The invention belongs to the technical field of antibody detection, and discloses a method for antibody capture protein and gene fusion recombinant protein antibody detection, will report a nucleic acid sequence encoding a gene encoding nucleic acid sequence and direct antigen fusion recombinant fusion antigen obtained gene or enzyme by protein engineering methods; the direct use of enzyme expression fusion the antigen of cells or eukaryotic or prokaryotic lysate as antigen; using antibody capture protein coated polystyrene board to capture antibody in the test sample. The invention relates to a chemical coupling effect on antigen at least; and can be used directly to express the enzyme fusion antigen cells (eukaryotic or prokaryotic) lysate as antigen, without purification steps, reduce the production cost; polystyrene board used kit different package can be exactly the same; do not use enzyme labeled two resistance, for the same detection kit from different provenances of samples can be.
【技术实现步骤摘要】
抗体捕获蛋白及报告基因融合重组蛋白检测抗体的方法
本专利技术属于抗体检测
,尤其涉及一种抗体捕获蛋白及报告基因融合重组蛋白检测抗体的方法。
技术介绍
酶联免疫吸附实验(enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA)是目前现有最常用的抗体检测技术,其基本方法是将已知的抗原吸附于固相载体(聚苯乙烯微量反应板)表面,通过固相载体表面的抗原与待检测抗体的结合;再加入酶标记的二抗(针对不同的种属,人,猴,小鼠)来进一步识别与抗原结合的抗体,使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行;再加入底物后二抗上标记的酶基团介导一个颜色反应,通过分光光度计读取吸光度后即可获得读数,以此判断样品中是否存在识别吸附于固相载体表面抗原的抗体。通过酶联免疫法(ELISA)方法来进行抗体检测有以下几个缺点:1.用于检测用的重组抗原需要在细菌或其他重组蛋白表达系统中进行表达,然后进行纯化才可用于包被聚苯乙烯板的固相表面,因此难以应用于一些疏水性较强,或具有多次跨膜结构的抗原表达纯化,导致难以开发出相应抗体的检测方法2.需要通过化学偶联的方式,将报告基因蛋白(如辣根过氧化物酶)偶联标记至重组抗原或抗体上形成酶标抗原或者酶标抗体进行检测,而化学偶联的方式将增加额外的生产步骤和生产成本,同时可能由于所发生化学偶联反应而影响抗原与抗体的结合。3.酶联免疫吸附法一般需使用特定的抗原或者抗体来吸附于检测用的聚苯乙烯板的固相表面,针对不同抗原的检测试剂盒需要使用相应的抗原或者抗体来预先吸附聚苯乙烯板,不同试剂盒之间不能共用,因此包被聚丙乙烯板工作繁琐。4.针对不同物种来源的检 ...
【技术保护点】
一种抗体捕获蛋白及报告基因融合重组蛋白检测抗体的方法,其特征在于,所述的抗体捕获蛋白及报告基因融合重组蛋白检测抗体的方法通过蛋白质工程的手段将报告基因的编码核酸序列直接与抗原编码核酸的序列融合后以重组表达的方式获得报告基因或酶融合抗原;直接使用表达酶融合抗原的真核或原核细胞裂解物作为检测用重组抗原;使用抗体捕获蛋白包被吸附于固相表面。
【技术特征摘要】
1.一种抗体捕获蛋白及报告基因融合重组蛋白检测抗体的方法,其特征在于,所述的抗体捕获蛋白及报告基因融合重组蛋白检测抗体的方法通过蛋白质工程的手段将报告基因的编码核酸序列直接与抗原编码核酸的序列融合后以重组表达的方式获得报告基因或酶融合抗原;直接使用表达酶融合抗原的真核或原核细胞裂解物作为检测用重组抗原;使用抗体捕获蛋白包被吸附于固相表面。2.如权利要求1所述的抗体捕获蛋白及报告基因融合重组蛋白检测抗体的方法,其特征在于,所述抗体捕获蛋白包括:链球菌蛋白A,蛋白G,重组蛋白A/G,蛋白L或以抗体作为免疫原刺激动物产生针对抗体的普通二抗。3.如权利要求1所述的抗体捕获蛋白及报告基因融合重组蛋白检测抗体的方法,其特征在于,所述抗体捕获蛋白及报告基因融合重组蛋白检测抗体的方法包括以下步骤:步骤一,使用抗体捕获蛋白包被检测板的固象表面;步骤二,使用抗体捕获蛋白吸附与载体固相表面后,使用无关蛋白进行封闭,将检测板固相表面上未吸附抗体捕获蛋白的表面进行封闭;步骤三,将报告基因的核酸序列与抗原或抗原表位编码基因的核酸序列通过分子克隆的方式连接为一个单一的核酸序列,使报告基因和抗原表达为一个单一的融合重组蛋白作为检测用抗原使用;步骤四,将表达报告基因融合重组抗原的细胞使用适当的方法破碎裂解,部分原核细胞难以表达的蛋白可使用真核细胞表达系统进行表达;步骤五,将待检测样本以1:20的比...
【专利技术属性】
技术研发人员:南雨辰,周恩民,武春燕,
申请(专利权)人:西北农林科技大学,
类型:发明
国别省市:陕西,61
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