一种白色牛樟芝子实体的培养方法及其培养基技术

本发明专利技术提供一种白色牛樟芝子实体的培养方法，包括以下步骤：(1)将白色牛樟芝子实体进行切片获得子实体切片；(2)将步骤(1)得到的子实体切片采用菌种培养基进行菌种纯化得到白色牛樟芝菌种；(3)配制培养基；将所述白色牛樟芝菌种接菌至所述培养基上进行培养；以及(4)对接菌在培养基上的白色牛樟芝菌种进行生长环境调控培养。本申请采用人工栽培方法来培养白色牛樟芝，利用培养皿来培养白色牛樟芝子实体，并进行生长环境调控培养，用于缩短培养时间，并提升培养成功率以及产量。

A method for culture of white Antrodia fruitbody and culture medium

The invention provides a method for cultivating white Antrodia fruiting body, which comprises the following steps: (1) the white a.cinnamomea fruiting body slices acquired slices; (2) the step (1) obtained by sub slices bacteria strains were purified from bovine white Antrodia camphorata; (3) preparation of culture medium; the white a.cinnamomea strains inoculated to the culture medium; and (4) docking bacteria growth environment control in medium on white a.cinnamomea strains. This application uses artificial cultivation method to cultivate white a.cinnamomea, using Petri dish to develop white a.cinnamomea fruiting bodies, and the growth environment of regulation culture, to shorten the culture time, and improve the success rate of cultivation and production.

【技术实现步骤摘要】
一种白色牛樟芝子实体的培养方法及其培养基
本专利技术属于食药用菌栽培
，涉及一种白色牛樟芝子实体的培养方法及其培养基。
技术介绍
牛樟芝(Antrodiacinnamomea)属于非折菌目、多孔菌料、薄孔菌属、樟芝种，乃多年生蕈菌类。牛樟芝为台湾特有的菌种，仅生长于台湾特有种牛樟树的中空树洞中，且生长缓慢。牛樟芝含有丰富的活性物质，牛樟芝子实体已知的生理活性成份主要有：多醋体(polysaccharides)、三萜类(triterpenoids)、超氧歧化酶(suproxidedismutase,SOD)、腺苷(adenosines)、麦角固醇(ergosterols)等；其中，三萜类化合物具有多种生物活性，如保肝护肝、调节免疫、抑制血管新生、抗肿瘤、抗炎症、抗氧化、降血压等。大量文献表明，牛樟芝具有多种生物活性，牛樟芝子实体在治疗肝病(hepaticdisease)、无名肿毒、发热(fever)、糖尿病、高血压、解酒及抗癌等皆显示器具有高度发展潜力。由于野生牛樟芝数量稀少取得不易，并且有遭受环境污染的问题，因此近年来多以人工栽培方法来培养牛樟芝，目前主要生产牛樟芝培育方法系有液态培养法、固态培养法及椴木培养法。牛樟芝子实体形态丰富多变，有板状、钟状、马蹄状或塔状，初生时为鲜红色，渐长变为淡红褐色、淡褐色或淡黄褐色。野生白色牛樟芝甚为稀少，而以人工栽培方法来培养白色牛樟芝更为少见，因此白色牛樟芝在市场上更为稀有及珍贵。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种白色牛樟芝子实体的培养方法，其是自野生牛樟芝顺利分离出白色牛樟芝菌种并接种至含有培养基的培养皿，进一步的将培养基的成份及其含量作适当的调整，以及培养环境的刺激以培养白牛樟芝子实体的培养方法。本专利技术所要解决的另一技术问题在于提供一种用于培养白色牛樟芝子实体的培养基。为解决上述技术问题，本专利技术采用了以下技术方案实现：本专利技术的一种白色牛樟芝子实体的培养方法，包括以下步骤：(1)将白色牛樟芝子实体进行切片获得子实体切片；(2)将步骤(1)得到的子实体切片采用菌种培养基进行菌种纯化得到白色牛樟芝菌种；(3)配制培养基；将所述白色牛樟芝菌种接菌至所述培养基上进行培养；以及(4)对接菌在培养基上的白色牛樟芝菌种进行生长环境调控培养。进一步的，其中所述步骤(2)中的菌种纯化方法包括：将子实体切片接种于含有菌种培养基的培养皿中，经过4～6次的移植后，确认无杂菌出现即可获得白色牛樟芝菌种；所述菌种培养基至少包括：质量浓度为1～3％w/w马铃薯葡萄糖提取物(potatodextrosebroth,PDB)以及质量浓度为0.5～1.5％w/w的琼脂(agar)。其中，马铃薯葡萄糖提取物(potatodextrosebroth,PDB)，可采用马铃薯葡萄糖肉汤。进一步的，所述步骤(3)中配制培养基包括：依比例混合培养基的各组成成分，所述培养基的组成成分包括：质量浓度为2～4％w/w的马铃薯葡萄糖提取物，质量浓度为2～4％w/w的小麦提取物(Maltextract)，质量浓度为0.1～0.3％w/w的氮源，质量浓度为0.5～0.6％w/w的琼脂(agar)，和质量浓度为5～7％w/w的蔗糖(sucrose)；其中，所述氮源可采用：胺基酸、蛋白胨、酵母萃取物或牛肉萃取物等，优选的可采用胺基酸(aminoacids)；将各组成成分混合后，放入一个至多个可灭菌容器中并加入逆渗透水搅拌均匀使其溶解(逆渗透水加入量以使各组成成分达到所需的浓度为准)；将溶解后的培养基原液放入灭菌釜；设定条件为121℃，15～30分钟进行灭菌处理，将灭菌后的培养基溶液倒入培养皿，静置冷却后即可得到固态培养基。进一步的，所述步骤(2)中将白色牛樟芝子实体切片在含有菌种培养基的培养皿中培养，培养温度控制在22～30℃。进一步的，所述步骤(4)中对所述接菌在培养基上的白色牛樟芝菌种进行生长环境调控培养包括：低温刺激培养、刀伤刺激培养和光线刺激培养中的至少一种。优选的，所述步骤(4)中对所述接菌在培养基上的白色牛樟芝菌种进行低温刺激培养，其中低温刺激温度范围4℃至15℃。所述低温刺激培养是将其培养温度范围设定为4～15℃用以模拟牛樟芝在自然环境下冬天的温度，用以对牛樟芝菌种进行低温刺激，促进其二次代谢物产生。优选的，所述步骤(4)中对所述接菌在培养基上的白色牛樟芝菌种进行刀伤刺激培养，包括：采用刀片或针头在白色牛樟芝制造多个1～2公分的伤痕，用于二次代谢物合成以及重量的增加。优选的，所述步骤(4)中对所述接菌在培养基上的白色牛樟芝菌种进行光线刺激培养，包括对所述接菌在培养基上的白色牛樟芝菌种在光照环境下进行光线刺激培养；其中，所述光照环境选用红光或蓝光，所述光照环境的照光强度为5μmol/S.m2至20μmol/S.m2。通过光线刺激，以刺激二次代谢物增生，提高牛樟芝的活性成份的含量。优选的，当所述光照环境为红光时，该光照环境的照光强度为12μmol/S.m2至20μmol/S.m2；或当光照环境为蓝光时，该光照环境的照光强度为8μmol/S.m2至16μmol/S.m2。本专利技术的另一目的在于，提供一种用于培养白色牛樟芝子实体的培养基，所述培养基至少包括：马铃薯葡萄糖提取物，其质量浓度为2～4％w/w；小麦提取物(Maltextract)，其质量浓度为2～4％w/w；氮源，其质量浓度为0.1～0.3％w/w，其中，所述氮源可采用：胺基酸、蛋白胨、酵母萃取物或牛肉萃取物；优选的，氮源可采用胺基酸(aminoacids)；琼脂(agar)，其质量浓度为0.5～0.6％w/w；和蔗糖(sucrose)，其质量浓度为5～7％w/w。本专利技术的白色牛樟芝子实体的培养方法及其培养基的有益效果还在于：本申请利用培养皿来培养白色牛樟芝子实体，并进行生长环境调控培养(低温刺激培养、刀伤刺激培养和光线刺激培养中的至少一种)，用于缩短培养时间，并提升培养成功率以及产量。本申请利用自制的培养基加入到培养皿中对白色牛樟芝菌种进行培养，并通过生长环境进行调控培养，以通过培养基缩短培养时间，而通过生长环境刺激以促进二次代谢物产生，提升培养成功率以及产量，经过本培养基结合生长环境刺激可缩短培养时间的同时，大大增加牛樟芝的活性成份的含量。本申请采用人工栽培方法来培养白色牛樟芝，且培育得到的牛樟芝成分种类对比现有技术栽培的牛樟芝更加多元。附图说明通过阅读下文优选实施方式的详细描述，各种其他的优点和益处对于本领域普通技术人员将变得清楚明了。附图仅用于示出优选实施方式的目的，而并不认为是对本专利技术的限制。在附图中：图1为白色牛樟芝子实体培养流程图；图2为以三组不同培养基进行白色牛樟芝培养，测定各组白色牛樟芝平均重量以及95％乙醇萃取率的结果示意图；图3为以两种不同温度进行低温刺激白色牛樟芝生长，测定各组白色牛樟芝平均重量、95％乙醇萃取率的结果示意图；图4为以不同光照强度刺激比较白色牛樟芝生长，测定各组白色牛樟芝平均重量、95％乙醇萃取率的结果示意图；图5为以刀伤刺激的有无比较白色牛樟芝生长，测定各组白色牛樟芝平均重量、95％乙醇萃取率的结果示意图；图6为白色牛樟芝酒精萃取物的HPLC层析图谱；图7为市售椴木培养牛樟芝(红色)酒精萃本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种白色牛樟芝子实体的培养方法，其特征在于：所述培养方法包括以下步骤：(1)将白色牛樟芝子实体进行切片获得子实体切片；(2)将步骤(1)得到的子实体切片采用菌种培养基进行菌种纯化得到白色牛樟芝菌种；(3)配制培养基；将所述白色牛樟芝菌种接菌至所述培养基上进行培养；以及(4)对接菌在培养基上的白色牛樟芝菌种进行生长环境调控培养。

【技术特征摘要】
1.一种白色牛樟芝子实体的培养方法，其特征在于：所述培养方法包括以下步骤：(1)将白色牛樟芝子实体进行切片获得子实体切片；(2)将步骤(1)得到的子实体切片采用菌种培养基进行菌种纯化得到白色牛樟芝菌种；(3)配制培养基；将所述白色牛樟芝菌种接菌至所述培养基上进行培养；以及(4)对接菌在培养基上的白色牛樟芝菌种进行生长环境调控培养。2.根据权利要求1所述的白色牛樟芝子实体的培养方法，其特征在于：其中所述步骤(2)中的菌种纯化方法包括：将子实体切片接种于含有菌种培养基的培养皿中，经过4～6次的移植后，确认无杂菌出现即可获得白色牛樟芝菌种；所述菌种培养基至少包括：质量浓度为1～3％w/w的马铃薯葡萄糖提取物以及质量浓度为0.5～1.5％w/w的琼脂。3.根据权利要求1所述的白色牛樟芝子实体的培养方法，其特征在于：所述步骤(3)中配制培养基包括：依比例混合培养基的各组成成分，所述培养基的组成成分至少包括：质量浓度为2～4％w/w的马铃薯葡萄糖提取物，质量浓度为2～4％w/w的小麦提取物，质量浓度为0.1～0.3％w/w的氮源，质量浓度为0.5～0.6％w/w的琼脂，和质量浓度为5～7％w/w的蔗糖；其中，所述氮源可采用：胺基酸、蛋白胨、酵母萃取物或牛肉萃取物；将各组成成分混合后，放入一个至多个可灭菌容器中并加入逆渗透水搅拌均匀使其溶解；将溶解后的培养基原液放入灭菌釜；设定条件为121℃，15～30分钟进行灭菌处理，将灭菌后的培养基溶液倒入培养皿，静置冷却后即可得到固态培养基。4.根据权利要求1或2或3所述的白色牛樟芝子实体的培养方法，其特征在于：所述步骤(2)中将白色牛樟芝子实体切片在含有菌种培养基的培养皿中培养，培养温度控制在22～30℃。5.根据权利要求1或2...

【专利技术属性】
技术研发人员：钟承翰，钟佳颖，张嘉穎，
申请(专利权)人：永腾生技有限公司，
类型：发明
国别省市：中国台湾,71