一种具有显著增强免疫力的蛹虫草蛋白肽及其制备方法技术

本发明专利技术涉及功能性食品加工领域，具体公开了一种能够显著增强免疫力的蛹虫草蛋白肽及其制备方法。所述蛹虫草蛋白肽是由蛹虫草子实体或经热水浸提虫草素所得蛹虫草剩余物，经菠萝蛋白酶酶解得到的，具有显著增强体液免疫力和细胞免疫力的功能。本发明专利技术的制备方法简单，从原料粉到终端产品得率可达10％，易工业化生产，具有较高的社会效益和经济效益。

Cordyceps militaris protein peptide with significant enhancement of immunity and preparation method thereof

The invention relates to the functional food processing field, specifically discloses a protein peptide of Cordyceps militaris which can obviously enhance immunity and a preparation method thereof. The Cordyceps militaris protein peptide from Cordyceps militaris or by hot water extraction of cordycepin from Cordyceps militaris residues by bromelain enzyme hydrolysis, significantly enhance the humoral immunity and cell immunity function. The preparation method of the invention is simple, and the yield can reach 10% from raw powder to terminal product, which is easy to be industrialized and has high social and economic benefits.

【技术实现步骤摘要】
一种具有显著增强免疫力的蛹虫草蛋白肽及其制备方法
本专利技术涉及功能性食品加工领域，具体的说，涉及到一种具有显著增强免疫力的蛹虫草蛋白肽及其制备方法。
技术介绍
蛹虫草又称北冬虫夏草或者北虫草，属于子囊菌亚门，麦角菌目，麦角菌科，虫草菌属。研究发现蛹虫草与冬虫夏草有非常相似的营养价值及药用价值，现代研究表明,其具有增强免疫力、抗肿瘤、抗氧化等多种功能。蛹虫草营养丰富，既有蛋白质、脂肪、碳水化合物三大基本营养素，还含有很多功能性成分，如虫草酸、虫草素、虫草多糖、腺苷等。目前，对虫草素和虫草多糖的提取研究较多，热水浸提虫草素后的剩余物一般作为残渣废弃，这不仅造成环境的污染，更造成严重的资源浪费。剩余物中蛋白质含量较高，而且浸提后还有很多功能性物质的残留，将其作为生产功能性蛋白肽的原料，不仅可充分利用物料，也可保护生态资源。免疫力作为人体自身的一种防御和保护机制，能够识别和清除外来异物的侵袭，处理衰老、变异、受损、死亡的自体细胞，消灭体内突变细胞和遭病毒感染细胞，是人体自我保护的生理反应。免疫力低下的表现为长期疲乏无力、精神不振、营养不良、体质虚弱，此类人群更易感染各种疾病，而且容易罹患癌症等。现有技术中有蛹虫草多肽的制备工艺，也有提高免疫力的食品的加工制备，而国内专利中未见有从蛹虫草中提取显著增强免疫力的蛋白肽的方法和报道。目前人工养殖蛹虫草的数量越来越多，虫草素、虫草多糖的提取也越来越多，从其剩余物中提取具有生物活性的蛋白肽的方法，不仅实现了蛹虫草的综合利用，也为特医食品和保健食品提供一种更安全优质的功能性蛋白肽。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种能够显著增强人体免疫力的蛹虫草蛋白肽及其制备方法。蛹虫草蛋白肽的制备方法包括以下步骤：(1)将原料进行超微粉碎，加水搅拌；(2)加入蒸馏水调节底物质量浓度为10-100mg/mL，温度为35-75℃，加入菠萝蛋白酶0.1-5％，水解1-10h，水解结束，沸水浴5min终止酶解反应。离心取上清液。(3)活性炭脱色：在上清液中加入0.1-1.1％的活性炭，30-70℃条件下脱色15-75min，脱色结束后，离心取上清液。(4)将所得上清液通过超滤处理，收集所得滤液。进一步，步骤(1)中，原料为蛹虫草子实体和/或蛹虫草子座经热水浸提虫草素后的剩余物。原料经超微粉碎后，应在热水浴中进行搅拌，温度为90-95℃，搅拌时间15min，此温度条件下足以对原料进行灭菌并且让原料中的蛋白质适度变性，提高蛋白对于酶的敏感性，利于后续酶解反应的发生。作为优选，步骤(2)中，离心的条件为4000-10000g，时间5-15min。该离心条件下能够实现物料的有效分离，且产品具有较高的得率。进一步，步骤(3)中的活性炭添加量为上清液体积的0.1-1.1％，离心条件为4000-10000g，离心时间5-15min。进一步，步骤(4)中的超滤法为先用孔径为5000D的膜超滤上清液，收集滤出液，得到分子量小于5000D的蛋白肽酶解液。再将滤液过3000D的膜，收集滤出液和浓缩液，分别得到分子量小于3000D和3000D-5000D的酶解液。此酶解液即为具有显著增强免疫力的蛹虫草蛋白肽液。进一步，将步骤(4)中的蛹虫草蛋白肽液进行浓缩干燥即得到具有显著增强免疫力的蛹虫草蛋白肽粉。上述方法制备的蛹虫草蛋白肽属于本专利技术的保护范围。本专利技术通过实验发现，本专利技术上述方法制备得到的蛹虫草蛋白肽能够显著增强人体免疫力。本专利技术的有益效果在于：(1)本专利技术开发的能够显著增强人体免疫力的蛹虫草蛋白肽制备方法简单，较易实现产业化生产。(2)本专利技术整个酶解过程无需调节pH，不添加酸或碱，产品灰分较低。(3)本专利技术采用菠萝蛋白酶在较高温度对蛹虫草子实体和/或用热水浸提虫草素后的蛹虫草子实体剩余物进行酶解，该酶解条件下得到的蛹虫草蛋白肽具有较好的风味，苦味略低。(4)本专利技术开发的蛹虫草蛋白肽，其原料来源是食品，所用的蛋白酶也是食品级的，经过特定的酶解和分离技术获得，安全性高。(5)本专利技术开发的能够显著增强人体免疫力的蛹虫草蛋白肽能够广泛应用于功能性食品和特医食品。具体实施方式以下实施例仅用于说明本专利技术，但是不用来限制本专利技术的范围。除有特别说明，本专利技术中用到的各种试剂、原料均为市售品或者可以通过公知的方法制得的产品。实施例1：具有显著增强人体免疫力的蛹虫草蛋白肽的制备方法(1)选用经热水浸提虫草素后的蛹虫草剩余物100g进行超微粉碎，加入蒸馏水，使其底物浓度为50mg/mL，温度调节至95℃，搅拌10min。(2)将步骤(1)原料浆的温度调节到75℃，然后按照原料粉重量的3％加入3g菠萝蛋白酶，酶解1.5h，沸水浴5min，终止酶解反应，在4000g条件下离心5min，收集上清液。(3)将上清液温度调至45℃，加入0.5％的活性炭，脱色30min，脱色结束后，4000g条件下离心10min，取上清液。(4)步骤(3)中的上清液先用孔径为5000D的膜超滤上清液，收集滤出液，得到分子量小于5000D的蛋白肽酶解液。再将滤液过3000D的膜，收集滤出液和浓缩液，分别得到分子量小于3000D和3000D-5000D的酶解液。(5)将蛋白肽溶液真空浓缩到蛋白肽浓度为30-45％，再利用冷冻干燥得到。实施例2：具有显著增强人体免疫力的蛹虫草蛋白肽的制备方法(1)选用蛹虫草子实体100g进行超微粉碎，加入蒸馏水，使其底物浓度为50mg/mL，温度调节到95℃，搅拌10min。(2)将步骤(1)原料浆的温度调节到75℃，然后按照原料粉重量的5％加入5g菠萝蛋白酶，酶解1.5h，沸水浴5min，终止酶解反应，在4000g条件下离心5min，收集上清液。(3)将上清液温度调到45℃，加入0.5％的活性炭，脱色30min，脱色结束后，4000g条件下离心10min，取上清液。(4)步骤(3)中的上清液先用孔径为5000D的膜超滤上清液，收集滤出液，得到分子量小于5000D的蛋白肽酶解液。再将滤液过3000D的膜，收集滤出液和浓缩液，分别得到分子量小于3000D和3000D-5000D的酶解液。(5)将蛋白肽溶液真空浓缩到蛋白肽浓度为30-45％，再利用冷冻干燥得到。实验例1：脾淋巴细胞增殖实验通过脾淋巴细胞增殖实验，优选施例1不同分子量的蛹虫草蛋白肽的增殖效果，采用增殖效果好的分子量段的活性肽，进行增强免疫力效果评价。1、脾淋巴细胞增殖实验小鼠脾淋巴细胞制备：小鼠禁食12h，摘眼球放血后脱颈致死，在75％的乙醇中浸泡3-5min，于超净工作台上打开腹腔，取出小鼠脾脏置于无菌的平皿中，去除外周结缔组织，用含双抗的PBS培养液清洗脾脏，去除血液。吸取PBS，再次用5mLPBS进行清洗，转移至200目不锈钢筛网上，挤压研磨，并用PBS轻轻冲洗筛网，制成细胞悬液。1500rpm离心5min，弃上清液。在细胞沉淀中加入2mL无菌水裂解红细胞20s，迅速加入2mL的2×PBS溶液摇匀终止裂解，再用4mL的1×PBS溶液振匀后1500rpm离心8min。PBS洗沉淀两次。将沉淀细胞悬浮于含10％小牛血清的RPMI1640完全培养液中，放置在5％的CO2培养箱37℃孵育4h，除去贴壁的细胞，悬浮的即为小鼠脾淋巴细胞。调整细胞浓度为2*10^6个/mL本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种具有显著增强免疫力的蛹虫草蛋白肽，其特征在于，其是由蛹虫草子实体或蛹虫草子座经热水浸提虫草素后的剩余物经菠萝蛋白酶酶解所得的。

【技术特征摘要】
1.一种具有显著增强免疫力的蛹虫草蛋白肽，其特征在于，其是由蛹虫草子实体或蛹虫草子座经热水浸提虫草素后的剩余物经菠萝蛋白酶酶解所得的。2.制备权利要求1所述的蛹虫草蛋白肽的方法，其特征在于，其制备方法包括以下步骤：(1)原料粉碎：将原料进行超微粉碎，加水搅拌；(2)多肽提取：加入蒸馏水调节底物质量浓度为10-100mg/mL，温度为35-75℃，加入菠萝蛋白酶0.1-5％，水解1-10h，水解结束，沸水浴15min终止酶解反应，离心取上清液。(3)活性炭脱色：在上清液中加入0.1-1.1％的活性炭，30-70℃条件下脱色15-75min，脱色结束后，离心取上清液。(4)多肽分离：将所得上清液通过超滤处理，收集所得滤液。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭珊珊，梁静，赵希峰，郭文江，陈金定，何涛，
申请(专利权)人：北京爱博优营养科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11