑(马来酰亚胺基)己酸琥珀酰亚胺酯溶液中反应8‑12h,再把RGD多肽溶液逐滴加入已活化的NH2‑PEG‑COOH中,搅拌反应2‑4d,透析,冷冻干燥,即得RGD‑PEG‑COOH;(2)在PEI溶液中逐滴加入二乙烯五乙酸盐DTPA溶液,搅拌反应20‑30h透析,冷冻干燥,即得PEI‑DTPA;(3)在羧基化聚乙二醇单甲醚mPEG‑COOH溶液中加入1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐EDC·HCl溶液,室温搅拌15‑30min,然后加入N‑羟基丁二酰亚胺NHS溶液继续搅拌2‑3h,得到混合溶液;随后将混合溶液逐滴加入PEI‑DTPA溶液中,搅拌反应2‑4d,透析,冷冻干燥,即得PEI‑DTPA‑mPEG;(4)在RGD‑PEG‑COOH溶液中加入EDC·HCl溶液,室温搅拌15‑30min,然后加入NHS溶液继续搅拌2‑3h,得到混合溶液;将混合溶液逐滴加入PEI‑DTPA‑mPEG溶液中,搅拌反应2‑4d,溶液,透析,冷冻干燥,得到 ...
【技术特征摘要】
1.一种基于RGD多肽修饰的超支化聚乙烯亚胺纳米探针的制备方法,包括:(1)在一端氨基、另一端羧基的聚乙二醇NH2-PEG-COOH溶液中加入6-(马来酰亚胺基)己酸琥珀酰亚胺酯溶液中反应8-12h,再把RGD多肽溶液逐滴加入已活化的NH2-PEG-COOH中,搅拌反应2-4d,透析,冷冻干燥,即得RGD-PEG-COOH;(2)在PEI溶液中逐滴加入二乙烯五乙酸盐DTPA溶液,搅拌反应20-30h透析,冷冻干燥,即得PEI-DTPA;(3)在羧基化聚乙二醇单甲醚mPEG-COOH溶液中加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐EDC·HCl溶液,室温搅拌15-30min,然后加入N-羟基丁二酰亚胺NHS溶液继续搅拌2-3h,得到混合溶液;随后将混合溶液逐滴加入PEI-DTPA溶液中,搅拌反应2-4d,透析,冷冻干燥,即得PEI-DTPA-mPEG;(4)在RGD-PEG-COOH溶液中加入EDC·HCl溶液,室温搅拌15-30min,然后加入NHS溶液继续搅拌2-3h,得到混合溶液;将混合溶液逐滴加入PEI-DTPA-mPEG溶液中,搅拌反应2-4d,溶液,透析,冷冻干燥,得到RGD靶向的功能化聚乙烯亚胺分子,标记为PEI-DTPA-mPEG-(PEG-RGD);(5)在PEI-DTPA-mPEG-(PEG-RGD)水溶液中加入HAuCl4溶液搅拌15-30min,再加入NaBH4溶液,继续搅拌2-4h;然后加入三乙胺N(C2H5)3搅拌20-40min,再加入乙酸酐Ac2O搅拌反应20-30h,透析,冷冻干燥,即得RGD多肽修饰的金纳米颗粒,标记为RGD-AuPENPs;(6)将RGD-AuPENPs溶液中加入SnCl2溶液搅拌5-10min,然后再加入无菌放射性高鍀酸盐溶液并混合反应5-10min,纯化分离,得到螯合核素99mTc的金纳米颗粒,标记为RGD-99mTc@AuPENPs,即为RGD多肽修饰的超支化聚乙烯亚胺纳米探针。2.根据权利要求1所述的一种基于RGD多肽修饰的超支化聚乙烯亚胺纳米探针的制备方法,其特征在于:所述步骤(1)中的RGD与NH2-PEG-COOH的摩尔比为1:1;6-(马来酰亚胺基)己酸琥珀酰亚胺酯与NH2-PEG-COOH的摩尔比为1:1;RGD的分子量为706.67g/mol,浓度为4-6mg/mL,6-(马来酰亚胺基)己酸琥珀酰亚胺酯的浓度为6-10mg/mL,NH2-PEG-COOH的分子量为2000g/mol,浓度为3-5mg/mL。3.根据权利要求1所述的一种基于RGD多肽修饰的超支化聚乙烯亚胺纳米探针的制备方法,其特征在于:所述步骤(2)中的DTPA与PEI...
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