一种金线莲玻璃化组培苗复苏的方法技术

本发明专利技术涉及植物组织培养领域，具体公开了一种金线莲玻璃化组培苗复苏的方法，包括如下步骤：1)玻璃化组培苗复苏培养：将金线莲玻璃化组培苗接种到玻璃化组培苗复苏培养基上，常规培养至形成大量新芽或原球茎；2)增殖培养：挑选步骤1)中芽长达2～3厘米的不定芽，将其从母株上切下，其余不定芽继续玻璃化组培苗复苏诱导培养，切下的不定芽接种到增殖培养基上，常规培养至长出3片叶片并且叶片展开，获得无菌金线莲种苗。本发明专利技术方法处理的金线莲玻璃化组培苗，复苏率高达88.9％，无菌苗增殖率达60％，可快速恢复玻璃化组培苗并快速繁殖金线莲无菌种苗，解决了金线莲植株玻璃化、资源匮乏、成活率低等问题。

【技术实现步骤摘要】
一种金线莲玻璃化组培苗复苏的方法
本专利技术涉及植物组织培养领域，具体地说，涉及一种金线莲玻璃化组培苗复苏的方法。
技术介绍
金线莲又名金线兰、金丝草、树草莲、金钱仔草等，为兰科开唇兰属多年生草本植物。金线莲全草均可入药，其功效范围广泛，主治咯血、肾炎、膀胱炎、风湿性关节炎、肿瘤等疑难病症，日益受到医药界的重视。金线莲是民间常用珍惜草本药用植物。金线莲性平、味甘，具有清热凉血、祛风利湿等功效，被广泛用于消炎、解毒、止血降压、治疗小儿惊风高热、小儿惊厥、糖尿病、风湿病、癌症、细菌感染等症。据研究报道，金线莲富含有多糖、微量元素、强心苷类、氨基酸、有机酸、甾体化合物、黄酮类化合物、生物碱等多种成分，尤其富含金线莲多糖类物质。现代药理学研究发现，植物多糖有调节免疫、抗肿瘤、降血糖、抗衰老、调节代谢平衡、抗病毒、抑制哮喘、抗过敏、抗辐射、保肝等功效。多糖作为一类重要的活性物质，在抗肿瘤、抗衰老、抗病毒、保肝等病症的治疗方面具有较大的潜力。金线莲除药用外，还是一种极具观赏价值的室内观叶珍品。目前对于金线莲的繁殖虽然除了传统栽培技术还有通过植物组织培养方法探索建立金线莲诱导增殖培养系统和进行再生组培苗的技术瓶颈取得突破，也解决了金线莲对生存环境要求苛刻以及繁殖系数低等问题，促进其在国内的推广和应用，但在诱导增殖的过程中常常会发生组培苗玻璃化的现象，造成种苗退化，严重影响金线莲的生产利用。研究金线莲玻璃化组培苗复苏增殖技术是解决目前金线莲生产困境的有效方法。
技术实现思路
为解决目前金线莲利用中存在的组培苗玻璃化、繁殖周期长、品种退化、药用价值参差不齐、农药残余量超标等诸多问题，本专利技术提供一种金线莲玻璃化组培苗复苏的方法。本专利技术提供的金线莲玻璃化组培苗复苏增殖的方法，包括如下步骤：(1)玻璃化组培苗复苏：将玻璃化组培苗接种到玻璃化组培苗复苏培养基上，常规培养至叶片泛绿；所述玻璃化组培苗复苏培养基为含30g/L蔗糖、0.01～2.00g/L萘乙酸、0.1～3.0g/L6-苄氨基嘌呤、0.01～0.05g/L6-糖基氨基嘌呤的MS培养基；(2)复苏苗增殖：挑选步骤(1)中泛绿芽长达2-3厘米的不定芽，将其从母株上切下，接种到增殖培养基上，常规培养至丛生芽密集即5颗丛生芽以上，且枝条长势粗壮；所述增殖培养基为含30g/L蔗糖、0.01～2.00g/L萘乙酸、0.1～3.0g/L6-苄氨基嘌呤的MS培养基。其中，所述玻璃化组培苗为已经玻璃化的金线莲组培苗。步骤(2)中，切下不定芽后，其余玻璃化组织和不定芽继续玻璃化组培苗复苏培养。进一步地，所述常规培养的培养条件为pH值5.8，光照强度1500lx、光照时间12h/d，温度为25℃。进一步地，所述玻璃化组培苗复苏诱导培养的时间为20～30天。进一步地，所述增殖培养的时间为30～40天。本专利技术还提供了前述方法在金线莲无菌快繁体系中的应用。本专利技术的有益效果在于：1)本专利技术玻璃化组培苗复苏诱导率高达88.9％，增殖率达60％，可快速复苏金线莲玻璃化组培苗并增殖金线莲无菌苗。2)本专利技术解决了金线莲利用中存在的组培苗玻璃化、资源匮乏、繁殖周期长、品种退化、药用价值参差不齐、农药残余量超标等诸多问题。3)本专利技术首次采用离体快速繁殖技术对金线莲玻璃化组培苗进行复苏增殖培养，不仅可以满足市场需求，还可以为工厂大规模生产提供有益的理论参考。4)本专利技术在保护野生金线莲自然资源和良好的生态环境等方面具有重要意义。具体实施方式下面将结合实施例对本专利技术的优选实施方式进行详细说明。需要理解的是以下实施例的给出仅是为了起到说明的目的，并不是用于对本专利技术的范围进行限制。本领域的技术人员在不背离本专利技术的宗旨和精神的情况下，可以对本专利技术进行各种修改和替换。下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。实施例1利用本专利技术进行金线莲玻璃化组培苗复苏。外植体的选择：选择已经玻璃化的金线莲组培苗。金线莲玻璃化组培苗复苏诱导培养：将玻璃化组培苗接种到玻璃化组培苗复苏培养基上，常规培养。所述玻璃化组培苗复苏培养基以MS培养基为基本培养基，所含蔗糖浓度为30g/L、萘乙酸浓度为0.01～2.00g/L、6-苄氨基嘌呤0.1～3.0g/L、6-糖基氨基嘌呤0.01～0.05g/L的培养基。所述常规培养的培养条件为pH值5.8，光照强度1500lx、光照时间12h/d，温度为25℃。培养20天，玻璃化组培苗开始复苏，叶片开始泛绿。结果表明，金线莲玻璃化组培苗复苏率达88.9％，能快速获得玻璃化复苏组培苗，能得到优良性状的大量金线莲种苗。实施例2利用本专利技术进行金线莲离体快速增殖。增殖培养：挑选已经复苏的玻璃化组培苗长达2-3cm的不定芽，将其从母株上切下接种到增殖培养基上，其余玻璃化组织继续玻璃化组培苗复苏培养，常规培养，培养条件同实施例1。所述增殖培养基为以MS培养基为基本培养基，所含蔗糖浓度为30g/L、萘乙酸浓度为0.01～2.00g/L、6-苄氨基嘌呤0.1～3.0g/L的培养基，pH值5.8。培养30天，长出大量丛生芽，部分长出大量原球茎。结果表明，增殖率达60％，可快速复苏金线莲玻璃化组培苗并增殖金线莲无菌苗。虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本专利技术作了详尽的描述，但在本专利技术基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本专利技术精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本专利技术要求保护的范围。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种金线莲玻璃化组培苗复苏的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)玻璃化组培苗复苏：将玻璃化组培苗接种到玻璃化组培苗复苏培养基上，常规培养至叶片泛绿；所述玻璃化组培苗复苏培养基为含30g/L蔗糖、0.01～2.00g/L萘乙酸、0.1～3.0g/L 6‑苄氨基嘌呤、0.01～0.05g/L 6‑糖基氨基嘌呤的MS培养基；(2)复苏苗增殖：挑选步骤(1)中泛绿芽长达2‑3厘米的不定芽，将其从母株上切下，接种到增殖培养基上，常规培养至丛生芽密集且枝条长势粗壮；所述增殖培养基为含30g/L蔗糖、0.01～2.00g/L萘乙酸、0.1～3.0g/L 6‑苄氨基嘌呤的MS培养基。

【技术特征摘要】
1.一种金线莲玻璃化组培苗复苏的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)玻璃化组培苗复苏：将玻璃化组培苗接种到玻璃化组培苗复苏培养基上，常规培养至叶片泛绿；所述玻璃化组培苗复苏培养基为含30g/L蔗糖、0.01～2.00g/L萘乙酸、0.1～3.0g/L6-苄氨基嘌呤、0.01～0.05g/L6-糖基氨基嘌呤的MS培养基；(2)复苏苗增殖：挑选步骤(1)中泛绿芽长达2-3厘米的不定芽，将其从母株上切下，接种到增殖培养基上，常规培养至丛生芽密集且枝条长势粗壮；所述增殖培养基为含30g/L蔗糖、0.01～2.00g/L萘乙酸、0.1～3.0g/L6-苄氨基嘌呤的MS培养基。2....

【专利技术属性】
技术研发人员：陈建荣，刘芳，唐映红，唐伟卓，
申请(专利权)人：长沙学院，
类型：发明
国别省市：湖南,43