本发明专利技术包括制备ＴＢＯ药物产物的改进方法，该方法包括以下步骤：（１）合成吲达胺；（２）将所述吲达胺转化为Ｓ－吲达胺基硫代硫酸根；（３）向所述Ｓ－吲达胺基硫代硫酸根中加入氧化催化剂、络合剂和酸以制备ＴＢＯ和Ｃ－４－甲基区域异构体及其衍生物。本发明专利技术还包括新的组合物，所述组合物用于检测和治疗异常组织，即ＴＢＯ产物主要含有峰八和／或峰六。以Ｎ，Ｎ－二甲基对苯二胺为起始物料获得的ＴＢＯ产物组合物中含有峰八、七、六和五，其比例约为３３∶５∶５∶１。以Ｎ－二甲基对苯二胺作为起始物料获得的ＴＢＯ脱甲基化产物组合物中含有峰六、五、三和二，其比例约为３３∶５∶５∶１。本发明专利技术还包括分析改善的ＴＢＯ药物产物的ＨＰＬＣ改进方法，其改进包括在第一流动相中加入离子对试剂和形成含有５０体积％醇的第二流动相组合物。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及适合于人体内应用的新型的生物学染色诊断组合物和/或化疗组合物。更具体地说，本专利技术涉及新型的甲苯胺蓝O(“TBO”)染料产物，其中含有特定比例的TBO及特定的TBO衍生物。本专利技术涉及含有这些新型TBO产物的TBO组合物的新的制造方法。本专利技术还涉及新的改进的高效液相色谱(HPLC)分析法，该方法用于确定含有这些新型的TBO产物的TBO组合物的组成。所述改进的HPLC法可以更明确地将对应于有机染料成分的峰与对应于降解产物的峰分开。另外，改进的HPLC分析方法可以显示出活性有机染料组合物相对于降解产物的稳定性。本专利技术还涉及在体内应用该新型TBO组合物来识别可疑的异常结构即不正常组织的方法。本专利技术还涉及在体内应用该新型TBO组合物的方法，所述组合物用作治疗癌性或癌前期组织的化疗药剂。在另一方面，本专利技术还涉及组合物、采用该组合物进行体内诊断的方法、采用该组合物的治疗方法以及该组合物的制造方法，所述组合物特别适合于用作治疗癌性或癌前期组织的化疗药剂。
技术介绍
通常，鳞状细胞癌起初为表面病变，表现为红斑和轻微隆起。这些病变被称为增殖性红斑，且被描述为早期红斑样病变，其可以是原位癌或者是浸润癌。由于这些病变常常没有症状，因此应进行活检以确定该组织是否为恶性的。其他被称为黏膜白斑病的病变是纯白色的。在这些病变中，发现只有10％是原位癌或浸润癌。鳞状细胞癌的常见部位是口底、舌、软腭、扁桃体前柱、臼齿后三角区，据推测，这是因为口腔通常更易于与例如烟草中的致癌物质相接触。根据近来的研究，病变越深，存活百分比越低。＜2mm-95％2～9mm-80％＞9mm-65％此外，早期口腔癌患者的5年存活率为75％，但对于晚期患者的5年存活率仅为35％。(Emmanuella，J.，“Head and Neck CancerSquamousCell Carcinoma(头颈部肿瘤鳞状细胞癌)”，Medicine Journal(内科杂志)，第3卷，第1期，2002年1月3日)。因此，为了使头颈部肿瘤获得良好的预后，通过多种方法进行早期检查和治疗对于头颈部肿瘤是很重要的。已知上皮染色便于对异常上皮细胞、颗粒、变性上皮细胞或变性颗粒进行目视检查。事实上，已知在早期检查中采用染料TBO作为活检的最佳指示物。该染料被恶性细胞的线粒体所吸收。结果，TBO可以用于筛检试验和定位癌组织，因为它可以有效地将恶性或癌前期病变部位染成深蓝色，而不会将正常粘膜染色。Mashberg的美国专利4,321,251和Tucci等的美国专利5,372,801论述了这种体内诊断试验，这种试验可识别和描绘可疑的异常口腔组织。常规检查需用间接鼻咽镜和咽喉镜对头部和颈部进行完全的检查。如果发现异常或可疑的组织，通常随后进行细针刺吸活检以用于细胞学检查或切除活检。一旦确诊为癌，则推荐进行全身麻醉下的内窥镜检查，并对韦氏环、下咽部、鼻咽部和其他常见转移部位及任何可疑病变部位进行随机活检。建议进行全身常规血液学检查，以全面评估患者的身体状况以及扩散到远处器官的可能性。(Emmanuella，J.，“Head and NeckCancerSquamous Cell Carcinoma”，Medicine Journal，第3卷，第1期，2002年1月3日。)在2001年，世界知识产权组织(WIPO)的WO 01/64110号公开文本披露，TBO是用于选择性杀死癌细胞的有效染料。随后，WIPO的WO01/64255 A1号公开文本披露，这些WIPO公开文本中所披露的TBO组合物的峰八或峰六所代表的化合物与对癌细胞的主要化疗效果有关。因此，相对于该药物中的其它化合物，使峰八和峰六部分所代表的化合物的产量最大化是合乎需要的。TBO的经典的合成方法详尽地描述于Dandliker等的美国专利416,055中，其授权日为1889年11月30日。这种合成方法被描述为5个连续的步骤(1)在硫代硫酸钠存在下，用例如重铬酸钾将N，N-二甲基对苯二胺氧化，形成2-氨基-5-二甲基氨基苯基硫代硫酸(系统命名为“取代的S-苯基硫代硫酸根”)；(2)将硫代硫酸与邻甲苯胺缩合，形成相应的吲达胺-硫代硫酸(系统命名为“取代的S-吲达胺基硫代硫酸根”)；(3)例如在沸点温度，在氯化锌的存在下反应约30分钟，使吲达胺-硫代硫酸闭环，从而形成TBO；(4)然后将反应混合物冷却，并例如通过用氯化钠和氯化锌处理，使闭环反应的TBO产物络合和盐析，从而沉淀出TBO络合物，例如为TBO/ZnCl2络合物；最后(5)可以通过重复进行再溶解和再沉淀以完成纯化，例如，可以在热的氯化锌水溶液中进行再溶解并用氯化钠/氯化锌进行再沉淀。这些TBO组合物含有若干杂质，而且其中有机染料的含量有限。Dandliker等描述的制造方法一般得到染料含量低于80％的组合物。典型的TBO产物的高效液相色谱(HPLC)分析显示出8个主要的峰，其象征着代表组合物成分的化合物。真正的TBO指定为“峰八”，它是分子为N7，N7-二甲基化的且有一个甲基连接在C-2上的部分，如下所示 (峰八)目前已经知道，典型的TBO产物的染料含量包括TBO的C-4-甲基区域异构体(regioisomer)(与峰七对应)加上这些物质的N-脱甲基化和N，N-二脱甲基化的衍生物。此外，TBO的N-脱甲基化衍生物(与峰五和六对应)和它的C-4-甲基区域异构体通常占染料含量的大于20％。明确地说，其他部分包括(1)峰七，其中分子为N7，N7-二甲基化的且有一个甲基连接在C-4上，如下所示 (峰七)(2)峰六和峰五，其分别为由峰八和峰七经N-脱甲基化所得到的衍生物，如下所示 (峰六) (峰五)和(3)峰三和峰二，其分别为峰六和峰五进一步N-脱甲基化的产物。在现有技术的TBO组合物中，由于其杂质含量高、染料含量不确定以及真正的TBO含量相对较低，因此，为了得到满足规定要求的用于人类试验TBO组合物，需要开发可重复制备TBO药物的方法，由该方法制备的药物杂质含量低，染料种类含量稳定，有机染料总含量较高，且真正的TBO含量较高。在开发满足规定的TBO组合物的过程中，Burkett对TBO药物的组成、制备方法、用途和分析方法进行了改善，如美国专利6,086,852和6,194,573中所述。由于峰八或峰六所代表的化合物已知具有选择性标记以及选择性杀死癌细胞或癌前期细胞的能力，因此非常希望提供可以使这些化合物在TBO药物中含量最大化的方法，而不会过度增加费用及制备程序的复杂程度。本专利技术解决了上述问题，方法是提供使分别含有峰八和/或峰六的部分的含量最大化的TBO产物。于是，本专利技术提供人们最为期盼的组合物，该组合物用于鉴别或治疗异常组织的方法中。申请人现已发现了该方法、该方法的产物以及其药物产物的使用和分析方法。根据下面的详细描述，并结合附图，对于本领域技术人员，本专利技术及其实施中的各种方式是显而易见的。
技术实现思路
用于制备TBO的最接近现有技术的方法包括下列步骤(1)在第一反应混合物中氧化N，N-二甲基对苯二胺；(2)向所述第一反应混合物中加入含硫亲核试剂源，以形成第一中间体，即取代的S-苯基硫代硫酸根；(3)将所述第一中间体进一步氧化并将其与邻甲苯胺缩合以形成第二中间本文档来自技高网...
【技术保护点】
制造甲苯胺蓝Ｏ产物的方法，该方法顺序包括以下步骤：（ａ）在第一反应混合物中氧化起始物料Ｎ，Ｎ－二甲基对苯二胺；（ｂ）向所述第一反应混合物中加入含硫亲核试剂源，以形成第一中间体，即取代的Ｓ－苯基硫代硫酸根；（ｃ）将所述 第一中间体进一步氧化，并将其与邻甲苯胺缩合，以形成第二中间体，即取代的Ｓ－吲达胺基硫代硫酸根；（ｄ）进一步氧化所述第二中间体，以形成存在于第三反应混合物中的含有甲苯胺蓝Ｏ的反应产物；（ｅ）向至少其中一种所述反应混合物中加入甲 苯胺蓝Ｏ的络合剂；和（ｆ）从所述第三反应混合物中分离含甲苯胺蓝Ｏ的反应产物；在上述步骤的基础上所做的改进为，按顺序包括以下步骤：（ａ）在第一反应混合物中，在邻甲苯胺的存在下，氧化包括选自由Ｎ，Ｎ－二甲基对苯二胺和Ｎ－ 二甲基对苯二胺所组成的组中的至少一种化合物的起始物料，以形成第一中间体吲达胺，而没有形成Ｓ－苯基硫代硫酸根；然后（ｂ）向所述第一反应混合物中加入含硫亲核试剂源，以形成第二中间体Ｓ－吲达胺基硫代硫酸根。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
【专利技术属性】
技术研发人员：卡尔奥克洛托维茨，
申请(专利权)人：日拉生物技术公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。