全局肿瘤标志物表达水平的检测方法技术

本发明专利技术涉及生物医学检测领域，具体而言，涉及一种全局肿瘤标志物表达水平的检测方法，包括以下步骤：用CD14和CD16的抗体标记出待检测对象外周血中的CD14

Detection method of global tumor marker expression level

The invention relates to the field of biomedical detection, in particular, relates to a global tumor marker expression level detection method, which comprises the following steps: detecting the object in the peripheral blood of CD14 antibody labeled with CD14 and CD16

【技术实现步骤摘要】
全局肿瘤标志物表达水平的检测方法
本专利技术涉及生物医学检测领域，具体而言，涉及一种全局肿瘤标志物表达水平的检测方法。
技术介绍
单核-巨噬细胞包括骨髓中的前单核细胞、外周血中的单核细胞、以及组织内的巨噬细胞。人类外周血细胞主要分为无核细胞(主要为血红细胞)和有核细胞(白细胞等)。单核细胞约占有核细胞总数的5％左右，由髓系造血祖细胞分化而来，是免疫系统中抗原递呈细胞(APC细胞)的重要组分。在人体外周循环血液中，白细胞分布在两个地方，即循环池和储存池，循环池就是流动血液中的白细胞，储存池就是附着在血管壁，淋巴结，骨髓等处的白细胞，暂时不参与血液循环，但储存池中的白细胞与循环池中的白细胞保持动态平衡。白细胞在人体循环系统内成熟分化并实现免疫学功能可以大致分为以下步骤：毛细血管中的单核细胞→透过血管壁进入血管外组织→发现异源性物质(细菌、病原体、肿瘤细胞等)→分化为成熟的巨噬细胞→吞噬并消化→将抗原递呈到特定的细胞表面分子上→经由淋巴管回流到外周血→完成抗原递呈激活杀伤性免疫细胞。作为机体抗击外来病原侵袭和清楚自身非正常细胞机制的哨兵，巨噬细胞是免疫系统形成免疫应答的重要环节，作用重大。在正常人体内每时每刻都有向着肿瘤化(永生化、非正常凋亡)发展的细胞产生，正常的机体免疫机制可以通过上述过程，将其及时清除。由此可见无论健康人群还是癌症患者体内巨噬细胞对于肿瘤化细胞的吞噬作用，都是无时无刻不在进行的，针对单核-巨噬细胞内肿瘤来源物质(包括蛋白质、核算、脂类等)的观测，可以为我们提供一个监控体内肿瘤发生、发展的崭新视角，其应用前景必然非常广泛。单核-巨噬细胞作为有核细胞的重要组分，实验室一般是通过其表面抗原分子CD14和CD16进行检测的，目前可以买到成熟的抗体。主要的临床应用集中在血细胞组成检测和造血系统肿瘤(如：粒/单核细胞性白血病)方面的检测中，为临床诊断提供重要参考。但将其与实体肿瘤的监控相联系，就目前专利和文献检索来看，仍然缺少足够多的系统性的相关研究，且尚未形成成熟产品，在中国大陆地区也没有相关专利授权。有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种全局肿瘤标志物表达水平的检测方法以解决上述问题。一种全局肿瘤标志物表达水平的检测方法，包括以下步骤：用CD14和CD16的抗体标记出待检测对象外周血中的CD14+CD16+细胞，去除除白细胞之外的大部分杂质后用待检测的抗肿瘤标志物X的抗体标记该肿瘤标志物；检测X+CD14+CD16+细胞与CD14+CD16+的细胞数量并统计前者与后者细胞数量的比值。目前已经确定人类外周血中存在不同亚型的单核细胞。已知的主要根据CD14和CD16抗原的表达分为4个亚型：CD14++CD16－(G1亚型)，CD14++CD16+(G2亚型)，CD14+CD16－(G3亚型)，CD14+CD16+(G4亚型)。CD14+CD16+是其中最主要的亚型之一，其比其他亚型的单核细胞具有更强的吞噬能力，因而从本专利技术的原理角度来讲，检测CD14+CD16+亚型的单核细胞更有意义。肿瘤标志物(TM)，是指特征性存在于恶性肿瘤细胞，或由恶性肿瘤细胞异常产生的物质，或是宿主对肿瘤的刺激反应而产生的物质，并能反映肿瘤发生、发展，监测肿瘤对治疗反应的一类物质。当CD14+CD16+细胞吞噬肿瘤细胞时，肿瘤标志物便会在CD14+CD16+细胞富集，而CD14+CD16+细胞是在人体内循环运动的，因而可通过检测CD14+CD16+细胞中肿瘤标志物含量来方便的表征人体内的肿瘤标志物水平。人体每天大约产生一万个癌细胞，所以肿瘤标志物的检测结果不会是“零”，而是有个正常范围。体内有癌细胞，不意味着就会得癌症，因为人体正常的免疫功能可以及时将癌细胞吞噬。另外，并不是所有的肿瘤标志物升高都是有临床意义的，通常只有升高2倍以上才被医生认为有意义。所以说肿瘤标志物的升高不一定意味着机体长了肿瘤。此外，除了肿瘤，机体的某些非肿瘤疾病也会造成肿瘤标志物的升高。例如，肝炎、肝硬化或者怀孕可导致甲胎蛋白(AFP)的升高；前列腺炎和前列腺增生可引起前列腺特异性抗原(PSA)的升高；肝功能异常会造成癌胚抗原(CEA)等标志物升高；肾功能不良会引起细胞角蛋白片段19(CYFRA21-1)和鳞状细胞癌抗原(SCC)升高。总而言之，本专利技术的目的在于提供一种检测肿瘤标志物的含量指标的方法，但是根据现有技术中的医学知识，无法推导出这种检测的直接目的是用于检测肿瘤，只能说肿瘤标志物的含量指标是检测肿瘤的一个中间参数，是肿瘤的控制检测中众多参数中的一个，与疾病的诊断或健康状况无直接必然联系。本领域技术人员可知，根据本专利技术提供的方法的原理，还可使用不同的抗体用来检测寄生虫、细菌或真菌感染及其他可被单核-巨噬细胞吞噬的抗原的全身水平的检测。优选的，如上所述的全局肿瘤标志物表达水平的检测方法，所述肿瘤标志物X为TKTL1和/或DNASE1L1。TKTL1(transketolase1)为转酮醇酶1，它、主要调节糖代谢途径中的非氧化途径，在多种肿瘤中高表达，其表达量与肿瘤的发展阶段，侵袭和转移，以及预后有密切关系。对肿瘤患者的营养搭配及后续的治疗等方面有着重要的提示作用。DNASE1L1(DeoxyribonucleaseI-Linke1)在细胞凋亡过程中起重要作用，但在肿瘤细胞中，正常的凋亡机制失效，DNASE1L1活性受到抑制，但其大量表达并在肿瘤细胞中积累。其表达量可作为鉴别肿瘤细胞或凋亡机制异常细胞的指标。优选的，如上所述的全局肿瘤标志物表达水平的检测方法，所述去除除白细胞之外的大部分杂质的方法为：用裂解液裂解所述外周血中的红细胞，并通过离心去上清的方法去除除白细胞之外的大部分杂质。进一步优选的，所述裂解液含有8mM～12mMTris-HCL、8mM～12mMNaH2PO4和/或NaHPO4、120mM～140mMNaCl、体积百分数为0.7％～1.3％的TritonX-100、8mM～12mMNa4P2O7·10H2O，pH＝7.2～7.7；进一步优选的，所述裂解的温度为0℃～4℃，时间为15min～25min。进一步优选的，所述离心的条件为700g～900g，4min～6min。红细胞由于没有细胞核，在较为温和的裂解条件下即可被裂解，在本专利技术优选的裂解条件下，白细胞不被裂解或极少被裂解。裂解后的红细胞随其它杂蛋白溶于上清中被一起离心除去。优选的，如上所述的全局肿瘤标志物表达水平的检测方法，所述抗CD14和CD16的抗体为具有不同荧光颜色的荧光抗体；当所述抗肿瘤标志物X的抗体为荧光抗体时，其荧光颜色与所述抗CD14和CD16的抗体的荧光颜色不同；当所述所述抗肿瘤标志物X的抗体为非荧光抗体时，其对应的荧光二抗的荧光颜色与所述抗CD14和CD16的抗体的荧光颜色不同。由于在分析结果时，需要分析X+CD14+CD16+细胞与CD14+CD16+的细胞数量的比值，所以三种蛋白的荧光颜色必然是不同的。优选的，所述荧光二抗为F(ab')2抗体。本专利技术需要标记CD14+CD16+细胞胞浆内部的TKTL1和/或DNASE1L1抗原，由于F(ab')2抗体没有Fc段，穿透细胞膜的能力更强，特异性更好，因而优选F(ab')2抗体用本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种全局肿瘤标志物表达水平的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：用CD14和CD16的抗体标记出待检测对象外周血中的CD14

【技术特征摘要】
1.一种全局肿瘤标志物表达水平的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：用CD14和CD16的抗体标记出待检测对象外周血中的CD14+CD16+细胞，去除除白细胞之外的大部分杂质后用待检测的抗肿瘤标志物X的抗体标记该肿瘤标志物；检测X+CD14+CD16+细胞与CD14+CD16+细胞的数量并统计前者与后者细胞数量的比值。2.根据权利要求1所述的全局肿瘤标志物表达水平的检测方法，其特征在于，所述肿瘤标志物X为TKTL1和/或DNASE1L1。3.根据权利要求1或2所述的全局肿瘤标志物表达水平的检测方法，其特征在于，所述去除除白细胞之外的大部分杂质的方法为：用裂解液裂解所述外周血中的红细胞，并通过离心去上清的方法去除除白细胞之外的大部分杂质。4.根据权利要求3所述的全局肿瘤标志物表达水平的检测方法，其特征在于，所述裂解液含有8mM～12mMTris-HCL、8mM～12mMNaH2PO4和/或NaHPO4、120mM～140mMNaCl、体积百分数为0.7％～1.3％的TritonX-100、8mM～12mMNa4P2O7·10H2O，pH＝7.2～7.7。5.根据权利要求4所述的全局肿瘤标志物表达水平的检测方法，其特征在于，所述裂解的温度为0℃～4℃，时间为15min～25min。6.根据权利要求5所述的全局肿瘤标志物表达水平的检测方法，其特征在于，所述离心的条件为700g～900g，4min～6min。7.根据权利要求1或2所述的全局肿瘤标志物表达水平的检测方法，其特征在于，所述抗CD14和CD1...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭驰，杜朝阳，张小俊，
申请(专利权)人：北京金沐医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11