MicroRNA376a‑5p在制备治疗急性脑缺血和脑缺血再灌注损伤药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种miR‑376a‑5p在制备治疗急性脑缺血和脑缺血再灌注损伤药物中的应用，所述miR‑376a‑5p具有如SEQ ID No:1和SEQ ID No:2所示的碱基序列。本发明专利技术发现miR‑376a‑5p是急性缺血性卒中神经保护的潜在靶点，上调miR‑376a‑5p是改善急性脑缺血血管再通治疗效果的一种神经保护新策略，本发明专利技术为miR‑376a‑5p治疗急性脑缺血和脑缺血再灌注损伤提供了新的方法，将成为治疗急性缺血性卒中血管内介入再通后再灌注损伤的创新性手段。

【技术实现步骤摘要】
MicroRNA376a-5p在制备治疗急性脑缺血和脑缺血再灌注损伤药物中的应用
本专利技术属于体外核酸检测
，具体为microRNA376a-5p在制备治疗急性脑缺血和脑缺血再灌注损伤药物中的应用。
技术介绍
脑卒中对中国人群健康的危害性日益突出，我国人口健康领域正面临着卒中带来的严重挑战，解决卒中的防治问题是实现改善我国人口健康水平战略目标的国家重大需求。静脉内注射组织型纤溶酶原激活物(tPA)进行药物溶栓治疗是急性缺血性卒中的一线治疗，但是治疗时间窗局限，血管再通率较低，受益患者人群较少。采用血管内技术进行介入取栓治疗是近年来脑卒中治疗领域的一个重要进步，目前美国、欧洲和中国等多个国家学会都以最高等级推荐血管内介入支架取栓技术应用于颅内大血管闭塞引起的急性缺血性卒中的治疗。血管内介入取栓治疗可以显著提高颅内大血管闭塞的再通率，但是获得满意血管再通的急性缺血性卒中患者并不是最终都可以获得良好的临床治疗效果。从脑血管发生闭塞至血管再通的时间延迟和再灌注治疗后导致的颅内出血转化及缺血再灌注损伤是急性缺血性卒中介入取栓治疗后“无效血管再通”的重要原因。2015年NewEnglandJournalofMedicine杂志连续发表的5项临床研究结果，显著降低了介入取栓治疗的血管再通时间和症状性颅内出血转化，但是血管内介入机械取栓治疗后仍然有较高的“无效血管再通”。血管再通治疗后导致的再灌注损伤和颅内出血转化进一步加重了脑损伤，导致部分血管再通的卒中患者临床预后差。血管内介入支架取栓再通治疗对颅内闭塞大血管产生快速再通，导致缺血的血管床瞬间再灌注，但是机械再通治疗后引起缺血再灌注损伤和颅内出血转化的发生机制尚未阐明。研究发现治疗前血液标记物、神经影像和预测评分的评估有助于制定介入取栓再通治疗的决策，也可判断血管再通治疗后颅内出血转化的风险。但是，目前尚无可靠的方法预测介入取栓治疗后再灌注损伤和颅内出血转化的发生。此外，尽管经过多年的持续研究，但目前临床上尚缺乏有效治疗脑缺血和减轻缺血再灌注损伤的神经保护药物。通过开展并阐明血管内介入取栓治疗后再灌注损伤和颅内出血转化的发生机制、早期预警和防治措施，将有望提高急性缺血性卒中的血管再通治疗效果。MicroRNAs是一类内源性非编码单链小分子RNA，长约20-24个核苷酸，通过与靶基因mRNA分子的非翻译区互补配对，降解mRNA或抑制mRNA翻译，从而参与靶基因转录后的表达调控。一个microRNA通常可调节多个靶基因功能，一个基因也可能受多个microRNA调节。MicroRNA和蛋白质编码基因之间的相互作用组成复杂的调节网络。MicroRNAs与神经细胞分化、轴突形成和突触可塑性有关。以往研究发现脑内神经元富含microRNA-376a，过表达microRNA-376a促进了神经干细胞向神经元的分化(A,RoshanR,MoisoiN,etal.Comprehensiveexpressionanalysesofneuralcell-type-specificmiRNAsidentifynewdeterminantsofthespecificationandmaintenanceofneuronalphenotypes.JNeurosci.2013；33(12):5127-5137)。MicroRNA-376a与脑胶质瘤的关系也有报道，提示microRNA-376a上调表达可促进脑胶质瘤的细胞迁移和侵袭(ChoudhuryY,TayFC,LamDH,etal.Attenuatedadenosine-to-inosineeditingofmicroRNA-376a*promotesinvasivenessofglioblastomacells.JClinInvest.2012；122(11):4059-4076.)。最近一项研究发现，脑胶质瘤患者血清中microRNA-376家族(microRNA-376a，microRNA-376b和microRNA-376c)的表达水平明显低于健康对照组，其下调表达与胶质瘤进展和预后差显著相关。提示血液中的microRNA-376家族可作为脑胶质瘤患者诊断和预后的潜在非侵入性生物标志物(HuangQ,WangC,HouZ,etal.SerummicroRNA-376familyasdiagnosticandprognosticmarkersinhumangliomas.CancerBiomark.2017Feb3[Epubaheadofprint])。研究发现，microRNAs参与缺血性卒中和脑缺血再灌注损伤的发生和发展。已有报道对大脑中动脉闭塞(MCAO)诱导的急性脑缺血小鼠模型进行microRNAs表达谱分析。例如，在急性缺血性卒中小鼠模型中，给予外源性microRNA-9能显著改善神经功能评分，减少脑梗塞体积和脑水肿。脑梗塞周围区microRNA-424在缺血再灌注1小时和4小时明显上调，24小时明显下调，缺血前脑室给予microRNA-424激动剂对脑缺血再灌注损伤起神经保护作用。但是，microRNA-376与脑卒中的关系与作为神经保护的潜在治疗靶点，尚未见明确报道microRNA-376位于14q32染色体位点，已有专利报道提示14q32位点的几个microRNAs在心脑血管发育和重构方面起着一定作用。例如在动物模型上静脉注射应用microRNA-329、microRNA-487b、microRNA-494或者microRNA-495抑制剂能恢复缺血肢体的血流，减少动脉粥样硬化斑块形成，促进血管生成。但是，没有报道干预microRNA-376与上述情况的关系。
技术实现思路
基于以往研究和报道，为了克服上述现有技术的缺陷，本专利技术提供了一种microRNA(miR)，即miR-376a-5p在制备治疗急性脑缺血和脑缺血再灌注损伤药物中的应用。为了实现上述专利技术目的，本专利技术采取了以下技术方案：miR-376a-5p在制备治疗急性脑缺血和脑缺血再灌注损伤药物中的应用，所述miR-376a-5p具有如SEQIDNo:1和SEQIDNo:2所示的碱基序列。本专利技术是基于miR-376a-5p在急性脑缺血和脑缺血再灌注动物模型的脑组织和血液中的下调表达，且miR-376a-5p靶基因NADPH氧化酶(NOX)4和Caspase-3在上述动物模型脑组织中上调表达而做出的，与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：1、本专利技术证实了NOX4是miR-376a-5p的直接靶基因；2、大鼠脑缺血再灌注模型中，血管内机械再通前和机械再通后静脉内给予miR-376a-5p激动剂，均抑制了大鼠脑组织和血液中miR-376a-5p的下调表达，减轻了急性脑缺血和脑缺血再灌注后的早期脑水肿形成和血脑屏障破坏，减小了脑梗塞体积，降低了脑缺血和缺血再灌注后的死亡率和神经功能障碍；3、外源性给予miR-376a-5p激动剂抑制了急性脑缺血和缺血再灌注后脑组织NOX4和Caspase-3基因和蛋白水平的上调表达，并通过调控氧化应激和细胞凋亡机制起到神经保护作用；4、miR-376a-5p是急性缺血性卒中神经保护的潜在靶点，上调miR-376a-5p是本文档来自技高网...

【技术保护点】
miR‑376a‑5p在制备治疗急性脑缺血和脑缺血再灌注损伤药物中的应用，其特征在于，所述miR‑376a‑5p具有如SEQ ID No:1和SEQ ID No:2所示的碱基序列。

【技术特征摘要】
1.miR-376a-5p在制备治疗急性脑缺血和脑缺血再灌注损伤药物中的应用，其特征在于，所述miR-376a-5p具有如SEQIDNo:1...

【专利技术属性】
技术研发人员：石忠松，陀泳华，刘忠，
申请(专利权)人：中山大学附属第一医院，
类型：发明
国别省市：广东,44