用于诊断慢性瓣膜病的方法技术

本发明专利技术提供用于诊断动物慢性瓣膜病的方法。所述方法包括从动物获得样本；分析样本与慢性瓣膜病相关联的微RNA(miRNA)的量；比较样本中鉴定的miRNA的量和来自一个或多个未患有慢性瓣膜病的相当对照动物样本中存在的对应的miRNA的量；以及诊断患有慢性瓣膜病的动物的动物样本中存在的miRNA的量是否在对照动物的样本中差异性表达。

Methods for the diagnosis of chronic valvular disease

The present invention provides methods for the diagnosis of chronic valvular disease in animals. The method includes obtaining samples from animal; micro RNA analysis of samples with chronic valvular heart disease associated (miRNA) amount; one or more without chronic valvular disease is controlled corresponding to exist in the animal samples of the miRNA amount of the amount of miRNA in the sample identification and diagnosis from; and whether there is suffering from chronic valvular disease animal samples in the amount of miRNA in the control animal sample differential expression.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于诊断慢性瓣膜病的方法相关申请的交叉引用本申请要求提交于2015年2月17日的美国临时申请No.62/117189的优先权，该美国临时申请的公开内容以引用方式并入本文。
技术介绍

本专利技术整体涉及用于诊断和预测慢性瓣膜病的方法，并且特别涉及通过测量与慢性瓣膜病相关联的微RNA(miRNA)来诊断和预测慢性瓣膜病的方法。相关领域的描述心脏病是犬中最常见的疾病之一。慢性瓣膜病(CVD)(也称为退行性尖瓣病(DMVD))侵袭约9％的所有犬，且随着年龄而增加，使得总累计发病率大于40％。CVD的特征在于房室瓣(最常见地为二尖瓣)的进行性退化和畸变，从而导致早期二尖瓣关闭不全。这继而因二尖瓣反流而导致出现收缩期心杂音，其中二尖瓣闭合不充分致使血液流回左心房。受患的犬最终发展成左房室口容量超负荷、肺水肿、心房扩大和心室上心律不整。虽然外科手术处理或药物治疗受患瓣膜是可能的，但是宠物主人优选营养干预。早期检测和治疗是必要的，然而检测却可能因为缺乏症状而很困难。专利申请(PCT/US201344011)描述了利用差异性表达的基因和代谢物诊断CVD的方法。然而，基因表达方法需要收集心脏组织，这被视为是侵入性的。此外，mRNA不是非常稳定并且可能难以经由实验处理。此外，从血清测量代谢物可能是困难的，这取决于化合物的生物化学性质和稳定性。因此，仍然需要诊断和预测动物CVD的方法，以提供最适当和有效的治疗水平。
技术实现思路
因此，本专利技术的一个目的是提供诊断和预测动物慢性瓣膜病的方法。该目的和其它目的利用诊断和预测动物慢性瓣膜病的方法来实现，该方法包括：从动物获得样本；分析样本与慢性瓣膜病相关联的miRNA的量；比较样本中鉴定的miRNA的量和来自一个或多个未患有慢性瓣膜病的相当对照动物样本中存在的对应的miRNA的量；以及诊断患有慢性瓣膜病的动物的动物样本中存在的miRNA是否在对照动物的样本中差异性表达。本专利技术另外的和更多目的、特征和优点对于本领域的技术人员将是显而易见的。具体实施方式定义术语“动物”是指易患有或患有慢性瓣膜病的任何动物，包括人类、鸟类动物、牛科动物、犬科动物、马科动物、猫科动物、山羊类动物、狼类动物、鼠科动物、绵羊类动物或猪类动物。术语“miRNA”或“生物标志物”是指小单链非编码RNA分子，包括约21-25个核苷酸的那些，其水平或强度在生物样本中测量，其可用作标志物以诊断疾病状态。术语“差异表达”或“差异性表达”是指增加或上调的miRNA表达或指减少或下调的miRNA表达，如由样本中miRNA量的存在与否或变化所检测的那样。术语“相当对照动物”是指相同物种和类型的动物或在两个不同时间评估的个体动物。术语“对应的量”是指得自相当对照动物的miRNA的量，对应于诊断患有慢性瓣膜病的动物的miRNA，其中miRNA与慢性瓣膜病相关联。术语“伴侣动物”是指家养动物(例如狗、猫、鸟、兔子、豚鼠、雪貂、仓鼠、小鼠、沙鼠、消遣用马、奶牛、山羊、绵羊、驴、猪)以及为了陪伴、消遣、心理支持、性格外向展现和人类需要与其它物种的动物分享的所有其它功能而由人类饲养的更奇特的物种。在一个方面，伴侣动物可指狗或猫。在一个具体方面，伴侣动物可指狗。术语“诊断”意指确定动物是否易患慢性瓣膜病或者预测动物是否易于发展慢性瓣膜病。术语“早期”意指基于AmericanCollegeofVeterinaryInternalMedicine(ACVIM)诊断HF的指南，具有轻度到中度心脏扩大但无心力衰竭(HF)临床征象的B期心力衰竭(HF)。术语“末期”意指基于ACVIM指南具有中度HF临床征象的C期HF。如本文使用，本文使用的范围都是缩略范围，以免必须列出和描述范围内的每个数值。可选择范围内的任何适当的值，适当时，可选择上限值、下限值或该范围的端值。如本文所用，词语的单数形式包括复数，反之亦然，除非上下文明确另外规定。因此，提及“一个”、“一种”和“该”通常包括相应术语的复数形式。例如，提及“一种方法”包括提及多种此类“方法”。与此类似，词语“包括”、“包含”和“含有”都作包含性而非排他性地解释。同样地，术语“包括”、“包含”和“或”都应当视为包含性的，除非上下文明确禁止这一解释。在此公开的方法、组合物和其它进展不限于本文所述的具体方法、方案及试剂，因为正如本领域的技术人员将认识到的，这些具体方法、方案及试剂可改变。此外，本文所用的术语只出于描述具体实施方案的目的，并非旨在限制、也不会限制本文公开或受权利要求书保护的范围。除非另外定义，否则本文使用的全部科技术语、专门术语及首字母缩略词都具有本专利技术所属领域或使用这些术语的领域的普通技术人员所通常理解的含义。本文中引述或提及的所有专利、专利申请、出版物、技术和/或学术论文以及其它参考文献都在法律允许的范围内全文以引用方式并入本文。对这些参考文献的论述仅旨在总结其中作出的论断。我们并不承认任何这些专利、专利申请、出版物或参考文献或它们的任何一部分是相关的、实质性的或为现有技术。特别保留质疑这些专利、专利申请、出版物及其它参考文献是相关的、实质性的或为现有技术的任何断言的准确性和相关性的权利。本专利技术本专利技术人发现，本文所述的miRNA可存在于动物的生物样本中，并且可通过指示或预测慢性瓣膜病的阈值而将样本中miRNA的量用作诊断慢性瓣膜病的生化指标。这样，本发现允许兽医和其它临床医生对样本中的这些“生物标志物”进行测试，并且确定动物是否易患或患有慢性瓣膜病以及是否需要进一步诊断或治疗。在已确定需要进一步诊断或治疗的情况下，此类进一步诊断或治疗的成本和风险可为合理的。根据上文，本专利技术提供用于诊断动物慢性瓣膜病的方法。所述方法包括：从动物获得样本；分析样本与慢性瓣膜病相关联的微RNA(miRNA)的量；比较样本中鉴定的miRNA的量和来自一个或多个未患有慢性瓣膜病的相当对照动物样本中存在的对应的miRNA的量；以及诊断患有慢性瓣膜病的动物的动物样本中存在的miRNA的量是否在对照动物的样本中差异性表达。在一个实施方案中，用于诊断动物慢性瓣膜病的方法可包括：从动物获得样本；分析样本与慢性瓣膜病相关联的miRNA的量；比较样本中鉴定的miRNA的量和来自一个或多个未患有慢性瓣膜病的相当对照动物样本中存在的对应的miRNA的量；以及诊断患有慢性瓣膜病的动物的动物样本中存在的miRNA的量是否大于对照动物样本中存在的miRNA的量。在另一个实施方案中，用于诊断动物慢性瓣膜病的方法可包括：从动物获得样本；分析样本与慢性瓣膜病相关联的miRNA的量；比较样本中鉴定的miRNA的量和来自一个或多个未患有慢性瓣膜病的相当对照动物样本中存在的对应的miRNA的量；以及诊断患有慢性瓣膜病的动物的动物样本中存在的miRNA的量是否小于对照动物样本中存在的miRNA的量。在各种实施方案中，可对一个或多个相当对照动物的miRNA进行评估，所述动物不为针对慢性瓣膜病而评估的动物并且为已确定未患有慢性瓣膜病的动物，并且将此类评估的结果用作基线值以与对miRNA作评估的动物的结果进行比较。在一些实施方案中，miRNA的基线值可通过评估多个相当对照动物来测定。在另一个实施方案中，可在整个动物生命的各个时段测定动物miRNA的量本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于诊断动物慢性瓣膜病的方法，包括：a.从所述动物获得生物样本；b.分析所述生物样本与慢性瓣膜病相关联的微RNA(miRNA)的量；c.比较所述样本中鉴定的所述miRNA的量和来自一个或多个未患有慢性瓣膜病的相当对照动物样本中存在的对应的所述miRNA的量；以及d.诊断患有慢性瓣膜病的动物的动物样本中存在的所述miRNA的量是否大于所述对照动物样本中存在的所述miRNA的量。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.02.17 US 62/117,1891.一种用于诊断动物慢性瓣膜病的方法，包括：a.从所述动物获得生物样本；b.分析所述生物样本与慢性瓣膜病相关联的微RNA(miRNA)的量；c.比较所述样本中鉴定的所述miRNA的量和来自一个或多个未患有慢性瓣膜病的相当对照动物样本中存在的对应的所述miRNA的量；以及d.诊断患有慢性瓣膜病的动物的动物样本中存在的所述miRNA的量是否大于所述对照动物样本中存在的所述miRNA的量。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述样本是血清样本。3.根据权利要求1所述的方法，其中所述诊断基于测定两种或更多种与慢性瓣膜病相关联的miRNA的量。4.根据权利要求1所述的方法，其中所述诊断基于测定三种或更多种与慢性瓣膜病相关联的miRNA的量。5.根据权利要求1所述的方法，其中所述诊断基于下调的第二miRNA的量。6.根据权利要求1所述的方法，其中所述miRNA选自miR-103、miR-98、let-7c、let-7b、以及它们的组合。7.根据权利要求1所述的方法，其中所述动物是伴侣动物。8.根据权利要求7所述的方法，其中所述伴侣动物是...

【专利技术属性】
技术研发人员：Q·李，
申请(专利权)人：雀巢产品技术援助有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士,CH