一种水晶心脏流出道标本的制作方法技术

本发明专利技术属于动物组织标本制作技术领域，具体涉及一种水晶心脏流出道标本的制作方法。本发明专利技术先用体积百分比为30～50％乙醇、75～100％甲醇、75～100％丙酮和95～100％乙醇依次对动物标本进行固定；然后采用不同浓度梯度的丙三醇对其进行透明处理。本发明专利技术方法制得的组织标本不仅能够清晰、丝发未损，且原生态地将心脏系统呈现出来；而且不需要用传统福尔马林浸泡，不会给环境带来污染，同时将制作周期缩短为15～30天；可以用于心脏系统发育领域的科学研究，具有广泛的艺术欣赏和教学运用等价值。

Method for making crystal heart outflow tract specimen

The invention belongs to the technical field of animal tissue specimen preparation, in particular relates to a method for making the crystal heart outflow tract specimen. The present invention first with the volume percentage of 30 to 50% ethanol, 75 methanol, 75 ~ 100% ~ 100% ~ 100% acetone and 95 ethanol in order to animal specimens were fixed by glycerol; then different concentration gradient on the transparent. The prepared specimens can not only clear, without hair loss, and the original heart system show; and do not need to use the traditional Faure Marin immersion, does not pollute the environment, while the production cycle is shortened to 15 ~ 30 days; can be used for scientific research in the field of heart system development, has wide the teaching of art appreciation and application value.

【技术实现步骤摘要】
一种水晶心脏流出道标本的制作方法
本专利技术属于动物组织标本制作
，具体涉及一种水晶心脏流出道标本的制作方法。
技术介绍
动物组织的标本在教学及科研领域中发挥着重要作用。目前国内市场上制作出来的动物标本大多数是采用福尔马林固定的普通标本，传统心脏的标本都是体积比较大，或者是展示心肌的分层，或者是展示各个腔室，而心脏相关的流出道展示的不够完整，并且整个标本浸泡在福尔马林溶液内，时间久了会变黑，学生看了除了恶心就是有讨厌学习的感觉。制作出来心脏流出道，其外观美观度差，且无法清晰的观察到心脏流出道发育的情况，不易于对于各种心脏发育畸形进行研究和教学。尤其是在胚胎时期心脏还是心管时，此时的心管的学习仅仅通过教科书上的模型，几乎连教学老师们也没有见过真实的心管是啥样子的，很不利于教学和科研。
技术实现思路
为了解决上述问题，本专利技术的目的在于提供一种水晶心脏流出道标本的制作方法。该制作方法中采用一种全新的透明方法，不仅制作出的水晶心脏流出道在质量上优越，能更清楚地观察到流出道的构型，便于对各种心脏发育畸形的判定，而且制作周期短。为实现上述专利技术目的，本专利技术是通过以下技术方案来实现的：一种水晶心脏流出道标本的制作方法，包括如下制备步骤：(1)取材：获取动物标本；(2)固定：依次采用体积百分比浓度为30～50％的乙醇、75～100％的甲醇和95～100％的乙醇处理步骤(1)中获得的动物标本；其中，丙酮的作用是进一步更好的脱脂；第二次使用乙醇其作用主要是为了洗脱丙酮，进一步脱水，为后续实验做准备。固定过程中，选用如上所述的体积百分比浓度，一方面，该区间浓度内不会剧烈使组织缩水，而使动物形态变化；另一方面，其他浓度不能最佳的溶解脂类。(3)透明化处理：先用体积百分比浓度为1～5％的KOH洗脱步骤(2)处理后的标本，再依次采用30～50％的丙三醇、60～75％的丙三醇和90～100％的丙三醇对的所述动物标本进行梯度透明化处理。梯度透明处理能有效防止组织皱缩变形，失去自然形态。透明化处理不同动物组织处理天数不一，依据是动物组织下沉到丙三醇的底部，并且透明度增加，(4)显微处理：在显微镜下，对步骤(3)透明化处理后的心脏标本除去相应部位的软组织，得到所述水晶心脏流出道标本。较佳地，步骤(2)中，所述95～100％的乙醇处理前先用75～100％的丙酮对标本进行处理。较佳地，所述步骤(3)中，所述30～50％的丙三醇处理前，先用1～5％的KOH从低浓度到高浓度逐渐洗脱步骤(1)所述标本。较佳地，所述用1～5％的KOH从低浓度到高浓度逐渐洗脱步骤(1)所述标本之后，先用过氧化氢对标本进行处理，后再用30～50％的丙三醇处理。较佳地，所述步骤(2)具体为：将步骤(1)中所得动物标本先入30～50％的乙醇中置于摇床上固定10～15小时；再放入75～100％的甲醇中置于摇床上10～15小时；再放入75～100％的丙酮中置于摇床上10～15小时；最后将动物标本放入95～100％的乙醇中置于摇床上10～15小时。不同动物组织的固定处理时间不同，其他动物的组织是根据皮肤有无毛发、皮下脂肪组织多少以及皮肤的致密程度来决定的，不同动物处理方式是有区别的。较佳地，所述摇床转述为50～70转/分钟。用所述方法制作的水晶心脏流出道标本的图片拍摄方法，拍摄时候，用目标增强法进行拍照；其具体是在拍摄时候，将标本放置的透明玻板，将传统的，将光源放置在透明玻板底部，改为将光源设置在于标本同两侧边。充分透明后体式显微镜或者单反相机拍照，即可保存清晰的心脏及其各流出道的清晰结构。本专利技术采用30～50％乙醇、75～100％甲醇、75～100％丙酮和95～100％乙醇固定动物标本；充分固定后，1～5％KOH从低浓度到高浓度逐渐洗脱标本，使其软化，再采用不同梯度的丙三醇对其进行逐渐透明化处理；充分透明后体式显微镜或者单反相机拍照，不仅制作周期缩短为15～30天，而且可保存清晰的心脏及其各流出道的清晰结构。相对传统的把整个心脏取出，浸泡于福尔马林溶液里的制作方法，本专利技术不但不会破坏心脏及其周围组织的正常毗邻关系，并且展示效果真实和形象，非常利于学生专业的学习。以往心脏及其各相关结构的展示标本都是较大的胚胎或者成体，小于8cm的胚胎的心脏由于过小，利用传统的解剖操作，无法正确的显示心脏及其相关的结构(只能通过模式图)。在胚胎时期心脏还是心管时，此时的心管的学习仅仅通过教科书上的模型，几乎连教学老师们也没有见过真实的心管是啥样子的，本专利技术技术打破常规，可以原位、清晰、无损的展示从心管形成到成体的任何心脏及其流出道的各个结构，并且各个解剖结构的连贯、毗邻关系得以充分的展示，使医学标本达到了美观、精致化，开创医学艺术时代。本专利技术将水晶心脏流出道是一种能够快速使动物心脏流出道以类似“4DX-ray”的效果展现出来的方法，使得平时无法观察到微细的心脏系统能够清晰地、丝发未损且原生态地呈现出来。与传统的心脏流出道标本不同，本专利技术的水晶心脏流出道艺术品呈现透明般的奇幻效果，不用传统福尔马林浸泡，而采用环保无毒的溶液进行保存，不仅可以用于心脏系统发育领域的科学研究，还具有广泛的艺术欣赏和教学运用等价值。附图说明图1为传统拍摄示意图；图2为本专利技术拍摄示意图；图3为传统拍摄标本的示意图；图4为本专利技术拍摄标本的示意图。具体的实施方式下面结合具体实施方式对本专利技术作进一步的详细说明，以助于本领域技术人员理解本专利技术。实施例1制作鸡胚水晶心脏流出道标本的方法，具体步骤如下：取孵化12天鸡胚，放入30％乙醇中固定，放摇床12小时；然后放入80％甲醇中固定12小时；再放入80％丙酮中固定12小时；最后将鸡胚放入95％乙醇中固定12小时；放入30％丙三醇中约48小时，后依次进入75％丙三醇、100％丙三醇进行梯度透明化处理大约2天直至胚胎沉到底部；对染色后的鸡胚进行显微处理，在显微镜下，对透明化处理后的动物标本，开胸、除去相应部位的软组织，得到所述水晶心脏流出道标本。实施例2制作人类胚胎水晶心脏流出道方法，具体步骤如下：取人类胚胎放入30％乙醇中固定，放摇床12小时，然后放入75％甲醇中固定12小时；再放入95％丙酮中固定12小时(小于12周人胚可以省略)；最后将人类胚胎放入100％乙醇中固定12小时；放入30％丙三醇中约48小时，后依次进入60％丙三醇、95-100％丙三醇进行梯度透明化处理大约6天直至胚胎沉到容器底部；对透明后的人类胚胎进行显微处理完成制作。实施例3制作鼠水晶心脏流出道方法，具体步骤如下：取鼠放入50％乙醇中固定，放摇床12小时，然后放入100％甲醇中固定12小时；再放入100％丙酮中固定12小时；最后将鼠放入100％乙醇中固定12小时；放入50％丙三醇中约48小时，后依次进入75％丙三醇、100％丙三醇进行梯度透明化处理大约6天直至沉到容器底部；对透明后的鼠进行显微处理完成制作。实施例4制作乌龟水晶心脏流出道标本的方法，具体步骤如下：取巴西龟一只或数只，放入50％乙醇中固定，放摇床12小时；然后放入100％甲醇中固定12小时；再放入100％丙酮中固定12小时；最后将巴西龟放入100％乙醇中固定12小时；将250微升30％过氧化氢加入到1000mL纯水中，放入巴西龟，漂洗5天；去除本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种水晶心脏流出道标本的制作方法，其特征在于，包括如下制备步骤：(1)取材：获取动物标本；(2)固定：依次采用体积百分比浓度为30～50％的乙醇、75～100％的甲醇和95～100％的乙醇处理步骤(1)中获得的动物标本；(3)透明化处理：先用体积百分比浓度为1％～5％的KOH洗脱步骤(2)固定后的标本，再依次采用由低到高不同体积百分比浓度的丙三醇对的动物标本进行梯度透明化处理；(4)显微处理：在显微镜下，对步骤(3)透明化处理后得到的心脏标本除去相应部位的软组织，得到所述水晶心脏流出道标本。

【技术特征摘要】
1.一种水晶心脏流出道标本的制作方法，其特征在于，包括如下制备步骤：(1)取材：获取动物标本；(2)固定：依次采用体积百分比浓度为30～50％的乙醇、75～100％的甲醇和95～100％的乙醇处理步骤(1)中获得的动物标本；(3)透明化处理：先用体积百分比浓度为1％～5％的KOH洗脱步骤(2)固定后的标本，再依次采用由低到高不同体积百分比浓度的丙三醇对的动物标本进行梯度透明化处理；(4)显微处理：在显微镜下，对步骤(3)透明化处理后得到的心脏标本除去相应部位的软组织，得到所述水晶心脏流出道标本。2.如权利要求1所述水晶心脏流出道标本的制作方法，其特征在于，步骤(2)中，所述95～100％的乙醇处理前先用75～100％的丙酮对所述动物标本进行处理。3.如权利要求1所述水晶心脏流出道标本的制作方法，其特征在于，步骤(3)中，再依次采用30～50％的丙三醇、60～75％的丙三醇和90～100％的丙三醇对的动物标本进行梯度透明化处理。4.如权利要求1所述水晶心脏流出道标本的制作方法，其特征在于，步骤(3)中，...

【专利技术属性】
技术研发人员：马征来，郭飞翔，陈刚，刘雅丽，范勇，
申请(专利权)人：广州医科大学附属第三医院广州重症孕产妇救治中心，广州柔济医院，
类型：发明
国别省市：广东,44