一种芪苓温肾消囊制剂的有效成分分析方法技术

本发明专利技术涉及一种药物的有效成分分析方法，特别涉及一种芪苓温肾消囊制剂的有效成分分析方法。本发明专利技术所述的方法，包括如下步骤：(1)对照溶液的制备：(2)供试品溶液的制备：(3)有效成分的解析方法：包括黄酮类化合物、酚酸类化合物、三萜皂苷类化合物、倍半萜苷类化合物、生物碱类化合物。

【技术实现步骤摘要】
一种芪苓温肾消囊制剂的有效成分分析方法
：本专利技术涉及一种药物的有效成分分析方法，，特别涉及一种芪苓温肾消囊制剂的有效成分分析方法。
技术介绍
：多囊卵巢综合征(polycysticovarysyndrome，PCOS)是青春期及育龄期女性常见的妇科疾病，在育龄期妇女中的发病率大约是6％～10％。中医学认为PCOS的病机为“天癸失序、痰壅胞宫”，与脾肾功能失常有关。现代医学研究发现PCOS是由于下丘脑-垂体-卵巢轴调节功能异常，从而导致内分泌紊乱，出现以高雄激素血症、胰岛素抵抗及排卵障碍为主要特征，临床表现为闭经、不孕、肥胖、多毛的四联症。芪苓温肾消囊方(原名补肾化痰方)是治疗PCOS的多年临床经验方，由黄芪AstragaliRadix、淫羊藿EpimediiHerba、苍术AtractylodisRhizoma、茯苓Poria、丹参SalviaeMiltiorrhizaeRadix5味药材组成，具有补肾化痰、健脾祛湿、调经止痛等功效，临床随症加减使用，疗效显著。具体的处方为：黄芪30-50份、淫羊藿10-30份、苍术10-30份、茯苓30-50份、丹参10-30份。制备方法为按重量配比称取各原料药，各原料药用水煎煮，合并煎煮液，过滤，滤液浓缩成55-60℃热测时相对密度为1.20-1.35的清膏，加入制剂成型的辅料或赋形剂，制剂成型，即得。尹倩等(尹倩,侯丽辉,刘颖华,等.补肾化痰方对多囊卵巢综合征患者高雄激素血症影响的临床观察[J].上海中医药杂志,2015,49(8):53-55.)利用补肾化痰方对患者进行治疗，比较内分泌指标，结果显示，治疗组疗效显著，可明显改善高雄激素血症，促进排卵。常惠等(常惠,匡洪影,丛晶,等.补肾化痰复方颗粒对孕期高雄激素血症大鼠雌性子代生殖内分泌的影响[J].中华中医药杂志,2011,26(12):2872-2875.)利用补肾化痰方对孕期高雄激素血症大鼠进行治疗，发现其能降低雄激素水平，逆转卵巢的多囊改变，改善排卵功能。梁晨等(梁晨,丛晶,常惠,等.补肾化痰复方对多囊卵巢综合征模型大鼠卵巢内胰岛素信号传导分子的调控[J].中国中西医结合杂志,2011,31(12):1639-1644.)通过实验发现补肾化痰方能改善胰岛素抵抗及糖脂代谢功能，可能与胰岛素信号传导分子蛋白表达的调控有关。目前针对芪苓温肾消囊方的物质基础研究鲜有报道。本专利技术采用UPLC-ESI-IT-TOF/MS分析方法对其化学成分进行全面的研究，并对部分特征成分来源进行了指认，为其物质基础及质量标准研究提供指导。
技术实现思路
为了解决上述技术问题，本专利技术提供一种芪苓温肾消囊制剂有效成分的分析方法，该方法能够快速检测出芪苓温肾消囊制剂的有效成分。本专利技术是通过以下技术方案实现的：一种芪苓温肾消囊制剂有效成分的分析方法，包括如下步骤：(1)对照溶液的制备：(2)供试品溶液的制备：(3)有效成分的解析方法：包括黄酮类化合物、酚酸类化合物、三萜皂苷类化合物、倍半萜苷类化合物、生物碱类化合物。所述步骤(1)对照溶液的制备：称取适量的绿原酸、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、毛蕊异黄酮、金丝桃苷、迷迭香酸、紫草酸、芒柄花苷、丹酚酸A、淫羊藿苷、芒柄花素、黄芪甲苷、宝霍苷I、箭霍苷B、苍术苷A、朝霍定A、朝霍定B、朝霍定C对照品于同一量瓶里，加入适量甲醇超声溶解，冷却至室温，定容至刻度，即得混合对照品溶液。所述步骤(2)中供试品溶液制备包括样品供试品溶液和单味药材供试品溶液。优选，步骤(2)供试品溶液制备，称取芪苓温肾消囊制剂，30-50％甲醇超声提取20-60min，冷却至室温，取上清液过0.22μm滤膜，即得样品供试品溶液；称取单味药材或提取物，分别用0-50％甲醇超声提取20-60min，冷却至室温，取上清液过0.22μm滤膜，即得黄芪药材供试品溶液、苍术药材供试品溶液、茯苓药材供试品溶液、丹参药材供试品溶液、淫羊藿药材供试品溶液。所述步骤(3)中黄酮类化合物包括金丝桃苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、温哥华苷E、淫羊藿苷A、脱水淫羊藿素-3-O-鼠李糖(1-2)-呋喃酸-7-O-葡萄糖、芒柄花素、芒柄花苷、宝霍苷Ⅱ、毛蕊异黄酮、温哥华苷F、朝霍定A、朝霍定B、朝霍定C、淫羊藿苷、脱水淫羊藿素-3-O-鼠李糖(1-2)-呋喃酸-7-O-葡萄糖、大花淫羊藿苷F、淫羊藿次苷、淫羊藿次苷Ⅰ、箭霍苷B、2”-鼠李糖淫羊藿次苷Ⅱ；所述酚酸类化合物包括丹参素、丹酚酸H或I、丹酚酸D、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、异丹酚酸B或丹酚酸E、丹酚酸A、绿原酸、异绿原酸、新绿原酸；所述三萜皂苷类化合物包括黄芪皂苷I、黄芪皂苷Ⅱ、异黄芪皂苷Ⅰ、黄芪甲苷；所述倍半萜苷类化合物包括苍术苷、生物碱类化合物包括木兰碱。所述步骤(3)中所述的有效成分解析方法包括超高效液相色谱法、质谱法、峰归属分析法。所述超高效液相色谱法色谱条件：采用PDA检测器、C18或T3或HILIC色谱柱，流动相：采用0-0.5％甲酸水溶液-乙腈，体积流量0.1-0.6mL/min。优选采用C18色谱柱，流动相：采用0.1％甲酸水溶液-乙腈，梯度洗脱，体积流量0.4mL/min；柱温30℃；梯度洗脱条件为所述质谱条件：采用电喷雾电离离子源(ESI)，正负离子分别检测，扫描范围m/z100～1200，离子源温度220-350℃，毛细管电压负离子模式3.0-4.0kV，正离子模式3.5-5.0kV，雾化气体积流量1.2-2.0L/min。优选以三氟醋酸钠作校正液，雾化气为高纯氮气，碰撞气为氩气，离子源温度250℃，毛细管电压负离子模式3.5kV，正离子模式4.5kV，雾化气体积流量1.5L/min；所述峰化合物归属法采用UPLC-ESI-IT-TOF/MS方法，通过对照品比对、图谱、质谱数据以及参考文献的分子量及碎片信息得出化合物结构，共指认出来源于黄芪、淫羊藿、苍术、丹参4味药材共36个化学成分。本专利技术所述的芪苓温肾消囊方属于现有技术，其由黄芪30-50份、淫羊藿10-30份、苍术10-30份、茯苓30-50份、丹参10-30份作为原料药经过提取加工制备而成的中药复方制剂。其方法：取各原料药，各原料药用水煎煮，合并煎煮液，过滤，滤液浓缩成55-60℃热测时相对密度为1.20-1.35的清膏，干燥即可；所述各药材提取物是各原料药分别用水煎煮，过滤，滤液浓缩成55-60℃热测时相对密度为1.20-1.35的清膏，干燥即得单味药材提取物。以上组成中，药物的重量是按重量份作为配比的，在生产时可按照相应比例增大或减少，如大规模生产可以以公斤为单位，或以吨为单位，小规模生产也可以以毫克为单位，重量可以增大或者减小，但各组成之间的生药材重量配比的比例不变。以上重量配比的比例是经过科学筛选得到的，对于特殊病人，如重症或轻症，肥胖或瘦小的病人，可以相应调整组成的量的配比，增加或减少不超过100％，药效不变。以上组成中的单味中药，尤其是臣药和佐药，也可以被适当的具有相同药性的中药替换，替换后的中药制剂其药物作用不变。本专利技术的制剂可以是任何可药用的剂型，这些剂型包括：片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种芪苓温肾消囊制剂有效成分的分析方法，其特征在于包括如下步骤：(4)对照溶液的制备：(5)供试品溶液的制备：(6)有效成分的解析方法：包括黄酮类化合物、酚酸类化合物、三萜皂苷类化合物、倍半萜苷类化合物、生物碱类化合物。

【技术特征摘要】
1.一种芪苓温肾消囊制剂有效成分的分析方法，其特征在于包括如下步骤：(4)对照溶液的制备：(5)供试品溶液的制备：(6)有效成分的解析方法：包括黄酮类化合物、酚酸类化合物、三萜皂苷类化合物、倍半萜苷类化合物、生物碱类化合物。2.如权利要求1所述的分析方法，其特征在于，所述步骤(3)中黄酮类化合物包括金丝桃苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、温哥华苷E、淫羊藿苷A、脱水淫羊藿素-3-O-鼠李糖(1-2)-呋喃酸-7-O-葡萄糖、芒柄花素、芒柄花苷、宝霍苷Ⅱ、毛蕊异黄酮、温哥华苷F、朝霍定A、朝霍定B、朝霍定C、淫羊藿苷、脱水淫羊藿素-3-O-鼠李糖(1-2)-呋喃酸-7-O-葡萄糖、大花淫羊藿苷F、淫羊藿次苷、淫羊藿次苷Ⅰ、箭霍苷B、2”-鼠李糖淫羊藿次苷Ⅱ；所述酚酸类化合物包括丹参素、丹酚酸H或I、丹酚酸D、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、异丹酚酸B或丹酚酸E、丹酚酸A、绿原酸、异绿原酸、新绿原酸；所述三萜皂苷类化合物包括黄芪皂苷I、黄芪皂苷Ⅱ、异黄芪皂苷Ⅰ、黄芪甲苷；所述倍半萜苷类化合物包括苍术苷、生物碱类化合物包括木兰碱。3.如权利要求1所述的分析方法，其特征在于：所述步骤(2)中供试品溶液制备包括样品供试品溶液和单味药材供试品溶液。4.如权利要求1所述的分析方法，其特征在于，所述步骤(3)中所述的有效成分解析方法包括超高效液相色谱法、质谱法、峰归属分析法。5.如权利要求4所述的分析方法，其特征在于，所述超高效液相色谱法色谱条件，采用PDA检测器、C18或T3或HILIC色谱柱，流动相：采用0-0.5％甲酸水溶液-乙腈，体积流量0.1-0.6mL/min，梯度洗脱条件为6.如权利要求4所述的分析方法，其特征在于，所述质谱条件：采用电喷雾电离离子源(ESI)，正负离子分别检测，扫描范围m/z100～1200，离子源温度220-350℃，毛细管电压负离子模式3.0-4.0kV，正离子模式3.5-5.0kV，雾化气体积流量1.2-2.0L/min。7.如权利要求4所述的分析方法，其特征在于，所述峰化合物归属法采用UPLC-ESI-IT-TOF/MS方法，通过对照品比对、图谱、质谱数据以及参考文献的分子量及碎片信息得出化合物结构，共指认出来源于黄芪、淫羊藿、苍术、丹参4味药材共36个化学成分。8.如权利要求3所述的分析方法，其特征在于：步骤(2)供试品溶液制备，称取芪苓温肾消囊制剂，30-50％甲醇超声提取20-60min，冷却至室温，取上清液过0.22μm滤膜，即得样品供试品溶液；称取单味药材或提取物，分别用0...

【专利技术属性】
技术研发人员：王玉，张晓川，张依倩，崔志鹏，何毅，
申请(专利权)人：天士力制药集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：天津,12