奥培米芬在制备促进髓鞘形成和再生的药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了奥培米芬(Ospemifene)在制备促进髓鞘形成和再生的药物中的应用。研究结果表明，奥培米芬在体外具有促进少突胶质前体细胞(OPC)分化形成成熟少突胶质细胞(OL)的作用；在缺氧导致的新生小鼠脑损伤模型中给予奥培米芬治疗，能增加髓鞘形成，并有助于成年后的运动功能恢复；在实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型中给予奥培米芬治疗，能促进髓鞘再生，减轻症状，延缓疾病进展。本发明专利技术不仅拓宽了奥培米芬的应用范围，提升了其市场价值，而且为新生儿脑损伤、中枢神经系统脱髓鞘疾病等的治疗提供了新的治疗药物。

【技术实现步骤摘要】
奥培米芬在制备促进髓鞘形成和再生的药物中的应用
本专利技术属于含有机有效成分的医药配制品
，涉及奥培米芬(Ospemifene)在制药方面的新用途。
技术介绍
髓鞘是神经系统的重要结构，可以起到加速电信号传导、保护和营养轴突的作用。新生儿脑损伤是一种常见的新生儿疾病，以髓鞘发育障碍为重要特征的室周白质损伤是该疾病的主要影像学表现，其中缺氧、免疫反应激活、基因突变等多种因素都可导致以髓鞘发育异常为特征的新生儿脑损伤。而临床中枢神经系统的疾病与髓鞘异常关系密切，如脱髓鞘疾病中，自身免疫等多种因素可导致髓鞘的丢失。髓鞘再生障碍或脱髓鞘会导致与病变区域神经纤维相对应的神经功能障碍；此外，髓鞘的损伤可能导致轴突的不可逆损伤进而引起对应的功能损伤。目前认为神经退行性疾病和神经老化过程都与髓鞘异常和脑白质病变密切相关。在现阶段，促进少突胶质前体细胞(OPC)分化进而包裹轴突形成髓鞘是关于发育异常导致的髓鞘形成障碍和髓鞘损伤修复的重要研究方向。目前，临床尚无针对性促进髓鞘形成和再生的药物，急需开发。奥培米芬是日本野义制药公司(ShionogiInc.)开发的新一代选择性雌激素受体调节剂，于2013年2月26日获美国FDA批准上市，主要用于治疗女性绝经期外阴和阴道萎缩而引起的中至重度性交疼痛。迄今为止，国内外尚未见奥培米芬在促进髓鞘形成和再生方面的报道。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于考察奥培米芬是否可以用于制备促进髓鞘形成和再生的药物，从而为新生儿脑损伤和中枢神经系统脱髓鞘疾病等提供临床可用的新药物。经实验，本专利技术提供如下技术方案：奥培米芬在制备促进髓鞘形成和再生的药物中的应用。进一步，所述促进髓鞘形成和再生的药物用于治疗新生儿脑损伤。更进一步，所述促进髓鞘形成和再生的药物用于治疗髓鞘发育障碍导致的脑白质病变。进一步，所述促进髓鞘形成和再生的药物用于治疗中枢神经系统脱髓鞘疾病。研究结果表明，奥培米芬在体外具有促进OPC分化形成成熟少突胶质细胞(OL)的作用；在缺氧导致的新生小鼠脑损伤模型中给予奥培米芬治疗，能增加髓鞘形成，并有助于成年后的运动功能恢复；在实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型中给予奥培米芬治疗，能促进髓鞘再生，减轻症状，延缓疾病进展。由此说明奥培米芬具有促进髓鞘形成和再生的作用，对新生儿脑损伤和中枢神经系统脱髓鞘疾病模型具有神经功能保护作用。因此，奥培米芬可以用于制备促进髓鞘形成和再生的药物，该药物可以用于治疗新生儿脑损伤(尤其是髓鞘发育障碍导致的脑白质病变)和中枢神经系统脱髓鞘疾病等。本专利技术的有益效果在于：本专利技术公开了奥培米芬在制备促进髓鞘形成和再生的药物中的应用，不仅拓宽了奥培米芬的应用范围，提升了其市场价值，而且为新生儿脑损伤和中枢神经系统脱髓鞘疾病等提供了临床可用的新药物。附图说明图1显示了奥培米芬能促进体外OPC的分化形成成熟的OL，其中Vehicle表示对照组。图2显示了奥培米芬能增加新生缺氧小鼠的髓鞘形成(免疫荧光染色方法)，其中Vehicle表示模型对照组，Ospemifene表示奥培米芬治疗组；1、2、3均为模型对照组小鼠的胼胝体MBP染色，4、5、6均为奥培米芬治疗组小鼠的胼胝体MBP染色。图3显示了奥培米芬能增加新生缺氧小鼠的髓鞘形成(电镜方法)，其中Vehicle表示模型对照组，Spinalcord表示脊髓。图4显示了奥培米芬能够改善缺氧导致的后期功能损伤，其中CTL表示模型对照组，OS表示奥培米芬治疗组。图5显示了奥培米芬能延缓EAE的发生并减轻疾病症状，其中EAECTL表示模型对照组，EAE+5mgOS表示奥培米芬低剂量治疗组，EAE+20mgOs表示奥培米芬高剂量治疗组。图6显示了奥培米芬可促进EAE模型小鼠的髓鞘修复并有效缓解髓鞘损伤导致的继发性轴突缺失；其中CTL表示正常对照组，EAECTL表示模型对照组，20mgOS表示奥培米芬高剂量治疗组；1、2、3分别为上述三组的脊髓NF-200和MOG荧光双标染色；4、5、6分别为上述三组的脊髓MOG荧光染色；7、8、9分别为上述三组的脊髓NF-200荧光染色。具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案和有益效果更加清楚，下面将结合附图对本专利技术的优选实施例进行详细的描述。实施例中使用的主要动物、试剂和仪器如下：体重18～20克的健康成年雌性C57BL/c小鼠(中国人民解放军第三军医大学大坪实验动物中心)，新生小鼠(孕鼠领养于中国人民解放军第三军医大学实验动物中心，待其产仔后用于缺氧实验)；奥培米芬(赛力克公司)，大鼠抗MBP抗体(millipore公司)，小鼠抗MOG抗体(millipore公司)，兔抗PDGFα抗体(SantaCruz公司)，小鼠抗NF-200抗体、完全弗氏佐剂和多聚甲醛(Simga公司)，髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG)35-55多肽、Alex594标记的抗大鼠第二抗体、Alex568标记的抗小鼠第二抗体、Alex488标记的抗兔第二抗体(Invitrogen公司)；90i荧光显微镜(Nikon公司)。(一)奥培米芬可诱导离体的OPC细胞分化形成成熟的OL使用panning的方法分离出生7～9天的新生SD大鼠的OPC细胞，相同密度接种于PLL包被的玻片上，次日同时给予1μM奥培米芬处理，对照组给予等量溶剂，两天后用4％多聚甲醛溶液固定细胞15分钟，MBP和PDGFRα免疫荧光染色，阳性细胞计数检测奥培米芬对OPC分化的影响。结果见图1，奥培米芬能促进离体的OPC细胞分化形成成熟的OL。(二)奥培米芬对新生儿脑损伤的治疗效果室周白质软化是新生儿脑损伤的重要病变，成熟髓鞘减少是室周白质软化的重要病理表现。缺氧导致新生儿在发育过程中不能正常形成成熟髓鞘。缺氧模型是常见的用于研究新生儿脑损伤的模型，通过对出生三天的新生小鼠进行七天时程的缺氧(氧气浓度为10％)，引起新生小鼠白质损伤。本专利技术以该模型来说明奥培米芬对新生儿脑损伤的治疗效果。1.缺氧模型的建立出生后3天的C57BL/c小鼠放入氧气浓度为10％的缺氧环境中饲养至出生后10天，缺氧过程中治疗组给予10mg/kg的奥培米芬灌胃治疗，而同窝模型对照组灌以等量溶剂DMSO。2.奥培米芬可增加新生缺氧小鼠的髓鞘形成将模型对照组和奥培米芬治疗组小鼠用1wt％戊巴比妥钠溶液麻醉，用0.01M的PBS进行心脏灌注，用4wt％多聚甲醛溶液灌注固定后，再以4wt％多聚甲醛溶液后固定6小时，用30wt％蔗糖溶液(用0.01M的PBS配制)脱水，冰冻切片(厚20μm)。所得切片以5wt％牛血清蛋白溶液室温封闭2小时，用大鼠抗MBP抗体孵育过夜，次日用Alex568标记的抗大鼠第二抗体室温避光孵育1小时，DAPI染色后封片，置荧光显微镜下观察并拍照，用图像分析软件Image-ProPlus5.0分析胼胝体区域的红色荧光阳性区域面积。结果见图2，奥培米芬能增加新生缺氧小鼠的髓鞘形成。另外，将模型对照组和奥培米芬治疗组小鼠用1wt％戊巴比妥钠溶液麻醉，用0.01M的PBS进行心脏灌注，用电镜固定液(含1.25wt％戊二醛和2wt％多聚甲醛)进行灌注固定，取一段脊髓置于电镜固定液中后固定，切片后观察髓鞘形成情况。结果见图3，奥培米芬能增加新生缺氧小鼠的髓鞘形成。3.奥本文档来自技高网...

【技术保护点】
奥培米芬在制备促进髓鞘形成和再生的药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.奥培米芬在制备促进髓鞘形成和再生的药物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述促进髓鞘形成和再生的药物用于治疗新生儿脑损伤。3.根据权利要求2所述的应用，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：王斐，杨余健，梅峰，肖岚，郭晟，
申请(专利权)人：中国人民解放军第三军医大学，
类型：发明
国别省市：重庆,50