一种猪胆汁中鹅去氧胆酸的分离纯化方法技术

一种猪胆汁中鹅去氧胆酸的分离纯化方法,它是按以下步骤制备：一、猪胆汁皂化；二、氧化脱色；三、成镁盐；四、酸化；五、除杂；六、再酸化；七、结晶；八、干燥即得鹅去氧胆酸成品。本发明专利技术的优点在于：1、收率高3%‑5%，传统方法1%‑3%；2、高熔点160‑170℃，传统方法熔点130‑140℃；3、不使用苯和甲苯有毒有机溶剂，乙酸乙酯用量少，传统方法用量大；4、产品外观为白色或类白色的粉末，传统方法淡黄色或黄色的粉末。本发明专利技术具有操作简单，工艺流程短，减少有机试剂用量，节约成本，安全环保等特点。

Isolation and purification of ursodeoxycholic acid from pig bile

The methods of separation and purification of pig bile chenodeoxycholic acid, which is prepared by the following steps: first, pig bile saponification; two, Oxidation Decoloration; three, magnesium salt; four, five, acidification; impurity; six, seven, acidification; crystallization; eight, drying to obtain the finished product of chenodeoxycholic acid. The invention has the advantages of high yield, 1 3% 5%, 1% 3% traditional methods; 2, 160 high melting point of 170 DEG C, the traditional method of melting 130 140 DEG C; 3, do not use benzene and toluene toxic organic solvent, less amount of ethyl acetate, the traditional method of large amount; 4, the product appearance is white or kind of white powder, the traditional method of light yellow or yellow powder. The invention has the advantages of simple operation, short technological process, reducing the dosage of organic reagent, saving cost, safety and environmental protection, etc..

【技术实现步骤摘要】
一种猪胆汁中鹅去氧胆酸的分离纯化方法
本专利技术属于天然产物分离提取
，具体说是涉及一种猪胆汁中鹅去氧胆酸的分离纯化方法。
技术介绍
鹅去氧胆酸（3α，7α-二羟基-5β-胆烷酸）ChenodeoxycholicAcid（简称CDCA），1824年首次发现在鹅胆汁中，1924年，wieland和windaus在不同的胆汁中发现了鹅去氧胆酸，它是一种最易溶的胆汁酸，被命名为鹅去氧胆酸，CDCA是存在于动物胆汁中的一种生化物质。鹅去氧胆酸具有平喘化痰镇咳和抗炎的作用，其利胆作用尤为显著，它是通过减少胆固醇吸收、合成、使胆汁内胆固醇下降，从而阻抑胆固醇结石形成和促其溶解，并且能有效降低胆固醇饱和度。1、治疗胆固醇型结石。CDCA能够抑制HMG-COA还原酶的活性；刺激胆酸合成限速酶的活性，从而扩大胆汁酸池以利于胆固醇以微胶粒状态溶解。CDCA的最佳疗效见于治疗后2年，40％的结石可溶解。2、抗菌作用。CDCA的体外抗菌实验结果表明CDCA对革兰氏阳性菌、金黄色葡萄球菌却有显著的抗菌作用。3、抗炎作用。CDCA能极显著地抑制二甲苯所致的小鼠耳壳炎症并增强小鼠皮肤毛细血管的通透性，对小鼠棉球肉芽肿、大鼠角叉菜胶性足拓肿胀和甲醛性足肿胀均有明显的抑制作用，且作用与其剂量呈现正相关。4、解热作用。CDCA分别按0.159/Kg和0.2259/Kg的剂量给大鼠灌胃，连续给药3天；然后测定其对大肠杆菌内毒素和蛋自陈所致大鼠发垫体温的影响。实验结果表明高剂量的CDCA对大肠杆菌内毒素致热后15h内大鼠的发热体温有显著抑制作用，低剂量的CDCA则作用不明显。鹅去氧胆酸除本身的药用外，还可作为制取熊去氧胆酸（3α，7β－二羟基－5β－胆烷酸，Ursodeoxycholicacid简称UDCA）的原料。熊去氧胆酸是名贵中药熊胆所含的主要有效成分，在临床上用于治疗各种胆疾及消化道疾病。目前，传统名贵药用动物胆汁非常紧缺，寻找有开发前景的药用动物胆汁和人工合成品成为热门研究项目。进一步发掘动物胆汁的药用价值，分析动物胆汁的药用成分并揭示其作用机理，使动物胆汁得到综合开发利用。因此，制备鹅去氧胆酸对于进一步制备熊去氧胆酸也具有重要的意义。目前，鹅去氧胆酸有以下两种方式获得，一是从牛羊胆汁中提取胆酸，再以胆酸为原料进行化学合成鹅去氧胆酸；二是从家禽胆汁中直接提取鹅去氧胆酸。以牛羊胆汁为起始原料进行化学合成鹅去氧胆酸，其工艺周期长、成本高；以家禽胆汁为原料直接提取鹅去氧胆酸，由于家禽胆个小，不易收集，收率较低，原料来源受限制，成本也较高。以家禽胆汁为原料提取CDCA时，主要是利用钡盐和钙盐沉淀法，利用钡盐直接对人类赖以生存的自然环境带来严重的威胁，利用钙盐则使用大量的水，极大的浪费水资源，且两种提取方法所得产品含量较低，一般均低于90%。以猪胆汁为原料提取CDCA时，主要有以下2种方法：1、酯化酰化苯或甲苯法，是利用猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸甲酯化后在苯或甲苯中的不同溶解度进行分离，甲酯化后再进行乙酰化利用鹅去氧胆酸和猪胆酸在石油醚中的溶解度不同，得到鹅去氧胆酸酯化酰化物，再进行水解酸化处理，得到鹅去氧胆酸粗品；2、钙盐沉淀树脂法，胆汁经过皂化后，加入氯化钙进行总胆酸钙盐沉淀，沉淀用水溶解过滤，酸化后粗品进行上大孔树脂吸附洗脱再吸附再洗脱，本法需要用大量的水，极大浪费水资源，且一次性投入较大、生产周期长。CDCA主要由家禽的胆汁或动物胆汁中(猪胆汁)提取，过去的提取方法由于涉及有毒化学品，或使用大量不安全有机溶剂，不能适应现代工业的要求，而且制备的CDCA纯度低，成本高。针对目前现有的提取方法中存在的问题，本专利技术的目的是提供一种工艺简单，生产成本低，操作简单，产品质量好，纯度高，对环境污染小的提取方法。
技术实现思路
本专利技术的目的在于针对以上技术的不足，解决目前猪胆汁中鹅去氧胆酸的提取过程中使用的苯/甲苯的环境污染和钙盐法水资源浪费的问题，提供一种采用镁盐对猪胆汁的鹅去氧胆酸的分离提纯，该方法具有收率高，纯度高，有机溶剂用量少，对环境污染小的特点。为达到上述目的，本专利技术采用的技术方案如下：一种猪胆汁中鹅去氧胆酸的分离纯化方法，其特征在于：它是按以下步骤制备：一、猪胆汁皂化:秤取提取胆红素后猪胆汁、加碱使溶液中碱浓度为12%，加热至沸腾计时，皂化20-24h，静置沉淀；二、氧化脱色：皂化结束虹吸上层清液，下层胶状物沉淀，加水至原体积，加猪胆汁重量1.0%-1.5%的双氧水，搅拌反应1-2h，过滤，收集滤液；三、成镁盐：先将上述滤液用稀酸调至pH6-7,加热至70-80℃使析出的胆酸至完全溶解，再用弱碱溶液调pH10-11，降温至55-65℃时，边搅拌边加入镁盐溶液，经TLC检测无猪去氧胆酸斑点时，停止加入，过滤，收集滤液；四、酸化：向上述滤液中加入稀酸酸化，过滤，收集滤饼，即得粗品鹅去氧胆酸；五、除杂：将鹅去氧胆酸粗品溶解在醇溶液中，并调pH9-10，加入8-10倍粗品鹅去氧胆酸重量的石油醚，搅拌15-30min，静置分层，虹吸上层石油醚层，向下层再加石油醚，搅拌15min，静置分层，虹吸上层石油醚层，下层醇层浓缩回收醇，得浓缩液；六、再酸化：向上述浓缩液中加入稀酸进行酸化、析出鹅去氧胆酸，过滤，水洗至中性，即得鹅去氧胆酸粗品；七、结晶：称重鹅去氧胆酸粗品，加8-10倍量的乙酸乙酯加热使完全溶解，降温至30-35℃，再加弱碱溶液洗涤乙酸乙酯，使碱溶液的pH6-7，虹吸乙酸乙酯层，浓缩乙酸乙酯至原重量的一半时停止浓缩，降温冷却结晶8-12h，离心，收集滤固，即得鹅去氧胆酸精品；八、干燥：将鹅去氧胆酸精品放入干燥箱内进行干燥，设定干燥温度为60-70℃，干燥2h，再设定干燥温度为90-100℃，干燥2h，即得鹅去氧胆酸成品。所述的一种猪胆汁中鹅去氧胆酸的分离纯化方法，其特征在于：步骤二中加入的双氧水的浓度为25%-36%。所述的一种猪胆汁中鹅去氧胆酸的分离纯化方法，其特征在于：步骤三中加入的弱碱为碳酸钙、碳酸氢钙、乙酸钠中的一种。所述的一种猪胆汁中鹅去氧胆酸的分离纯化方法，其特征在于：步骤三中加入的镁盐为碳酸镁、氯化镁、硫酸镁中的一种。所述的一种猪胆汁中鹅去氧胆酸的分离纯化方法，其特征在于：步骤七中加入的弱碱为氨水、碳酸钠、碳酸氢钠中的一种。所述的一种猪胆汁中鹅去氧胆酸的分离纯化方法，其特征在于：步骤三、四、六中加入的稀酸为5%-15%的硫酸溶液。本专利技术将镁盐利用到鹅去氧胆酸的分离制备过程中，先利用镁盐将猪胆汁中的猪去氧胆酸进行完全的分离，双氧水将其猪胆汁中的色素、蛋白质等颜色较深的杂质氧化后除去，利用石油醚萃取鹅去氧胆酸中的固醇类的杂质，利用弱碱水洗涤乙酯除去鹅去氧胆酸中的猪胆酸杂质，与现有技术相比，本专利技术的有益效果在于：1、收率高3%-5%（传统方法1%-3%），2、高熔点160-170℃（传统方法熔点130-140℃），高纯度经HPLC检测含量98%以上（传统方法含量85%-90%），3、不使用苯和甲苯有毒有机溶剂，有机溶剂乙酸乙酯用量少（传统方法用量大）4、产品外观为白色或类白色的粉末（传统方法淡黄色或黄色的粉末）。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术做进一步详细说明。实施例1一、猪胆汁皂化:秤取提取胆红素后猪胆汁2kg、加本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种猪胆汁中鹅去氧胆酸的分离纯化方法，其特征在于：它是按以下步骤制备：一、猪胆汁皂化: 秤取提取胆红素后猪胆汁、加碱使溶液中碱浓度为12%，加热至沸腾计时，皂化20‑24h，静置沉淀；二、氧化脱色：皂化结束虹吸上层清液，下层胶状物沉淀，加水至原体积，加猪胆汁重量1.0%‑1.5%的双氧水，搅拌反应1‑2h，过滤，收集滤液；三、成镁盐：将上述滤液先用稀酸调至pH6‑7,加热至70‑80℃使析出的胆酸至完全溶解，再用弱碱溶液调pH10‑11，降温至55‑65℃时，边搅拌边加入镁盐溶液，经TLC检测无猪去氧胆酸斑点时，停止加入，过滤，收集滤液；四、酸化：向上述滤液中加入稀酸酸化，过滤，收集滤饼，即得粗品鹅去氧胆酸；五、除杂：将鹅去氧胆酸粗品溶解在醇溶液中，并调pH9‑10，加入8‑10倍粗品鹅去氧胆酸重量的石油醚 ，搅拌15‑30min，静置分层，虹吸上层石油醚层，向下层再加石油醚，搅拌15min，静置分层，虹吸上层石油醚层，下层醇层浓缩回收醇，得浓缩液；六、再酸化：向上述浓缩液中加入稀酸进行酸化、析出鹅去氧胆酸，过滤，水洗至中性，即得鹅去氧胆酸粗品；七、结晶：称重鹅去氧胆酸粗品，加8‑10倍量的乙酸乙酯加热使完全溶解，降温至30‑35℃，再加弱碱溶液洗涤乙酸乙酯，使碱溶液的pH6‑7，虹吸乙酸乙酯层，浓缩乙酸乙酯至原重量的一半时停止浓缩，降温冷却结晶8‑12h，离心，收集滤固，即得鹅去氧胆酸精品；八、干燥：将鹅去氧胆酸精品放入干燥箱内进行干燥，设定干燥温度为60‑70℃，干燥2h，再设定干燥温度为90‑100℃，干燥2h，即得鹅去氧胆酸成品。...

【技术特征摘要】
1.一种猪胆汁中鹅去氧胆酸的分离纯化方法，其特征在于：它是按以下步骤制备：一、猪胆汁皂化:秤取提取胆红素后猪胆汁、加碱使溶液中碱浓度为12%，加热至沸腾计时，皂化20-24h，静置沉淀；二、氧化脱色：皂化结束虹吸上层清液，下层胶状物沉淀，加水至原体积，加猪胆汁重量1.0%-1.5%的双氧水，搅拌反应1-2h，过滤，收集滤液；三、成镁盐：将上述滤液先用稀酸调至pH6-7,加热至70-80℃使析出的胆酸至完全溶解，再用弱碱溶液调pH10-11，降温至55-65℃时，边搅拌边加入镁盐溶液，经TLC检测无猪去氧胆酸斑点时，停止加入，过滤，收集滤液；四、酸化：向上述滤液中加入稀酸酸化，过滤，收集滤饼，即得粗品鹅去氧胆酸；五、除杂：将鹅去氧胆酸粗品溶解在醇溶液中，并调pH9-10，加入8-10倍粗品鹅去氧胆酸重量的石油醚，搅拌15-30min，静置分层，虹吸上层石油醚层，向下层再加石油醚，搅拌15min，静置分层，虹吸上层石油醚层，下层醇层浓缩回收醇，得浓缩液；六、再酸化：向上述浓缩液中加入稀酸进行酸化、析出鹅去氧胆酸，过滤，水洗至中性，即得鹅去氧胆酸粗品；七、结晶：称重鹅去氧胆酸粗品，加...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭庆，徐宾朋，赵厚发，周为文，赵露，
申请(专利权)人：赵厚发，
类型：发明
国别省市：安徽,34