The invention discloses a separation and extraction method of soft shelled turtle blood sugar peptide, which is characterized by the acquisition of turtle blood dialysis and centrifugation, precipitation and chromatographic separation, extraction of two kinds of bioactive polysaccharide peptide, identification and biological activity test showed strong antitumor activity of the polysaccharide peptide specific extraction. And purification include: crude polysaccharide conjugates extracted and refined polysaccharide preparation, sugar peptide preparation and polysaccharide peptide purification steps. Compared with the prior art, the invention has the advantages of rich raw materials, simple extraction process, convenient operation, high output value, and the product has anti-tumor activity, and is a promising drug or health-care product.
【技术实现步骤摘要】
一种甲鱼血糖肽的分离提取方法
本专利技术涉及生物工程
,具体地说是一种具有抗肿瘤活性的甲鱼血糖肽的分离提取方法。
技术介绍
中华鳖(俗称甲鱼)是我国的一种传统动物中药,也是我国近年来发展起来的一种重要的特种经济动物。由于其丰富的营养价值和较高的药用价值倍受人们的青睐,其生化成分含胶原蛋白、维生素D、脂肪及碘等,具有滋阴清热、平肝益肾、破结软坚及消淤功能。鳖甲、头、肉、血、胆等都可入药。国内外对龟鳖类动物的有效成分所开展的研究报道很少,有文献报道从鳖甲或者甲鱼肉中分离到粗多糖,具有促抗体生成、抗疲劳作用[金妙仁,王水,朱海良等.氨基酸和生物资源.2005,27(2):31-32]。还具有抗肿瘤作用,对肿瘤细胞S-180有抑制作用[张娅婕,凌笑梅,甘振威等.长春中医学院学报.2004,20(2):38-39]。此外,鳖血提取物在治疗免疫性疾病(如AIDS和肝炎等)中,具有一定的辅助疗效,表明鳖血中的某些成分具有一定的免疫调节作用(王志镛.甲鱼血的用途:CN,CN1282586A[P].2001.)。现有技术只是从鳖甲或甲鱼肉中分离得到具有抗肿瘤作用的粗多糖,通常将甲鱼血作为废弃物处理,针对此现状,申请人对甲鱼血进行系统化研究开发,发现其中活性糖肽是很有应用前景的药物或保健品候选物。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种甲鱼血糖肽的分离提取方法,采用膜分离及生化技术对甲鱼血进行透析、离心、沉淀以及色谱分离提取活性糖肽,对其进行成分鉴定和生物活性测试,所得甲鱼血糖肽具有良好的抗肿瘤活性,原材料价廉易得,提取工艺简单,生产成本低,产出价值高,是一种很有应用前景 ...
【技术保护点】
一种甲鱼血糖肽的分离提取方法,其特征在于采集的甲鱼血经透析、离心、沉淀以及色谱分离,提取得到两种单一组分的活性多糖肽,对其进行成分鉴定和生物活性测试具有较强的抗肿瘤活性,多糖肽的具体提取和纯化按下述步骤进行:a、粗多糖缀合物的提取将采集的甲鱼血在0~4℃温度下透析1~3天,在4000rpm离心速度下得到的上清液与乙醇、丙酮或三氯乙醇按1:1~10体积比进行沉淀分离,分离的沉淀物按1:2~10体积比溶于蒸馏水,在0~4℃温度下透析1~5天,然后经冷冻干燥得絮状的粗多糖缀合物为S‑1;b、精多糖的制取将上述粗多糖缀合物S‑1按1g:1~5ml重量体积比溶于蒸馏水,在12000rpm离心速度下得到的上清液采用阴离子交换色谱柱分离,分离依次用蒸馏水和0.1~0.5mol/L碳酸氢钠溶液或0.1~1.0mol/L氯化钠溶液为洗脱剂进行淋洗,分离后的组分经冷冻干燥得产物为甲鱼血精多糖S‑2,所述阴离子交换色谱柱的填料为DEAE‑Cellulose、DEAE‑Sephadex或DEAE‑Saphrose;c、粗糖肽的制取将上述甲鱼血精多糖S‑2按1g:1~5ml重量体积比溶于蒸馏水,在12000rp ...
【技术特征摘要】
1.一种甲鱼血糖肽的分离提取方法,其特征在于采集的甲鱼血经透析、离心、沉淀以及色谱分离,提取得到两种单一组分的活性多糖肽,对其进行成分鉴定和生物活性测试具有较强的抗肿瘤活性,多糖肽的具体提取和纯化按下述步骤进行:a、粗多糖缀合物的提取将采集的甲鱼血在0~4℃温度下透析1~3天,在4000rpm离心速度下得到的上清液与乙醇、丙酮或三氯乙醇按1:1~10体积比进行沉淀分离,分离的沉淀物按1:2~10体积比溶于蒸馏水,在0~4℃温度下透析1~5天,然后经冷冻干燥得絮状的粗多糖缀合物为S-1;b、精多糖的制取将上述粗多糖缀合物S-1按1g:1~5ml重量体积比溶于蒸馏水,在12000rpm离心速度下得到的上清液采用阴离子交换色谱柱分离,分离依次用蒸馏水和0.1~0.5mol/L碳酸氢钠溶液或0.1~1.0mol/L氯化钠溶液为洗脱剂进行淋洗,分离后的组分经冷冻干燥得产物为甲鱼血精多糖S-2,所述阴离子交换色谱柱的填料为DEAE-Cellulose、DEAE-Sephadex或DEAE-Saphrose;c、粗糖肽的制取将上述甲鱼血精多糖S-2按1g:1~5ml重量体积比溶于蒸馏...
【专利技术属性】
技术研发人员:张剑波,时春娟,陈旋,丁泽坤,
申请(专利权)人:华东师范大学,
类型:发明
国别省市:上海,31
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