分离血小板的方法技术

本文提供了用于分离血小板的方法，例如，从脐带血分离血小板。在某些实施方式中，本文提供了用于制备富含血小板的血浆的方法。在一个方面，本文提供了用于从血液分离血小板的方法。在某些实施方式中，本文提供了用于从脐带血，例如人脐带血分离血小板的方法。分离的血小板可以用于自体或异体情况中的多种应用，包括，例如，伤口愈合，器官修复和/或再生，和/或组织修复和/或再生的方法。

Method for separating platelets

This article provides a method for separating platelets, for example, separating platelets from umbilical cord blood. In some embodiments, methods for preparing platelet rich plasma are provided in this paper. In one aspect, a method for separating platelets from blood is provided in this paper. In some embodiments, a method for separating platelets from umbilical cord blood, such as human umbilical cord blood, is provided. The isolated platelets can be used in a variety of applications in autologous or allogeneic conditions, including, for example, wound healing, organ repair and / or regeneration, and / or tissue repair and / or regeneration methods.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】分离血小板的方法相关申请本申请要求2014年12月31日提交的62/098,795号美国临时专利申请的优先权。其全部内容在此通过引用并入本文。1.
本文提供了用于分离血小板的方法，例如，从脐带血分离血小板。在某些实施方式中，本文提供的方法包括制备富含血小板的血浆(PRP)。2.
技术介绍
血小板是血液的正常细胞成分。虽然血小板非常小，但已知血小板含有各种类型的囊泡，其携带许多的因子，例如生长因子，具有潜在的有益特征。3.
技术实现思路
在一个方面，本文提供了用于从血液中分离血小板的方法。在某些实施方式中，本文展示了用于从脐血(例如，人脐带血)分离血小板的方法。该分离的血小板可以用于多种应用，包括，例如自体的或异体的情况中的伤口愈合、器官修复和/或再生，和/或组织修复和/或再生的方法。在具体实施方式中，在从血液中去除红细胞后，将血小板从血液，例如脐带血，例如人脐带血分离。在具体实施方式中，在去除红细胞后，处理所得的血浆以将血浆中的血小板与其他的血浆成分(例如细胞成分，如白细胞)分离。在一个实施方式中，通过离心法从血液中去除红细胞。在另一个实施方式中，通过利用其中包含导致红细胞自发地或通过离心而沉降的成分的介质从血液中去除红细胞。在一个具体的实施方式中，这种介质包含血浆增量剂(plasmavolumeexpander)，例如羟乙基淀粉(hetastarch)或喷他淀粉(pentastarch)。在一个实施方式中，在从血液(例如脐带血，例如人脐带血)中去除红细胞后，处理所得到的血浆以富集血浆中存在的血小板，从而产生富含血小板的血浆(PRP)。例如，可以耗减血浆的白细胞，从而富集血浆的血小板成分。在一个具体的实施方式中，血浆可以离心，例如，以200至500xg(例如300-400xg)离心，持续足够的时间将白细胞与血浆中的血小板分离，例如持续5、10、15、20、25或30分钟，例如10-30分钟、10-20分钟或10-15分钟。在这样的实施方式中，所得到的白细胞耗减的血浆是富含血小板的血浆(PRP)。在某些实施方式中，在使用或储存之前，可以处理PRP以产生所需的血小板浓度。在一个实施方式中，例如，可以在2000xg至4000xg(例如2000xg)下将PRP离心10-20分钟，例如15分钟，从而沉淀(pelleting)并去除所得上清液，以产生所需的PRP血小板浓度。在其他实施方式中，例如，可以在500xg至2000xg下将PRP离心20-60分钟以产生所需的PRP血小板浓度。在具体的实施方式中，在血液已经被处理以从血液中分离干细胞后，血小板从血液(例如脐带血，例如人脐带血)分离。在其他具体实施方式中，可以从血液(例如脐带血，例如人脐带血)中分离血小板而无需在先的干细胞保存。例如，可以通过离心(例如通过100-500xg，例如100-200xg)10-30分钟(例如20-25分钟)处理血液(例如脐带血，例如人脐带血)以产生PRP。然后可以将所得的PRP加工以使血小板沉淀并从剩余的血浆中移除。在某些实施方式中，PRP在使用前缓冲处理。在另一个实施方式中，将PRP中的血小板与血浆的其余部分分离(例如，通过离心)，并在使用前重新悬浮于缓冲液中。在某些实施方式中，PRP在使用前缓冲处理。在另一个实施方式中，将PRP中的血小板与血浆的其余部分分离(例如，通过离心)，并在使用前重新悬浮于缓冲液中。在一个实施方式中，PRP可以在产生后立即使用。在某些实施方式中，PRP在使用之前被缓冲处理。在另一个实施方式中，将PRP中的血小板与血浆的其余部分分离(例如，通过离心)，并在使用前重新悬浮于缓冲液中。在另一个实施方式中，PRP可以储存以供进一步使用。例如，PRP可以被冷冻或以其他方式冷冻保存以供进一步使用。在其他实施方式中，可将PRP冷冻干燥以供进一步使用。例如，冷冻干燥的PRP可以被冷冻保存。在另一个实例中，冷冻干燥的PRP可以在室温下真空储存。在另一个实施方式中，将PRP中的血小板与血浆的其余部分分离(例如，通过离心)，并在储存之前重新悬浮于缓冲液中。例如，PRP中的血小板可以例如，通过离心与血浆的其余部分分离，并在冷冻或者以其他方式冷冻保存以供进一步使用之前重新悬浮在缓冲液中。在其他实施方式中，PRP中的血小板例如，通过离心与血浆的其余部分分离，并且在冷冻干燥以供进一步使用之前重新悬浮在缓冲液中。冷冻干燥的血小板可以例如，冷冻保存。在另一个实例中，冷冻干燥的血小板可以在室温下真空储存。在某些实施方式中，PRP在储存之前被缓冲处理。在另一个实施方式中，PRP中的血小板例如，通过离心与血浆的其余部分分离，并且在储存之前重新悬浮在适合于储存(例如冷冻保存)的缓冲液中。在某些方面，本文提供了包含分离的PRP的组合物，其被配制以施用于个体，例如通过注射(例如局部注射)施用。在某些其他的方面，本文提供了包含分离的血小板的组合物，其被配制以施用于个体，例如通过注射(例如局部注射)施用。在某些方面，本文提供了包含分离的PRP和干细胞(例如胎盘干细胞(PDAC))的组合物。在某些实施方式中，将这类组合物配制以施用于个体，例如通过注射(例如局部注射)施用。在某些其他的方面，本文提供了包含分离的血小板和干细胞(例如PDAC)的组合物。在某些实施方式中，这类组合物被配制以施用于个体，例如通过注射(例如局部注射)施用。在一些实施方式中，将PRP和干细胞(例如胎盘干细胞)组合以在施用(例如注射)于个体之前在体外形成所述组合物。在其他实施方式中，在第一步中将PRP施用(例如注射)于个体，和在第二步中在PRP施用部位处或其附近将干细胞(例如，胎盘干细胞)施用(例如注射)于个体，从而在体内形成该组合物。在再其他实施方式中，在第一步中将干细胞(例如，胎盘干细胞)施用(例如注射)于个体，和在第二步中在干细胞施用部位处或其附近将PRP施用(例如注射)于个体，从而在体内形成该组合物。在其他实施方式中，将血小板和干细胞(例如胎盘干细胞)组合以在施用(例如注射)于个体之前在体外形成所述组合物。在其他实施方式中，在第一步中将血小板施用(例如注射)于个体，和在第二步中在血小板施用部位处或其附近将干细胞(例如，胎盘干细胞)施用(例如注射)于个体，从而在体内形成该组合物。在再其他实施方式中，在第一步中将干细胞(例如，胎盘干细胞)施用(例如注射)于个体，和在第二步中在干细胞施用部位处或其附近将血小板施用(例如注射)于个体，从而在体内形成该组合物。在具体的实施方式中，所述PDAC是CD10+、CD34–、CD105+、CD200+胎盘干细胞。在另一个具体实施方式中，所述PDAC表达CD200并且不表达HLA-G；或表达CD73、CD105和CD200；或表达CD200和OCT-4；或表达CD73和CD105，并且不表达HLA-G。在再其他实施方式中，所述PDAC表达CD44、CD90、HLA-A,B,C或ABC-p中的一种或多种，和/或不表达CD45、CD117、CD133、KDR、CD80、CD86、HLH-DR、SSEA3、SSE4或CD38中的一种或多种。在某些实施方式中，胎盘干细胞抑制免疫细胞的活性，例如抑制T细胞的增殖。在一些实施方式中，组合物中PRP与干细本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于从血液分离血小板的方法，其包括：从血液去除红细胞以产生血浆，以及从所述血浆分离白细胞。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.12.31 US 62/098,7951.一种用于从血液分离血小板的方法，其包括：从血液去除红细胞以产生血浆，以及从所述血浆分离白细胞。2.如权利要求1的方法，其中通过离心所述血液去除所述红细胞。3.如权利要求2所述的方法，其中通过将血浆增量剂引入所述血液中来去除所述红细胞。4.如权利要求3所述的方法，其中在将所述血浆增量剂引入所述血液中之后，红细胞自发地沉降。5.如权利要求3所述的方法，其中在将所述血浆增量剂引入所述血液中之后，通过离心使红细胞沉降。6.如权利要求3至5中任一项所述的方法，其中所述血浆增量剂是羟乙基淀粉或喷他淀粉。7.如权利要求1至6中任一项所述的方法，其中将所述血浆离心足够的时间以分离白细胞和血浆中的血小板，从而产生富含血小板的血浆(PRP)。8.如权利要求7所述的方法，其中在约200xg至约500xg下离心所述血浆。9.如权利要求7或8所述的方法，其中在约300xg至约400xg下离心所述血浆。10.如权利要求7至9中任一项所述的方法，其中将所述血浆离心约5至约30分钟。11.如权利要求10所述的方法，其中将所述血浆离心约10至约30分钟。12.如权利要求11所述的方法，其中将所述血浆离心约10至约20分钟。13.如权利要求12所述的方法，其中将所述血浆离心约10至约15分钟。14.一种用于从血液分离血小板的方法，其包括：将所述血液以约100xg至约500xg离心约10分钟至约30分钟，从而产生PRP。15.如权利要求14的方法，包括以约100xg至约200xg离心所述血液。16.如权利要求14或15的方法，包括将所述血液离心约20至约25分钟。17.如权利要求7至16中任一项所述的方法，还包括缓冲处理所述PRP。18.如权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：M·霍拉什迪，
申请(专利权)人：人类起源公司，
类型：发明
国别省市：美国,US