Method and system for image is disclosed target fluorophore extraction in biological materials, including autofluorescence and fluorescence induced by biomaterials fluorescence two, images obtained by fluorescence and fluorescence of biological materials two produce, and the image is produced only by autofluorescence, subtraction of two images to produce images represent only the fluorophore, which in the image before the relative intensity modulation to the excitation light induced fluorescence and fluorescence.
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】在自体荧光存在下生物材料中目标荧光团的成像相关申请的交叉引用本申请涉及2014年9月29日提交的美国临时申请号62/056830,其公开内容通过引用结合到本文中。
本专利技术一般涉及荧光成像,且特别是涉及在自体荧光的存在下,生物材料中目标荧光团的成像。背景在生命科学中,荧光通常用作鉴定和分析生物材料的非侵入性方法。生物材料例如蛋白、核酸、脂质、细胞和细胞组分、干细胞或小分子中的特定目标可用外在或外生荧光团标记,因而随后成像。生物材料也自然会发荧光,其被称为内在荧光或“自体荧光”,因为它在不存在外生给予的荧光团的情况下出现。自体荧光被认为源自生物材料中的各种内生荧光团,包括例如烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)、弹性蛋白、胶原蛋白、黄素、氨基酸和卟啉。当用适当的激发波长的光照射生物材料时,自体荧光和荧光发射可以生成并记录为图像。然而,自体荧光,其是荧光团的组合的结果且以几百纳米扩展的宽发射光谱为特征,当荧光团和自体荧光的发射光谱重叠时,可能干扰检测特定的荧光团发射的能力。在这样的情况下,除了通过屏蔽感兴趣的荧光团的荧光减少信号检测灵敏性外,自体荧光也可通过提供假阳性结果减少检测的特异性。解决这个问题的一个途径是利用减少或最大限度地降低由生物材料的自体荧光所致的检测发射信号的装置。现有技术描述了通过在图像采集前使用生物材料的各种预处理来减少自体荧光的方法。然而,这样的技术也可降低生物材料自身的品质,且通常不适合于体内应用。或者,如果自体荧光发射自身不能减轻,则有可能通过任何获得的荧光图像的数字处理,最大限度地减少从自体荧光至图像数据的信号贡献。例如在含有来自 ...
【技术保护点】
一种提取生物材料中的目标荧光团的图像的方法,其中所述生物材料中目标荧光团发射的波段重叠自体荧光发射的波段,所述方法包括:用第一激发光照射所述生物材料以诱导由所述生物材料的自体荧光和所述目标荧光团的荧光二者产生的第一荧光发射并用第二激发光照射所述生物材料以诱导由所述生物材料的自体荧光产生的第二荧光发射;从所述第一荧光发射获得第一荧光图像和从所述第二荧光发射获得第二荧光图像;和处理所述第一和第二荧光图像以提取代表所述目标荧光团的第三荧光图像,其中在获得所述第一和第二荧光图像之前,调制所述第一和第二激发光的相对强度。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.09.29 US 62/0568301.一种提取生物材料中的目标荧光团的图像的方法,其中所述生物材料中目标荧光团发射的波段重叠自体荧光发射的波段,所述方法包括:用第一激发光照射所述生物材料以诱导由所述生物材料的自体荧光和所述目标荧光团的荧光二者产生的第一荧光发射并用第二激发光照射所述生物材料以诱导由所述生物材料的自体荧光产生的第二荧光发射;从所述第一荧光发射获得第一荧光图像和从所述第二荧光发射获得第二荧光图像;和处理所述第一和第二荧光图像以提取代表所述目标荧光团的第三荧光图像,其中在获得所述第一和第二荧光图像之前,调制所述第一和第二激发光的相对强度。2.权利要求1的方法,其中所述相对强度的调制包括:鉴定所述第一和第二荧光发射中的波长区,其中所述波长区是由荧光团引起的发射存在于所述第一荧光发射中而不存在于所述第二荧光发射中的区域;选择波长区以外的波段;计算在选择波段的第一和第二荧光发射的相对强度的比率;和调节所述第一和第二激发光的相对强度,以调节对应的第一荧光发射、第二荧光发射或二者,直至达到合适的计算比率。3.权利要求2的方法,其中波长区以外的波段包括在由第一和第二荧光发射产生的荧光光谱中的一个或多个波长。4.权利要求2或3的方法,其中计算所述第一和第二荧光发射的相对强度的比率包括将对应于所述第一荧光发射的曲线下面积值除以对应于所述第二荧光发射的曲线下面积值。5.权利要求1-4中任一项的方法,其中当所述目标荧光团是卟啉时,所述第一激发光具有约405nm的波长,而所述第二激发光具有约450nm的波长。6.权利要求2-5中任一项的方法,其中所述选择的波段是约600nm和其中所述计算的比率是约1。7.权利要求1-6中任一项的方法,其中处理所述第一和第二荧光图像以提取代表所述目标荧光团的第三荧光图像包括从所述第一荧光图像减去所述第二荧光图像。8.权利要求1-7中任一项的方法,其中所述生物材料由光漂白预处理。9.权利要求1-8中任一项的方法,其中所述目标荧光团是内生的、外生的或其组合。10.权利要求9的方法,其中所述内生荧光团是卟啉、卟啉前体、卟啉类似物、卟啉衍生物、卟啉缀合物、卟啉脂质体、卟啉纳米囊泡,或其组合。11.权利要求10的方法,其中所述卟啉包括粪卟啉、尿卟啉、原卟啉,或其组合。12.权利要求9的方法,其中所述外生荧光团是荧光染料、荧光诱导剂,或其组合。13.权利要求1-12中任一项的方法在组织化学、细胞化学,或其组合中的用途。14.一种提取生物材料中的目标荧光团的图像的系统,其中所述生物材料中目标荧光团发射的波段重叠自体荧光发射的波段,所述系统包含:用第一激发光照射所述生物材料,以诱导由所述生物材料的自体荧光和所述目标荧光团的荧光二者产生的第一荧光发射,并用第二激发光照射生物材料,以诱导由所述生物材料的自体荧光产生的第二荧光发射的装置;用于从所述第一荧光发射获得第一荧光图像和从所述第二荧光发射获得第二荧光图像的装置;用于在采集所述第一和第二荧光图像之前调制所述第一和第二激发光的相对强度的装置;和用于处理所述第一和第二荧光图像以提取代表所述目标荧光团的第三荧光图像的装置。15.权利要求14的系统,其中用于调制所述相对强度的装置包括:用于鉴定所述第一和第二荧光发射中的波长区的装置,其中所述波长区是由荧光团引起的发射存在于所述第一荧光发...
【专利技术属性】
技术研发人员:EH莫里亚马,史俊豪,
申请(专利权)人:诺瓦达克技术公司,
类型:发明
国别省市:加拿大,CA
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