一种Vero细胞冻存液制造技术

本发明专利技术提供了一种Vero细胞冻存液，包括二甲基亚砜、羟乙基淀粉、葡萄糖、维生素E、20%甘露醇、丙二醇、(S)‑(‑)‑1‑(4‑氟异喹啉‑5‑基）磺酰基‑2‑甲基‑1,4‑二氮环庚烷和基础培养基。本发明专利技术所述的Vero细胞冻存液，组分合理，营养丰富，其中，20%甘露醇为渗透性保护液，而(S)‑(‑)‑1‑(4‑氟异喹啉‑5‑基)磺酰基‑2‑甲基‑1,4‑二氮环庚烷则抑制细胞活动和基因表达，维生素E的抗氧化性好，在保证休眠Vero细胞的营养的同时还可以显著减少对细胞的损伤，提高冻存细胞的存活率，并且在增殖方面也保持很好的状态。

A Vero cell cryopreservation solution

The present invention provides a freezing medium of Vero cells, including two dimethyl sulfoxide, hydroxyethyl starch, glucose, vitamin E, 20% mannitol, propylene glycol, (S) () 1 (4 fluorine 5 isoquinoline group) 2 methyl sulfonyl 1,4 n two cycloheptane and the basal medium. Freezing medium of the invention of the Vero cell, reasonable components, nutrient rich, among them, 20% mannitol as osmotic protection liquid, and (S) () 1 (4 fluorine 5 isoquinoline group) 2 methyl sulfonyl 1,4 cycloheptane is two N inhibition of cell activity and gene expression of antioxidant, vitamin E, in order to ensure sleep Vero cell nutrition also can significantly reduce the damage to the cells, improve the survival rate of freezing storage cells, and also maintain good condition in proliferation.

【技术实现步骤摘要】
一种Vero细胞冻存液
本专利技术属于生物技术应用领域，具体地，涉及一种Vero细胞冻存液。
技术介绍
细胞培养是生物与健康相关研究领域的一项重要技术。随着生命科学的迅速发展，目前细胞培养已成为细胞生物学、分子生物学、遗传学和免疫学等学科研究的重要基础。为了深入探讨细胞的生长活动规律、有关疾病的病理和药物的药理（毒理）机制，开发具有不同针对性的细胞培养方法具有重要意义。Vero细胞是日本学者1962年从非洲绿猴(cercopithecusaethiopsmonkey)肾建立的猴肾细胞系。其名称的由来是取自世界语中“绿”字的VERDE前两个字母和“肾”字前两个字母合在一起，但世界语中不允许VERE存在，而需以“O”结尾，故命名为“Vero”。其第93代被带到美国NIH的过敏与传染病研究所热带病毒研究室，第113代被提交给ATCC，编号为ATCCNO.CCL-81。除了常规的科研需要之外，经过全面的研究鉴定，Vero细胞具有胞核学稳定，没有外源因子污染和致瘤性的优点，完全符合1987年WHO关于用于生物制品的传代细胞的规程要求，并已被WHO批准可用作疫苗生产的基质。于是，Vero细胞小儿麻痹灭活疫苗、小儿麻痹活疫苗、Vero细胞狂犬病疫苗相继在法国被研制出来并获批准生产。因此，Vero细胞的应用前景以及需求量极大。随着研究过程中越来越多的运用组织细胞培养增殖技术，将Vero细胞采用低温度进行长期保存数年、数十年甚至数百年，一旦需要，可随时对所保存的细胞进行复苏，恢复其完整的形态结构与生物学特性，供生命科学研究实验。
技术实现思路
专利技术目的：本专利技术提供了一种Vero细胞冻存液，专用于Vero细胞的培养。技术方案：本专利技术提供了一种Vero细胞冻存液，以重量组分计，包括以下组分：二甲基亚砜5-15份、羟乙基淀粉3-8份、葡萄糖5-15份、维生素E1-5份、20%甘露醇2-10份、丙二醇1-2份、(S)-(-)-1-(4-氟异喹啉-5-基）磺酰基-2-甲基-1,4-二氮环庚烷0.8-2份和基础培养基80-90份。本专利技术所述的Vero细胞冻存液，组分合理，营养丰富，其中，20%甘露醇为渗透性保护液，而(S)-(-)-1-(4-氟异喹啉-5-基)磺酰基-2-甲基-1,4-二氮环庚烷则抑制细胞活动和基因表达，维生素E的抗氧化性好，在保证休眠Vero细胞的营养的同时还可以显著减少对细胞的损伤，提高冻存细胞的存活率，并且在增殖方面也保持很好的状态。进一步的，上述的Vero细胞冻存液，所述基础培养基以重量组分计，包括以下组分：葡萄糖82-88份、碳酸氢钠12-25份、丙酮酸钠10-16份、人血白蛋白5-9份、氯化钾35-45份、无水硫酸镁6-10份、氯化钠70-78份、无水磷酸二氢钠10-14份、PHA-植物血球凝集素0.4-0.8份、叶酸0.3-0.5份、肌醇0.8-1.2份、烟酰胺0.3-0.6份、无水氯化钙25-35份、硝酸铁0.2-0.4份、丁二酸6-8份、丁二酸钠12-16份、D-泛酸钙0.3-0.6份、酒石酸胆碱0.6-0.8份、核黄素0.1-0.3份、盐酸硫胺0.2-0.4份、盐酸吡哆辛0.3-0.5份、还原谷胱甘肽0.2-0.6份、胆固醇2-4份、抗坏血酸磷酸酯0.6-1份、聚碳酸酯0.4-0.9份、酚红钠1-1.3份和去离子水100份。进一步的，上述的Vero细胞冻存液，所述基础培养基还包括3-8份氨基酸，所述氨基酸以重量组分计，由以下组分组成：L-盐酸精氨酸5-10份、L-盐酸胱氨酸3-8份、L-丝氨酸3-6份、甘氨酸1-5份、L-盐酸组氨酸4-6份、L-异亮氨酸8-20份、L-亮氨酸7-18份、L-盐酸赖氨酸10-20份、L-甲硫氨酸1-6份、L-苯丙氨酸2-8份、L-苏氨酸5-15份、L-色氨酸1-3份、L-酪氨酸5-9份和L-缬氨酸8-12份。进一步的，上述的Vero细胞冻存液，所述基础培养基还包括2-5份辅助因子，所述辅助因子以重量组分计，由以下组分组成：重组人碱性成纤维细胞生长因子2-10份、白介素23-8份、白介素43-6份、白介素141-5份、IFN-γ3-6份和神经白细胞素1-4份。基础培养基组分合理，营养丰富，可以提高Vero细胞冻存时的营养物质，保证冻存细胞的活性。进一步的，上述的Vero细胞冻存液，所述基础培养基还包括体积比10-30%的胎牛血清。可以根据需要，进一步增加胎牛血清，提高冻存细胞的存活率，保持细胞活性。进一步的，上述的Vero细胞冻存液，所述基础培养基以重量组分计，还包括0.006份青霉素和0.01份的链霉素。可以有效防止冻存细胞被污染。进一步的，上述的Vero细胞冻存液，所述青霉素选自10000U/ml，所述链霉素选自10000μg/ml。青霉素和链霉素活性好，效果佳。有益效果：本专利技术所述的Vero细胞冻存液，本专利技术所述的Vero细胞冻存液，组分合理，营养丰富，在保证休眠Vero细胞的营养的同时还可以显著减少对细胞的损伤，提高冻存细胞的存活率，并且在增殖方面也保持很好的状态。附图说明图1为实施例1-4细胞存活率的测定图。具体实施方式下面将通过几个具体实施例，进一步阐明本专利技术，这些实施例只是为了说明问题，并不是一种限制。实施例1一种Vero细胞冻存液，以重量组分计，包括以下组分：二甲基亚砜5份、羟乙基淀粉3份、葡萄糖5份、维生素E1份、20%甘露醇2份、丙二醇1份、(S)-(-)-1-(4-氟异喹啉-5-基）磺酰基-2-甲基-1,4-二氮环庚烷0.8份和基础培养基80份。其中，所述基础培养基以重量组分计，包括以下组分：葡萄糖82份、碳酸氢钠12份、丙酮酸钠10份、人血白蛋白5份、氯化钾35份、无水硫酸镁6份、氯化钠70份、无水磷酸二氢钠10份、PHA-植物血球凝集素0.4份、叶酸0.3份、肌醇0.8份、烟酰胺0.3份、无水氯化钙25份、硝酸铁0.2份、丁二酸6份、丁二酸钠12份、D-泛酸钙0.3份、酒石酸胆碱0.6份、核黄素0.1份、盐酸硫胺0.2份、盐酸吡哆辛0.3份、还原谷胱甘肽0.2份、胆固醇2份、抗坏血酸磷酸酯0.6份、聚碳酸酯0.4份、酚红钠1份和去离子水100份。另，所述基础培养基还包括3份氨基酸，所述氨基酸以重量组分计，由以下组分组成：L-盐酸精氨酸5份、L-盐酸胱氨酸3份、L-丝氨酸3份、甘氨酸1份、L-盐酸组氨酸4份、L-异亮氨酸8份、L-亮氨酸7份、L-盐酸赖氨酸10份、L-甲硫氨酸1份、L-苯丙氨酸2份、L-苏氨酸5份、L-色氨酸1份、L-酪氨酸5份和L-缬氨酸8份。再，所述基础培养基还包括2份辅助因子，所述辅助因子以重量组分计，由以下组分组成：重组人碱性成纤维细胞生长因子2份、白介素23份、白介素43份、白介素141份、IFN-γ3份和神经白细胞素1份。进一步的，所述基础培养基还包括体积比10%的胎牛血清。此外，所述基础培养基以重量组分计，还包括0.006份青霉素和0.01份的链霉素。并且，所述青霉素选自10000U/ml，所述链霉素选自10000μg/ml。实施例2一种Vero细胞冻存液，以重量组分计，包括以下组分：二甲基亚砜15份、羟乙基淀粉8份、葡萄糖15份、维生素E5份、20%甘露醇10份、丙二醇2份、(S)-(-)-1-(4-氟异本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种Vero细胞冻存液，其特征在于：以重量组分计，包括以下组分：二甲基亚砜5‑15份、羟乙基淀粉3‑8份、葡萄糖5‑15份、维生素E1‑5份、20%甘露醇2‑10份、丙二醇1‑2份、(S)‑(‑)‑1‑(4‑氟异喹啉‑5‑基）磺酰基‑2‑甲基‑1,4‑二氮环庚烷0.8‑2份和基础培养基80‑90份。

【技术特征摘要】
1.一种Vero细胞冻存液，其特征在于：以重量组分计，包括以下组分：二甲基亚砜5-15份、羟乙基淀粉3-8份、葡萄糖5-15份、维生素E1-5份、20%甘露醇2-10份、丙二醇1-2份、(S)-(-)-1-(4-氟异喹啉-5-基）磺酰基-2-甲基-1,4-二氮环庚烷0.8-2份和基础培养基80-90份。2.根据权利要求1所述的Vero细胞冻存液，其特征在于：所述基础培养基以重量组分计，包括以下组分：葡萄糖82-88份、碳酸氢钠12-25份、丙酮酸钠10-16份、人血白蛋白5-9份、氯化钾35-45份、无水硫酸镁6-10份、氯化钠70-78份、无水磷酸二氢钠10-14份、PHA-植物血球凝集素0.4-0.8份、叶酸0.3-0.5份、肌醇0.8-1.2份、烟酰胺0.3-0.6份、无水氯化钙25-35份、硝酸铁0.2-0.4份、丁二酸6-8份、丁二酸钠12-16份、D-泛酸钙0.3-0.6份、酒石酸胆碱0.6-0.8份、核黄素0.1-0.3份、盐酸硫胺0.2-0.4份、盐酸吡哆辛0.3-0.5份、还原谷胱甘肽0.2-0.6份、胆固醇2-4份、抗坏血酸磷酸酯0.6-1份、聚碳酸酯0.4-0.9份、酚红钠1-1.3份和去离子水100份。3.根据权利要求2所...

【专利技术属性】
技术研发人员：马荣华，
申请(专利权)人：苏州北开生化设备有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32