一种调血脂活性多糖的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种从红毛藻中提取调血脂活性多糖的方法，包括以下步骤：步骤一、抽提：将新鲜红毛藻清洗、烘干、粉碎，得到藻粉，加入蒸馏水，抽提浓缩得到浓缩液；步骤二、醇沉：滴加乙醇，离心，取沉淀，冷冻干燥，制得粗多糖；步骤三、凝胶层析：将所述粗多糖溶解于蒸馏水中，上样，洗脱，跟踪检测，收集洗脱峰，透析脱盐，冷冻干燥，获得初步纯化多糖；步骤四、离子交换层析：将所述初步纯化多糖溶解于蒸馏水中，上样，洗脱，跟踪监测，收集洗脱峰，透析脱盐，冷冻干燥，获得纯化多糖，即制得调血脂活性多糖。本发明专利技术制备的活性多糖是一种天然的调血脂物质，其调血脂效果明显。

Preparation method of blood lipid regulating active polysaccharide

The invention discloses a method for regulating blood lipid extraction from active polysaccharides from Bangia Fusco purpurea, which comprises the following steps: step one: extraction, fresh red algae cleaning, drying and crushing by algae powder, add distilled water, extraction concentration to obtain concentrated solution; step two: adding ethanol and ethanol precipitation, centrifugal take, precipitation, freeze drying, prepared crude polysaccharide; step three, gel chromatography: the crude polysaccharide was dissolved in distilled water sample, elution, detection and tracking, collecting the eluting peak, dialysis and freeze drying to obtain polysaccharide, purification; step four, ion exchange chromatography, the the purification of polysaccharide dissolved in distilled water sample, eluting, tracking and monitoring, collecting the eluting peak, dialysis and freeze drying, the purified polysaccharide is prepared hypolipidemic activity of polysaccharides. The active polysaccharide prepared by the invention is a natural blood regulating substance, and the effect of regulating blood fat is obvious.

【技术实现步骤摘要】
一种调血脂活性多糖的制备方法
本专利技术涉及活性多糖的
，尤其涉及一种调血脂活性多糖的制备方法。
技术介绍
血脂是指血液中的脂类物质，包括中性脂肪和类脂类物质，其中甘油三酯和胆固醇属于中性脂肪，磷脂、固醇、类固醇类物质属于类脂。它们均广泛存在于人体之中，是人体生命细胞进行基础代谢功能的必须物质。高血脂症是人体脂类代谢或转运发生异常，使得血液中一种或多种脂质含量超过正常范围的一类全身性疾病。随着现代医学的发展，对于高血脂的发病机制以及产生的影响都有了更加深入的了解，所以研究实用有效的降脂方法对于高血脂症的预防和治疗极具意义，当血脂过高或者已经引起某些疾病的时候，就要适当的采取药物治疗，来达到快速降低血脂的目的。目前用于临床治疗的大多数降低血脂的药物主要可以分为两类：他汀类(statins)和贝特类(fibrates)。各种西药的作用机理都不尽相同，临床上针对患者不同的身体状态，通常几类药物结合治疗。但西药的副作用，例如：腹痛、便秘、胃肠胀气，疲乏无力，头痛等逐渐引起人们的注意。所以亟需寻找一种天然的可调节血脂的药物。红毛藻具有降血糖、降血脂、预防心脑血管疾病等功效，具有较高的食用和药用价值。有鉴于此，本专利技术人研究和设计了一种从红毛藻中提取调血脂活性多糖的方法。
技术实现思路
本专利技术目的是提供一种从红毛藻中提取调血脂活性多糖的方法，制备工艺简单，成本低，所提取的多糖有较高的降血脂活性。为了解决上述目的，本专利技术采用的技术方案是：一种从红毛藻中提取调血脂活性多糖的方法，包括以下步骤：步骤一、抽提：将新鲜红毛藻清洗、烘干、粉碎，得到藻粉，加入15～20倍体积量的蒸馏水，于90℃下水浴抽提1～3次，每次2h～3h，离心、合并上清液，将上清液蒸发浓缩得到浓缩液；步骤二、醇沉：向所述浓缩液中缓慢滴加乙醇，至乙醇终浓度体积分数为75％，静置过夜后，10000r/min离心10min，取沉淀完全溶解于适量蒸馏水中，冷冻干燥，制得粗多糖；步骤三、凝胶层析：将所述粗多糖溶解于蒸馏水中，上样于经0.1MNaCl溶液平衡的凝胶层析柱上，用0.1MNaCl溶液洗脱，苯酚硫酸法跟踪检测，收集洗脱峰，透析脱盐，冷冻干燥，获得初步纯化多糖；步骤四、离子交换层析：将所述初步纯化多糖溶解于蒸馏水中，上样于阴离子交换层析柱，依次采用0.1M、0.3M、0.5M浓度的NaCl溶液梯度洗脱，苯酚-硫酸法跟踪监测，分别收集不同浓度下的洗脱峰，透析脱盐，冷冻干燥，获得纯化多糖，即制得调血脂活性多糖。优选地，所述步骤一中，还包括脱色：在抽提前，向所得藻粉加入3～5倍体积量的甲醇溶液，反复清洗三次，浸泡过夜，浸泡后4000r/min，离心15分钟，所得沉淀再进行抽提。优选地，所述步骤一中，烘干温度为50℃。优选地，所述步骤一中，加入蒸馏水，于90℃水浴抽提2小时，4000r/min离心20分钟后取上清液，沉淀重复热水抽提2小时，再离心，合并两次离心的上清液后进行蒸发浓缩。优选地，所述步骤一及步骤二之间，还包括Sevage法除蛋白：将三氯甲烷与正丁醇按照体积比4：1的比例混合配制成Sevage试剂，再将粗多糖浓缩液与Sevage试剂按照体积比5：1的比例混合后，剧烈振荡40分钟，8000r/min离心除去蛋白质沉淀层，将上清液回收按照同样方法，重复三次，分离取出上清液，备用。优选地，所述步骤三中，采用SephadexG75凝胶柱对所述粗多糖进行纯化，具体操作如下：上样粗多糖液浓度5mg/mL，上样量为3mL，用0.1MNaCl溶液洗脱；采用自动收集器接收，接收50管，每管5mL；用苯酚硫酸法于490nm跟踪检测洗脱情况，以管号为横坐标，吸光度值为纵坐标，做洗脱图；合并洗脱峰，透析脱盐，冷冻干燥，制得初步纯化多糖。优选地，所述步骤四中，采用DEAECellulose52凝胶柱对所述初步纯化多糖进一步纯化，具体操作如下：将样品配制成3mg/mL溶液，上样量为5mL，分别用0.1M、0.3M、0.5M浓度的NaCl溶液梯度洗脱，每个洗脱液，收集40管，每管收集5mL；用苯酚硫酸法跟踪监测，以管号为横坐标，吸光度值为纵坐标，做洗脱图；合并各洗脱峰，透析脱盐，冷冻干燥，制得调血脂活性多糖。本专利技术具有以下有益效果：本专利技术从红毛藻中提取出了一种调血脂活性多糖，该活性多糖是一种天然的物质，具有明显调血脂的效果。本法得到的纯化的红毛藻多糖片段SF3，药理证明其具有抑制胰脂肪酶、降低甘油三酯(TG)和胆固醇(TC)作用，即具有调节血脂活性。附图说明图1为本专利技术实施例中提取的活性多糖的凝胶过滤洗脱图；图2为本专利技术实施例中初步纯化的活性多糖的阴离子交换层析柱洗脱图；图3为本专利技术实施例中最终纯化的红毛藻多糖对胰脂肪酶活性的抑制作用图；图4为本专利技术实施例中最终纯化的红毛藻多糖片段SF3对加入胆固醇的HepG2细胞中甘油三酯(TG)含量的影响图；图5为本专利技术实施例中最终纯化的红毛藻多糖片段SF3对加入胆固醇的HepG2细胞中总胆固醇(TC)含量的影响图。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术进行进一步描述，但本专利技术的保护范围并不仅限于此：实施例1：抑制剂的提取所述新鲜红毛藻采购于福建莆田。利用水提醇沉法进行提取，具体操作如下：将新鲜红毛藻清洗干净，置于烘箱内50℃烘干，之后用粉碎机粉碎。干藻粉加入3～5倍体积量的甲醇，持续的搅拌，反复清洗三次，以保证脱色的充分，浸泡过夜。浸泡后4000r/min离心15分钟，沉淀取出加入蒸馏水90℃水浴加热2小时，4000r/min离心20分钟后取上清液，沉淀重复热水抽提2小时再离心，合并两次离心的上清液，蒸发浓缩，工作温度为50℃，将提取液浓缩至原体积的1/10。加入乙醇至终浓度75％(V/V)，静置过夜。10000r/min离心10分钟，取沉淀完全溶解于少量蒸馏水中，冷冻干燥，制得粗多糖。Sevage法除蛋白：将三氯甲烷与正丁醇按照体积比4：1的比例混合配制成Sevage试剂，再将粗多糖浓缩溶液与Sevage试剂按照体积比5：1的比例混合后，剧烈振荡40分钟，8000r/min离心除去蛋白质沉淀层，将上清液回收按照同样方法，重复三次，分离取出上清液，除蛋白。实施例2：多糖的凝胶过滤纯化采用SephadexG75凝胶柱(C16/100)对粗多糖进行纯化，具体操作如下：上样糖液浓度5mg/mL，上样量为3mL，用0.1MNaCl溶液洗脱。采用自动收集器接收，接收50管，每管5mL。用苯酚硫酸法于490nm跟踪检测洗脱情况，以管号为横坐标，吸光度值为纵坐标，做洗脱图。合并洗脱峰，透析脱盐，冷冻干燥，制得初步纯化多糖F。结果如图1所示，红毛藻粗多糖的洗脱曲线得到单一对称峰，由于在纯化之前对粗多糖进行了蛋白质脱除，所以洗脱得到一个单一组分，将其命名为F，说明F组分中是分子量较为均一的多糖。实施例3：抑制剂F的阴离子交换层析采用DEAECellulose52凝胶柱对初步纯化多糖F进行进一步纯化，具体操作如下：将样品配制成3mg/mL溶液，上样量为5mL，分别用0M(蒸馏水)、0.1M、0.3M、0.5M浓度的NaCl溶液梯度洗脱，每个洗脱液，收集40管，每管收集5mL。同样用苯酚硫酸法跟踪监测，以管号为横坐标，吸光度值为纵坐标，做洗脱图。合并各洗脱本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从红毛藻中提取调血脂活性多糖的方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤一、抽提：将新鲜红毛藻清洗、烘干、粉碎，得到藻粉，加入15～20倍体积量的蒸馏水，于90℃下水浴抽提1～3次，每次2h～3h，离心、合并上清液，将上清液蒸发浓缩得到浓缩液；步骤二、醇沉：向所述浓缩液中缓慢滴加乙醇，至乙醇终浓度体积分数为75%，静置过夜后，10000r/min离心10min，取沉淀完全溶解于适量蒸馏水中，冷冻干燥，制得粗多糖；步骤三、凝胶层析：将所述粗多糖溶解于蒸馏水中，上样于经0.1M NaCl溶液平衡的凝胶层析柱上，用0.1M NaCl溶液洗脱，苯酚硫酸法跟踪检测，收集洗脱峰，透析脱盐，冷冻干燥，获得初步纯化多糖；步骤四、离子交换层析：将所述初步纯化多糖溶解于蒸馏水中，上样于阴离子交换层析柱，依次采用0.1M、0.3M、0.5M浓度的NaCl溶液梯度洗脱，苯酚‑硫酸法跟踪监测，分别收集不同浓度下的洗脱峰，透析脱盐，冷冻干燥，获得纯化多糖，即制得调血脂活性多糖。

【技术特征摘要】
1.一种从红毛藻中提取调血脂活性多糖的方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤一、抽提：将新鲜红毛藻清洗、烘干、粉碎，得到藻粉，加入15～20倍体积量的蒸馏水，于90℃下水浴抽提1～3次，每次2h～3h，离心、合并上清液，将上清液蒸发浓缩得到浓缩液；步骤二、醇沉：向所述浓缩液中缓慢滴加乙醇，至乙醇终浓度体积分数为75%，静置过夜后，10000r/min离心10min，取沉淀完全溶解于适量蒸馏水中，冷冻干燥，制得粗多糖；步骤三、凝胶层析：将所述粗多糖溶解于蒸馏水中，上样于经0.1MNaCl溶液平衡的凝胶层析柱上，用0.1MNaCl溶液洗脱，苯酚硫酸法跟踪检测，收集洗脱峰，透析脱盐，冷冻干燥，获得初步纯化多糖；步骤四、离子交换层析：将所述初步纯化多糖溶解于蒸馏水中，上样于阴离子交换层析柱，依次采用0.1M、0.3M、0.5M浓度的NaCl溶液梯度洗脱，苯酚-硫酸法跟踪监测，分别收集不同浓度下的洗脱峰，透析脱盐，冷冻干燥，获得纯化多糖，即制得调血脂活性多糖。2.如权利要求1所述的一种从红毛藻中提取调血脂活性多糖的方法，其特征在于：所述步骤一中，还包括脱色：在抽提前，向所得藻粉加入3～5倍体积量的甲醇溶液，反复清洗三次，浸泡过夜，浸泡后4000r/min，离心15分钟，所得沉淀再进行抽提。3.如权利要求1所述的一种从红毛藻中提取调血脂活性多糖的方法，其特征在于：所述步骤一中，烘干温度为50℃。4.如权利要求1所述的一种从红毛藻中提取调血脂活性多糖的方法，其特征在于：所述步骤一中，加入蒸馏水，于90℃水浴抽提2小时，40...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜泽东，余刚，宋田源，倪辉，杨远帆，李利君，朱艳冰，杜希萍，蔡慧农，
申请(专利权)人：集美大学，
类型：发明
国别省市：福建,35