染色体基因引物对和探针组合以及染色体核酸检测试剂盒制造技术

及一种基因引物与探针的组合以及包含该组合的试剂盒。更确切的说，是一种染色体基因引物对和探针组合以及染色体核酸检测试剂盒。属于医用检测领域。一种染色体基因引物对和探针组合，包括一个探针、一对染色体基因引物，其特征在于：所述探针为TaqMan探针，所述一对染色体基因引物为一对基因序列反向的引物；具有适用于无创基因管游离DNA保存效果鉴定、游离DNA提取效果鉴定、单细胞DNA提取效果鉴定、法医鉴定。

Chromosome gene primer pair and probe combination and chromosome nucleic acid detection kit

A combination of a gene primer and a probe, and a kit comprising the combination. Rather, a chromosome gene primer pair, a probe combination, and a nucleic acid nucleic acid detection kit. The utility model belongs to the field of medical examination. A chromosomal gene primer and probe combinations, including a probe, a pair of primers of chromosome, which is characterized in that the probe TaqMan probe, the pair of chromosome gene primers for the primer pair sequences reverse; is suitable for noninvasive gene identification, preservation tube free DNA free DNA extraction the effect of single cell identification, forensic identification, extraction DNA.

【技术实现步骤摘要】
染色体基因引物对和探针组合以及染色体核酸检测试剂盒
本专利技术涉及一种基因引物与探针的组合以及包含该组合的试剂盒。更确切的说，是一种染色体基因引物对和探针组合以及染色体核酸检测试剂盒。属于医用检测领域。
技术介绍
目前检测染色体一般采用原位杂交技术(FISH),其缺点:自身杂交物的干扰，不稳定、时间长、操作较繁琐等，特别是在应用较短的cDNA探针时效率明显下降。使测试结果造成错误，正确率难以保证。针对有效游离DNA保存、提取鉴定方法，日益引起广大医学家的关注。现有技术中，缺少有效鉴定游离DNA、DNA保存效果，及游离DNA、DNA提取效果的技术和检测试剂盒。为此，需要设计一种染色体基因引物对和探针组合以及染色体核酸检测试剂盒，具有适用于无创基因管游离DNA保存效果鉴定、游离DNA提取效果鉴定、单细胞DNA提取效果鉴定、法医鉴定。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了解决现有技术中缺少有效鉴定游离DNA、DNA保存效果及游离DNA、DNA提取效果的技术和相关检测试剂盒的问题；提供一种染色体基因引物对和探针组合以及染色体核酸检测试剂盒通过探针与染色体基因引物对的组合适用于无创基因管游离DNA保存效果鉴定、游离DNA提取效果鉴定、单细胞DNA提取效果鉴定、法医鉴定。本专利技术通过如下技术方案达到：一种染色体基因引物对和探针组合，包括一个探针、一对染色体基因引物，其结构特点是：所述探针为TaqMan探针，所述一对染色体基因引物为一对基因序列反向的引物；所述探针的序列为：ACGCGGCTGGTGGATCAGTGCT；所述第一引物对中的正向引物的序列为TTATGAGCGCGAAGCAAACG；所述第一引物对中的反向引物的序列为：CCGTGGGTGGTCTTTACCG。一种染色体核酸检测试剂盒，包括Chromosome反应混合液、DNA提取液I；所述Chrmosome反应混合液包括Taq酶系、dNTP缓冲液混合物终浓度1×加量25μl、如权利要求1所述的正向引物25pmol/μl终浓度30～900nM加量1μl、如权利要求1所述的反向引物25pmol/μl终浓度30～900nM加量1μl、如权利要求1所述的探针25pmol/μl终浓度200nM加量0.5μl、无菌去离子水加量20.5μl。所述DNA提取液I包括Na0H100mmol/L、EDTA1.5mmol/L、Tristonx-10050mmol/L、1％NP-40、pH＝8.0的Tris-Hc150mmol/L。本专利技术有益效果本专利技术适用于无创基因管游离DNA保存效果鉴定、游离DNA提取效果鉴定、单细胞DNA提取效果鉴定、法医鉴定，检测精确，避免了漏检。【附图说明】图1为第一引物对和探针PCR荧光扩增原理图；图2为核酸扩增荧光检测结果分析阴性图；图3为核酸扩增荧光检测结果分析阳性图。具体实施例以下本实施例结合附图具体阐述本专利技术：一种染色体基因引物对和探针组合，包括一个探针、一对染色体基因引物，其结构特点是：所述探针为TaqMan探针，所述一对染色体基因引物为一对基因序列反向的引物；所述探针的序列为：ACGCGGCTGGTGGATCAGTGCT；所述第一引物对中的正向引物的序列为TTATGAGCGCGAAGCAAACG；所述第一引物对中的反向引物的序列为：CCGTGGGTGGTCTTTACCG。一种染色体核酸检测试剂盒，包括Chromosome反应混合液、DNA提取液I；所述Chrmosome反应混合液包括Taq酶系、dNTP缓冲液混合物终浓度1×加量25μl、如权利要求1所述的正向引物25pmol/μl终浓度30～900nM加量1μl、如权利要求1所述的反向引物25pmol/μl终浓度30～900nM加量1μl、如权利要求1所述的探针25pmol/μl终浓度200nM加量0.5μl、无菌去离子水加量20.5μl。所述DNA提取液I包括Na0H100mmol/L、EDTA1.5mmol/L、Tristonx-10050mmol/L、1％NP-40、pH＝8.0的Tris-Hc150mmol/L。使用该染色体核酸检测试剂盒，实验证明：100例样本，用单细胞基因序列提取液提取单细胞DNA产物30例，样本编号D160501-D160530使用该染色体核酸扩增荧光检测试剂盒来鉴定提取效果，染色体基因阳性，其平均浓度为(560000.00±50.00)拷贝/毫升。如使用现有技术的上海医脉赛科技有限公司提供的核酸提取试剂盒的磁珠法，血浆游离DNA提取试剂盒提取无创基因管保存3天的40名孕妇游离DNA，样本编号C160531-C160570，染色体基因阳性，其平均浓度为(570.00±80.00)拷贝/毫升；其它试管保存3天的30名孕妇游离DNA，样本编号E160971-E1609100均为阴性。结论用染色体核酸检测试剂盒鉴定提取、保存效果有效，即呈阳性时游离DNA、DNA提取成功或保存有效；呈阴性时游离DNA、DNA提取或保存失败。样本数据显示如下：参照附图1至3，以上表格表示呈阳性时游离DNA、DNA提取成功或保存有效；呈阴性时游离DNA、DNA提取或保存失败。广泛应用于无创基因管游离DNA保存效果鉴定、游离DNA提取效果鉴定、单细胞DNA提取效果鉴定、法医鉴定等。实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。以下为检测原理：Ct值的定义：在荧光定量PCR技术中，C代表Cycle，t代表threshold，Ct值的含义是：每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数荧光域值(threshold)的设定PCR反应的前10个循环的荧光信号作为荧光本底信号，荧光域值的缺省设置是3-10个循环的荧光信号的标准偏差的10倍，即：threshold＝10′SDcycle6-10Ct值与起始模板的关系研究表明，每个模板的Ct值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系即起始拷贝数越多，Ct值越小。只要获得未知样品的Ct值，即可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数。荧光定量PCR所使用的荧光化学现将其原理简述如下：TaqMan荧光探针：PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5'－3'外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。现有技术中上海医脉赛科技有限公司提供的核酸提取试剂盒---磁珠法，该试剂盒适合于从血浆等无细胞组织液中提取游离DNA(CirculatingfreeDNA,cfDNA)片段。该试剂盒中的提取过程，具体操作步骤请按照该试剂盒说明书指引进行。染色体核酸检测试剂盒：【检验原理】本试剂盒利用荧光PCR技术，以Chromosome基因组中相对保守区为靶区域，设计特异性引物及荧光探针，在样本核酸纯化之后，通过PCR对ChromosomeDNA进行快速检测。使用本试剂盒提供的核酸提取本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种染色体基因引物对和探针组合，包括一个探针、一对染色体基因引物，其特征在于：所述探针为TaqMan探针，所述一对染色体基因引物为一对基因序列反向的引物；所述探针的序列为：ACGCGGCTGGTGGATCAGTGCT；所述第一引物对中的正向引物的序列为TTATGAGCGCGAAGCAAACG；所述第一引物对中的反向引物的序列为：CCGTGGGTGGTCTTTACCG。

【技术特征摘要】
1.一种染色体基因引物对和探针组合，包括一个探针、一对染色体基因引物，其特征在于：所述探针为TaqMan探针，所述一对染色体基因引物为一对基因序列反向的引物；所述探针的序列为：ACGCGGCTGGTGGATCAGTGCT；所述第一引物对中的正向引物的序列为TTATGAGCGCGAAGCAAACG；所述第一引物对中的反向引物的序列为：CCGTGGGTGGTCTTTACCG。2.一种染色体核酸检测试剂盒，包括Chromosome反应混合液、DNA提取液I；所述Chrmosome反应混合液包括T...

【专利技术属性】
技术研发人员：王秋丰，曾钊宇，麦梅珍，李新民，胡松，李政江，冯进旺，
申请(专利权)人：胡松，
类型：发明
国别省市：广东,44